Primer reporte de Fusarium oxysporum f. sp. niveum raza 1

Primer reporte de Fusarium oxysporum f. sp. niveum raza 1 como agente causal de la marchitez vascular de la sandía en México Autores: Vargas-Arispuro, Irasema; Ramírez-Bustos, Irene Iliana; Arratia Castro, Alda Alejandra; Bárcena-Santana, Daniel; Fer...

Primer reporte de Fusarium oxysporum f. sp. niveum raza 1 como agente causal de la marchitez vascular de la sandía en México Autores: Vargas-Arispuro, Irasema; Ramírez-Bustos, Irene Iliana; Arratia Castro, Alda Alejandra; Bárcena-Santana, Daniel; Fernández Herrera, Ernesto Presenta: M.C. Ana Laura Moreno Robles Introducción  Introducción Fusarium Marchitez oxysporum f. vascular en sp. niveum sandía (Fon) Puede afectar al 100% del cultivo de un día a otro Raza 1 Inoculación reconodida por de cultivares su virulencia diferenciales  Introducción Hermosill Razas Raza 0 o, Sonora Inoculación Cultivos de sandía 0, 1, 2 y 3 de cultivo con síntomas de diferencial marchitez  Objetivo Identificar la raza de Fusarium oxysporum f. sp. niveum causante de la marchitez, necrosis vascular y muerte de plantas de sandías en Sonora, México por el uso de primers específicos y la inoculación de aislados en cultivares diferenciales de sandía disponibles comercialemente Materiales y métodos  Aislamiento e identificación Siembra de los Cultivos puros a Aislamien Incubación fragmentos de tejido partir de una sola to 28 °C / 5 días en medio PDA espora UESFON01, UESFON02 y UESFON03 Microscopio óptico 40X Identificació n Primers PCR Raza 1, 2 y 3  Identificación molecular de razas de F. oxysporum f. sp. niveum: Extracción de DNA Trozo de micelio Maceración con Incubación a 60 Extracción con de cada uno de los buffer de °C por 30 cloroformo-alcohol tres aislados extracción CTAB minutos isoamílico (24:1) fúngicos 3% Precipitación de 15 µL de RNAsa A Incubación 37 °C capa acuosa de (1 µg/mL) por 10 minutos DNA con isopropanol a -20 °C Lavado con etanol Resuspensión en 30 µL Electroforesis en gel de al 70% y secado a de agua libre de agarosa 1% y temperatura nucleasas y almacenaje espectrofotometría ambiente a -20 °C (A260/A280) Identificación molecular de razas de F. oxysporum f. sp. niveum: PCR Evaluador de oligos Evaluador de oligos Evaluador de oligos  PCR Volumen 25 µL 1 µL de DNA 1X de buffer 2 mM MgCl2 0,2 µM de 0,2 mM de cada 1 unidad de cada par de nucleótido Taq primers trifosfatado (dNTP) polimerasa Condiciones de amplificación Fon-1/ Desnaturalización inicial a 94 Fon-2 °C/90 s; 30 ciclos de 94 °C/30 s, 1 62 °C/30 s y 72 °C/60 s Extensión final de 72 °C/10 min FONSIX6F/ Desnaturalización inicial a 95 FONSIX6R °C/3 min; 30 ciclos sucesivos 2 de 94 °C/ 1 min, 66 °C/1 min y 72 °C/1 min Extensión final a 72 °C/10 min FNR3-F/FNR3-R Desnaturalización inicial a 95 °C/3 min; 35 ciclos a 95 °C/30 s, 3 63 °C/30 s, 72 °C/40 s Extensión final a 72 °C/6 min Análisis Productos de PCR Análisis por electroforesis en gel de agarosa 1% teñidos con bromuro de etidio (2 mg/µL) y se visualizaron en un transiluminador de UV Purificación y secuenciación Los amplicones de los primers Fon-1/Fon-2 se purificaron y secuenciaron en ambas direcciones, usando el respectivo par de iniciadores por separado Secuenciación Secuenciador automatizado (3500 y 3100 Series Genetic Analyzer, Thermo Fisher Scientific, EUA) Resultados y discusión  Identificación molecular con los primers específicos UESFON01 UESFON02 UESFON3 UESFON01 UESFON02 UESFON3 UESFON01 UESFON02 UESFON3 Confirmación de que los La amplificación de estos fragmentos con aislados UESFON01, los primers FONSIX6F/FONSIX6R y UESFON02 y UESFON3 FNR3-F/FNR3-R pertenecen a la forma especial niveum  Identificación molecular con los primers específicos BLAST Secuencias de los amplicones 98 a 100% de similitud obtenidos con los primers Fon- 1/Fon-2 (OP060462, OP060463, OP060464) a partir del ADN de los aislados UESFON01, EU603504,1 UESFON02 y UESFON03 Fusarium oxysporum f. sp. NCBI niveum isolate Fon-H0103 RAPD marker genomic sequence Identificación molecular con los primers específicos Producción de proteínas efectoras en el SIX6 xilema que favorecen la virulencia o genera resistencia. SIX6 No está presente en la raza 2. Diseñaron marcadores (FNR3-F/ FNR3- Hudson R) que amplificaban la región de 511 et al. pb, donde está un cromosoma de 2021 patogenicidad ausente en la raza 3, pero presente en las razas 1 y 2. Hudson La raza 1 es la única que amplifica los et al. tres pares de primers. 2021 Conclusiones  Conclusiones Se identificaron los aislados UESFON01, UESFON02 y UESFON03 como pertenecientes a la raza 1. Sin embargo, para la identificación de la raza 0 se debe realizar una inoculación diferencial para poder diferenciar entre la raza 0 y 1. Se identificó a Fusarium oxysporum f. sp. niveum raza 1 com agente causal de la marchitez y muerte de plantas en el cultivo de sandía en Hermosillo, Sonora, México.