Práctica 1. Empacado de Material y Esterilización por Calor Seco - ESTUDIO ELDA (1er Parcial) PDF

PRACTICA 1. EMPACADO DE MATERIAL Y ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO OBJETIVO. El alumno aprenderá el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiología, así como el procedimiento de la esterilización por calor seco de estos. INTRODUCCIÓN. La esterilización es el p...

PRACTICA 1. EMPACADO DE MATERIAL Y ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO OBJETIVO. El alumno aprenderá el procedimiento para empacar diversos materiales de uso en microbiología, así como el procedimiento de la esterilización por calor seco de estos. INTRODUCCIÓN. La esterilización es el proceso de destruir todas las formas de vida microbiana; un objeto esterilizado, en el sentido microbiológico, está libre de microorganismos vivos. El término estéril, esterilizar y esterilización se refieren a la ausencia o destrucción completa de los microorganismos y no se utilizan en sentido relativo, una sustancia o un objeto están estériles o no están estériles. SUSTANCIAS MATERIAL Detergente Matraces. Agua destilada Tubos de ensaye Horno a 170°C Pipetas Termómetro Cajas de petri Papel estraza Algodón Escobillones EMPACADO DEL MATERIAL Antes de iniciar un empaque del material que se desea esterilizar, es necesario que todas las prácticas que se realicen estén en condiciones de esterilidad y se debe, en primer lugar, limpiar el área de trabajo con alguna sustancia desinfectante y encender el mechero. Se emplearán distintos agentes germicidas y desinfectantes (soluciones de hipoclorito de sodio, cloroxilenol, formaldehído, etc.) para desinfectar superficies. El material a esterilizar se deberá de empacar correctamente con papel estraza Una de las razones de la importancia del papel en nuestra vida cotidiana es la enorme cantidad de usos que se le pueden dar a este producto. De la misma manera, el papel puede adaptarse a las diferentes utilidades que se vayan a realizar llegando a contabilizarse hasta 457 variedades diferentes de papel. Las variedades dependen de una serie de características físicas que hacen que el papel se pueda adaptar a diferentes usos como: Impedir el ingreso de microorganismos al interior, sellar en forma completa para evitar contaminación, soportar la tracción y manipulación habitual sin sufrir deterioro y hacer permeable al método de esterilización seleccionado. Todo esto se logra empacando en primer lugar en campo de algodón, y posteriormente en empaque mixto o en polipropileno de acuerdo con el tamaño del material. ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO (180°C durante 1 hora) Este proceso se aplica a todo material cuya resistencia térmica sea superior a los 150°C (material de vidrio o metal con cierre hermético, cera, vaselina, aceite, talco). La muerte microbiana se produce por una esterilización, ya sea como consecuencia de mecanismos de transferencia de energía, además de la oxidación. En la esterilización por calor seco existe una destrucción de los microorganismos oxidando sus constituyentes químicos, desnaturalizando las proteínas y los ácidos nucleicos de las células, así como fragmentando las membranas celulares. Para materiales que deben permanecer secos como ciertos instrumentos de vidrio de laboratorio tales como: cajas de petri, pipetas, así como aceites, polvos (por ser impermeables al vapor), los materiales que no se pueden esterilizar por calor seco son: Material textil (algodón, sedas, lino, etc.), gomas y materiales sintéticos. Otras formas útiles de calor seco incluyen incineración para objetos que deben ser destruidos y flameados por pasaje de agujas o pequeños instrumentos a través de la llama de un mechero bunsen. PROCEDIMIENTO. I) EMPACADO DEL MATERIAL l.- Lava el material de laboratorio, principalmente la cristalería con detergente (Fácilmente se contamina con esporas difíciles de eliminar) enjuaga con abundante agua de la llave y en seguida con agua destilada. 2.- Secar el material utilizando papel absorbente para acelerar el secado. 3.-Empaca el material correctamente A) CAJAS DE PETRI Corta el papel estraza, en forma de rectángulos adecuados para la cantidad de 2 a 3 cajas. Colócalas en la parte central y envuélvelas según te indique tu profesor: Se toman los extremos de papel y se unen, se hace un nuevo doblez recargando ligeramente en la caja para marcarlo, los extremos se doblan en forma triangular. Ya en forma triangular se doblan hacia atrás quedando listas para esterilizar. B) PIPETAS Introduce una pequeña porción de algodón en el cuello de la pipeta, procurando que quede lo suficientemente apretada. Con papel estraza envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira hacia arriba hasta el final de la pipeta. C) TUBOS DE ENSAYE. Se toma el tubo con la mano izquierda y con la derecha el tapón de algodón. Coloca algodón en la boca del tubo a 1/5 parte de la longitud del mismo procurando que quede bien apretado, deposítalos en recipientes adecuados, tápalos con papel aluminio. D) MATRACES. Tapa el cuello del matraz con algodón, lo suficientemente apretado para evitar que se destape (se tapa en la misma forma que el tubo). Como protección coloca un gorrito de papel aluminio y átalo con cinta. E) MATERIAL METÁLICO El asa de platino, tijeras, bisturí, material quirúrgico no es necesario empacarlo para su esterilización. II) ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO 1.- Las normas de procedimiento de la Institución establecerán las condiciones de trabajo según la carga, volumen, peso, resistencia térmica del material. Es imprescindible respetar los parámetros obtenidos en la validación del procedimiento. La temperatura de esterilización por calor seco deberá estar entre 150°C a 180 °C y el tiempo de aplicación será de una hora o más. 2.- El material a esterilizar se deberá cargar con el esterilizador frío, teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones: Cada unidad deberá quedar separada de las vecinas. Los materiales no deberán estar en contacto con las paredes, piso y techo de la estufa. La carga de la estufa será homogénea y no deberá superar el 80% de la capacidad total de la cámara. 3.- Colocar el material dentro de la estufa. Encender la estufa, verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo (l hora) y temperatura(180°C) se encuentren en la posición correcta. Esperar hasta que los instrumentos de medición alcancen la temperatura seleccionada para el ciclo. 4.- Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzará a descontar el tiempo de esterilización. Cumplido el tiempo de exposición se apagará la estufa. La descarga de la estufa se efectuará una vez que el material se haya enfriado. 5.-Durante el ciclo de Esterilización no deberá abrirse la puerta de la estufa porque ello implicaría abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo, además de que el cambio de temperatura rompería la cristalería. 6.- Una vez alcanzada la temperatura de 160°C en el horno con aire caliente coloca todo el material que se empacó y toma el tiempo de 1 hora para su esterilización CUESTIONARIO 1 1.- ¿Por qué antes de una esterilización es necesario lavar y desinfectar el material? 2.- ¿Es necesario un secado del material en el horno antes del empacado con papel estraza? ¿Por qué? 3.- ¿Qué finalidad tiene el empacado antes de la esterilización? 4.- ¿Puede ser utilizado otro tipo de papel que el de estraza? ¿Por qué? 5.- ¿Qué finalidad tienen los tapones de algodón que se colocan en los extremos de las pipetas y de los Matraces Erlenmeyer? 6.- ¿Qué desventaja tiene el utilizar la esterilización por calor seco en este laboratorio? 7.- ¿Cómo actúa la esterilización por calor seco en los microorganismos? 8.- ¿Cuáles son las condiciones necesarias de tiempo y temperatura para esterilizar por calor seco?  PRACTICA 2. ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO OBJETIVO: El alumno conocerá y aplicará el procedimiento de esterilización por calor húmedo, así como las ventajas del procedimiento. INTRODUCCIÓN La temperatura elevada, combinada con una humedad elevada, es uno de los métodos más efectivos para matar microorganismos. El calor húmedo mata a los microorganismos coagulando sus proteínas. Es mucho más rápido y efectivo que el calor seco. El vapor a presión proporciona temperaturas por encima de las que se pueden obtener al hervir. Tiene la ventaja de un calentamiento rápido, así como penetración rápida y abundante humedad. El aparato a esterilizar que utiliza vapor de agua a presión regulada se denomina autoclave. Consta de una cámara de doble pared que se llena de vapor saturado libre de aire y se mantiene a la temperatura indicada y a la presión establecida durante un periodo de tiempo determinado. Este método es adecuado para esterilizar aparatos que tienen hule, jeringas que contienen metal, para medios de cultivo que contienen un azúcar especial dextrosa. La autoclave se puede sustituir por la olla de presión. Los métodos de esterilización son por: calor (ya sea seco o húmedo), filtración, radiaciones y agentes químicos. ESTERILIZACIÓN POR CALOR La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los métodos más efectivos para destruir microorganismos. Es importante distinguir entre calor húmedo y calor seco en cualquier procedimiento de control microbiano; el calor húmedo mata a los microorganismos porque coagula sus proteínas y es más rápido y efectivo que el seco, que los destruye al oxidar sus constituyentes químicos. Los procedimientos prácticos se dividenconvenientemente en dos categorías: 1. El calor húmedo: que comprende los métodos de esterilización por vapor a presión (autoclave) y la tindalización o esterilización fraccionada. 2. El calor seco: que comprende la esterilización con aire seco o caliente (horno) y la incineración. ESTERILIZACIÓN POR FILTRACIÓN Algunos materiales, particularmente los líquidos biológicos como el suero de los animales o las soluciones de sustancias como las enzimas y algunas vitaminas o antibióticos, son termolábiles, o sea, se destruyen por el calor; asimismo, otros agentes físicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprácticos para esterilizarlos, en consecuencia, queda la opción de hacerlo por filtración. Los filtros también se utilizan para esterilizar aire, y un ejemplo cotidiano en el laboratorio de microbiología corresponde al uso de las torundas de algodón que se emplean para tapar frascos, matraces, tubos y pipetas; el aire circula a través del algodón y los microorganismos que están suspendidos en el aire quedan atrapados en el algodón y no pasan al interior delmaterial (ni tampoco salen del cultivo al exterior) a menos que el algodón este húmedo. ESTERILIZACIÓN POR RADIACIONES Las radiaciones más comunes que se usan para destruir a los microorganismos son: 1. La luz ultravioleta. Se utiliza principalmente para la esterilización de áreas y superficies, y cuya principal limitación es que debe ser absorbida para ser efectiva, no pasa a través del vidrio transparente u objetos opacos e irrita los ojos y la piel. 2. La luz infrarroja. Se emplea para reducir la contaminación de ciertos alimentos y se aplica durante la preparación de los mismos; el efecto esterilizante de este tipo de radiaciones se debe a la energía térmica que imparte de manera rápida, y por ello oxidan los componentes celulares de los microorganismos. 3. Radiaciones ionizantes. Se utilizan para la esterilización de material quirúrgico sensible al calor y otros materiales usados en medicina. ESTERILIZACIÓN GASEOSA Algunos gases ejercen una poderosa acción letal sobre los microorganismos, ya que destruyen varias enzimas y estructuras que son vitales para la duplicación de los mismos. El óxido de etileno es un gas que se difunde a través de los materiales porosos y penetra fácilmente la mayoría de los plásticos, tiene gran utilidad en la esterilización de artículos desechables, como las jeringas de plástico, así como los instrumentos voluminosos, tales como las máquinas cardiopulmonares. La esterilización se lleva a cabo a una temperatura de 50 +/- 2 °C, con una humedad relativa de 33% durante tres horas; los productos que han sido sometidos a este tratamiento pueden usarse hasta después de 24 horas de haber sido esterilizados, debido a que este gas es muy tóxico, especialmente para los tejidos. Finalmente, se debe recordar, además, que el material biológico utilizado en microbiología (bacterias, hongos, etc.) NO debe ser desechado del laboratorio sin previa esterilización, pues este material ya sea patógeno o no, está contribuyendo a un desequilibrio ecológico cuyas consecuencias no se pueden determinar. MATERIAL SUSTANCIAS Reloj Agua de la llave Autoclave u olla de presión Extran 3 Soporte universal 2 mechero bunsen Material de cristalería limpio, seco y empacado PROCEDIMIENTO C) ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO (15 LB, 121°C X 15 MIN) 1.- Lava el material que te proporcione tu profesor con mezclas adecuadas como detergente, mezcla crómica (disolución de dicromato sódico o potásico en ácido sulfúrico) con concentraciones adecuadas tomando en cuenta lo sucio del material, seca en estufa o en forma manual con papel absorbente y empácalo. Tenlo listo para su esterilización. 2.- Coloca el agua necesaria en la autoclave u olla de presión hasta la marca e introduce unas gradillas metálicas que servirán de base al material a esterilizar. Coloca el material a esterilizar dentro de la autoclave u olla de presión, evitando que el material toque las paredes. 3.- Cierra la autoclave u olla de presión, cuidando de dejar abierta la válvula de salida de vapor que ayudará a expulsar el aire contenido dentro y que éste es desplazado por el vapor que se produce; si el aire no fue eliminado totalmente de la autoclave, el manómetro aumentará a 15 libras. 4.- Cierra la válvula cuando el vapor sea continuo. La temperatura de 105°C indica que está libre de aire. Vigila el termómetro. Cuando vaya en 120°C, mantenla durante 15 minutos para que se efectúe la esterilización (15 libras de presión). Transcurrido este tiempo se corta la fuente de calor. 5.-Deja enfriar hasta que el manómetro marque cero. Abre la válvula de salida de vapor, para expulsar el vapor restante. Abre la autoclave y retira el material. 6.- Si el material no está en estado líquido la válvula se puede abrir rápido a la salida de vapor, pero si está en estado líquido la rápida pérdida de presión las hace hervir o bien saltar los tapones. Por lo tanto, se espera unos minutos a que se enfríe perfectamente CUESTIONARIO 2 1. ¿Qué es esterilización? 2. ¿Qué métodos de esterilización existen? 3. Mencione por lo menos tres métodos de esterilización por agentes físicos. 4. ¿En qué consiste la pasteurización y qué finalidad tiene? 5. ¿Qué tipo de esterilización se efectúa en la autoclave? 6. ¿En qué principio se basa el funcionamiento de la autoclave? 7. ¿Qué método de esterilización es el más recomendado para el siguiente material: a) un medio de cultivo termolábil b) un medio de cultivo termoestable c) jeringa de vidrio d) instrumental quirúrgico e) material de curación contaminado 8. ¿Cuál es el fundamento de la esterilización por medio de radiaciones (UV, infrarroja, radiaciones ionizantes)?  PRACTICA 3. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS OBJETIVO: Adiestrar al alumno en la preparación de diferentes medios de cultivo. INTRODUCCIÓN Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Es un polisacárido extraído de ciertas algas marinas principalmente de la clase Rhodophyceae, en particular de la especie Gelidium corneum. Funde aproximadamente a 92 °C Solidifica a no más de 42 °C. Es digerida por muy pocos microorganismos y su adición al medio no afecta sus características nutricionales ni su pH. La concentración de agar para un medio solido es del 2% y para un medio semisólido es de 0.05-0.75%.En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. MATERIAL SUSTANCIAS Matraz Erlenmeyer de 250 ml Agar nutritivo Probeta Agar EMB Parrilla Agar base sangre Vidrio de reloj Agar Sabouroud Agitador Vaso de precipitado de 250 ml Espátula Cajas de petri Tapones de algodón Autoclave u olla de presión Tubos de ensayo 16X150 PROCEDIMIENTO PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS 1.- Leer las instrucciones del fabricante para cada medio de cultivo y pesar la cantidad necesaria según el volumen requerido. 2.- Colocar el medio en un vaso de precipitado que contenga el agua destilada en el volumen requerido, agitar y calentar a ebullición para disolver el Agar. En el último paso se debe tener cuidado ya que el recipiente se calienta en exceso y el producto tiende a hervir y proyectarse, lo cual puede producir serias quemaduras. El Agar disuelto hace transparente al medio que originalmente estaba turbio. Puede utilizarse un baño maría para aumentar la solubilidad. 3.- No destapar las cajas de Petri, sino hasta el momento que vayan a ser utilizadas. Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca del área estéril al momento del vaciado en las cajas de petri y evitar hablar en todo momento para no contaminar el medio de cultivo. 4.- Si se va a envasar en cajas de petri, es necesario conservar el medio en un matraz y esterilizarlo a 121°C durante 15 minutos. Al terminar, es conveniente mantener el mechero encendido para formar un área de esterilización al momento del vaciado en las cajas de petri aproximadamente de 15 ml a 20 ml de Agar por caja procurando que no se forman burbujas. Tapar la caja inmediatamente 5.- Si se forman burbujas, tomar el mechero, flamear el medio de cultivo sobre la superficie de la caja de petri y de manera rápida. Se procede a tapar la caja. 6.- Esperar a que el medio solidifique, se rotulan los medios de cultivo, anotando la fecha y con iniciales el tipo de medio de cultivo. Si las cajas no se van a utilizar el mismo día se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de manera invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre el medio de cultivo y lo pueda contaminar. 7.- Cuando se vayan a utilizar los medios de cultivo preparados, será necesario secar las placas invertidas en estufa a 37 °C. Antes de realizar el sembrado de microorganismos. 8.- Si se desea que el Agar quede en tubos, entonces se esterilizará el Agar directamente en ellos a 121°C durante 15 minutos tapados con algodón, gasa y papel estraza. Si desea que solidifiquen inclinados, colocarlos en una superficie lisa inclinándolos en un ángulo de 20 a 30° sobre una varilla de vidrio. 9.- Para preparar el Agar base Sangre es necesario adicionar en condiciones de asepsia sangre desfibrinada estéril en concentración final de 15%. Después de la esterilización del Agar base mezclar cuidadosamente y poner en cajas petri estériles. CUESTIONARIO 3. 1.- ¿Qué es un medio de cultivo y cuál es su utilidad? 2.- ¿Qué es un cultivo de microorganismo? 3.- ¿Qué finalidad tiene utilizar medios de cultivo sólidos? 4.- Escribe el nombre de 5 medios de cultivo que pueden ser empleados en el laboratorio de microbiología. 5.- ¿De dónde es obtenido el extracto Agar para la preparación de medios de cultivos? 6.- ¿Por qué es necesario esterilizar la mesa antes de realizar el vaciado del medio de cultivo en las cajas de petri? 7.- ¿Qué tipo de nutrientes requieren los microorganismos para poder crecer en un medio de cultivo? 8.- ¿Cuál es el elemento principal del medio de cultivo que favorece su solidificación? 9.- ¿Qué finalidad tiene guardar invertidos los medios de cultivo ya preparados en las cajas de Petri en el refrigerados o en la estufa de incubación?  PRACTICA 4. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS OBJETIVO: El alumno aprenderá la técnica para preparar medios de cultivo líquido estéril. INTRODUCCIÓN CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO: Para el aislamiento, estudio y clasificación de los microorganismos, es necesario utilizar un medio de cultivo en el que dispongan de las sustancias orgánicas e inorgánicas necesarias indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos medios, los microorganismos además de poder multiplicarse, pueden manifestar características de crecimiento y propiedades bioquímicas; aspectos de gran importancia para su clasificación. Estos preparados estériles que poseen los elementos necesarios para el desarrollo de un microorganismo, se denominan medios de cultivos y pueden dividirse por su: A) ASPECTO: Medios líquidos. Se emplean fundamentalmente para: Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la producción de metabolitos específicos la multiplicación bacteriana en los medios de cultivos líquidos se manifiesta generalmente por el enturbiamiento de éste. Estimular y promover la selección de algún o algunos microorganismos e impedir que otros se multipliquen. - Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioquímicas. Medios semisólidos. - Se utilizan para identificaciones bioquímicas. Medios sólidos. - Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. En los medios de cultivos sólidos la multiplicación bacteriana se manifiesta por una formación macroscópica denominada colonia bacteriana, que es el resultado de la multiplicación de una sola célula bacteriana. B) USO: I.- Medios de cultivos básicos. Se caracterizan por ser pobres en material nutritivo, de manera que su uso es muy restringido, constituyen la base para la preparación de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo peptonado y el Agar-Agar corriente. II. Medios de cultivos especiales. Entre estos se encuentran: a) Medios mejorados. En general son los mismos medios básicos a los que se les agrega una sustancia enriquecedora como sangre, suero, etc. El uso de estos medios es universal y está orientado especialmente a obtener buen desarrollo de cualquier tipo de bacteria, se utilizan en primera instancia en el aislamiento bacteriano, ya sea a partir de otros cultivos o de productos patológicos. Los medios de este tipo de uso más frecuente son: Agar tripticasa-sangre, caldo tripticasa, Agar chocolate, medio de Mueller-Hinton. b) Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que impiden o limitan el crecimiento de algunas especies microbianas y permiten el desarrollo de otras. Consiste en aislar un microorganismo de un sustrato que contiene numerosas otras especies. Se incluyen en este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias Gram(-) y el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias Gram(+). c) Medios de cultivos diferenciales. Se emplean para demostrar alguna propiedad bioquímica de la bacteria como degradación de hidratos de carbono, proteínas, hidrólisis de la urea, etc., contienen indicadores de ácido base, redox o sustancias que detectan cambios en el medio o en las características típicas de las colonias el estudio en estos medios debe realizarse empleando cepas bacterianas puras. Existen numerosos medios de este tipo, de uso preferencial en la bioidentificación de bacilos Gram(-) ya que ellos no tienen características muy distintivas en las colonias o cultivos en general. Entre los de uso más corriente se encuentran: Agar fierro- triple-azúcar (TSI agar Medio de SIM, Caldo glucosado fosfatado, Voges-Proskauer o del rojo de metilo, Medio agar-citrato de sodio (Medio de Simmons- Medio caldo urea). d) Medios de transporte. Sirven para transportar los especímenes que contienen a los microorganismos, del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Estos medios impiden que se altere la proporción original de la flora microbiana en los especímenes. MATERIAL SUSTANCIAS Telas de asbesto Tripie o soportes Universales Mechero de bunsen Agitadores Medio de cultivo para caldo nutritivo Vasos de precipitado de 250 ml Medio de cultivo para caldo lactosado Espátulas Fenol al 5% Vidrio de reloj Tubos de ensayo 20 X 200 mm Tapones de algodón Autoclave u olla de presión Papel estraza Equipo para Baño María PROCEDIMIENTO: B) PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS * Preparar caldo nutritivo y caldo triptona INSTRUCCIONES SEGÚN ENVASE DEL MEDIO DE CULTIVO CUESTIONARIO 4 1. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su consistencia? 2. ¿Qué sustancias se emplean para modificar la consistencia de los medios de cultivo? 3. Qué utilidad tiene cada uno de los siguientes tipos de medios de cultivo: a) Líquido b) Semisólido c) Sólido 4. Explique en qué consisten los siguientes medios de cultivo y cite tres ejemplos de cada uno: a) Básicos  b) Enriquecido c) Selectivo y/ o diferencial d) Especial o de ensayo 5. ¿Cuál es la diferencia entre el agar sangre y el agar chocolate? 6. Indique la forma correcta de disolver un medio de cultivo que contenga agar. 7. ¿Qué precauciones deben tomarse en cuenta al preparar un medio de cultivo? 8. Realice una tabla para los siguientes medios de cultivo: EMB, Mac Conkey, Sal y Manitol, S- 110, SS, AN, ASC 5%, Agar Chocolate, Agar verde brillante, Agar tioglicolato, Agar Mueller Hinton y Agar base leche. Dicha tabla deberá de contener la siguiente información: a) Nombre del medio de cultivo a) Clasificación de acuerdo a su composición química b) Composición química c) Fundamento del medio d) Utilidad e) Interpretación