Differential WBC's Count Lab Report (2023-2024) PDF

Human physiology lab Done by: -Renad Alrousan & Rawan Ramzi (Differential WBC’s Count) First semester 2023-2024  ‫‪ A test that consists of an examination of stained blood film under‬‬ ‫‪microscope to determine the % and # of different types of WBC’s.‬‬ ‫‪-‬هاي الت...

Human physiology lab Done by: -Renad Alrousan & Rawan Ramzi (Differential WBC’s Count) First semester 2023-2024  ‫‪ A test that consists of an examination of stained blood film under‬‬ ‫‪microscope to determine the % and # of different types of WBC’s.‬‬ ‫‪-‬هاي التجربة بنستخدم فيها عينة دم (بتكون على شكل مسحة)‪ ،‬بتم وضعها تحت المجهر لتحديد نسبة‬ ‫وعدد االنواع المختلفة من خاليا الدم البيضاء‬ ‫‪There are 5 main types of white blood cell, subdivided into two main‬‬ ‫‪groups:‬‬ ‫‪ Polymorphonuclear leukocytes (granulocytes) ,70% of all WBC’s.‬‬ ‫‪characterized by :‬‬ ‫‪- Irregular segmented nuclei.‬‬ ‫‪- Specific granules (specific size ,staining affinities , ultrastructure).‬‬ ‫يوجد ‪ 5‬انواع من خاليا الدم البيضاء ‪ ,‬مقسمة الى مجموعتين ‪:‬‬ ‫‪-1‬خاليا متعددة النوى ( بنسميها خاليا حبيبية النها بتكون من الداخل متل كانه فيها حبيبات)‪ ,‬تشكل‬ ‫‪ %70‬من خاليا الدم البيضاء‪.‬خصائصها ‪........‬‬ ‫‪-‬نواة مجزأة بشكل غير منتظم‬ ‫‪-‬يوجد فيها حبيبات خاصة (الها حجم معين ‪,‬بنقدرنصبغها لحتى نشوفها تحت المجهر‬ ‫‪,‬تركيبها دقيق)‬  The granulocytes are subdivided into 3 Types : I. Neutrophils. II. Eosinophils. III. Basophils. :‫ انواع‬3 ‫الخاليا الحبيبية بتنقسم الى‬ Neutrophils-1 Eosinophils-2 Basophils-3 2. Mononuclear leukocytes (Agranulocytes) are characterized by : - Regular nuclei (round or kidney-shaped). - Non specific granules. **The Agranulocytes are divided into 2 types: I. Monocytes. II. Lymphocytes. : ‫ خاليا وحيدة النوى (غير حبيبية) خصائصها‬.2 ‫نوى منتظمة (دائرية أو متل حبة الفاصولياء)مهههم‬- ‫ما عندها حبيبات‬- :‫** الخاليا الغير حبيبية تنقسم الى نوعين‬ Monocytes -1 Lymphocytes-2. ‫هاي الصورة بتوضح انه جميع خاليا الدم يتم انتاجها في نخاع العظم‬ Principle of the test  A drop of blood is spread over a glass slide, then it is let to dry and stained with special quick stain (Wright-Gimsa stain), and viewed under the microscope. : ‫مبدأ التجربة‬- ‫ بعدها اتركها تنشف واصبغها بصبغة خاصة‬, ‫قطرة من الدم يتم نشرها على شريحة زجاجية‬.‫ بعد الصبغة بشوفها تحت المجهر‬,)‫ (مهههم‬aWright Gism‫اسمها‬ Material 1. Plain glass microscope slides clean & dry 2. (Wright-Gimsa stain solution) 3. Staining containers 4. Deionized or distilled water 5. A microscope 6. Immersion oil 7. Blood cell counter. :‫المواد‬. ‫ شريحة زجاجية نظيفة وجافة‬.1 Wright Gisma‫محلول‬.2  ‫ حاوية الصبغ‬.3 ‫ماء مقطر‬.4 ‫مجهر‬.5 100X ‫زيت خاص بالعدسة‬.6.‫عداد خاليا الدم‬.7 Procedure  Step1: making the blood smear  Step2: staining the blood smear  Step3: counting the cells (cell identification and counting)  Step4: reporting the count (cell identification) :‫الخطوات‬ ‫ اعمل مسحة دم أو اللطخة‬:1 ‫الخطوة‬ ‫ اصبغ المسحة‬:2 ‫الخطوة‬ ‫ عد الخاليا‬:3 ‫الخطوة‬.‫ اكتب نتيجة العد‬:4 ‫الخطوة‬ Making blood smear (wedge method) -Blood smear :is spreading of the blood on a glass slide to be thin layer of blood. -A good blood smear has a feathered edge that is nearly square and rainbow sheen when reflecting the light. -The perfect slide consist of a smear that is exactly one cell thick. : wedge method‫كيف تعمل مسحة الدم عن طريق ال‬.‫هو نشر الدم على الشريحة الزجاجية لحتى تصير طبقة رقيقة من الدم‬:‫مسحة الدم‬ ‫مسحة الدم الجيدة بكون شكلها متل نهاية الريشة يلي بتكون تقريبًا مربعة وبرضه بتعمل مثل لمعة‬-.‫قوس القزح لما ينعكس عنها الضوء‬ ‫الشريحة المثالية بتكون كأنها بسماكة خلية واحدة (يعني احنا لما بدنا ننشر الدم على الشريحة‬- )‫الزم تكون شكلها مش متقطع‬ To make a good blood smear, follow these steps 1. select two glass slides that are clean and free of chipped edges. 2. Make a finger puncture and fill a hematocrit tube with blood, hold the filled hematocrit tube over the slide. tilt the tube and place a drop of blood 1 to 2 mm in diameter on one of the slides. the drop should be in the central line approximately ¼ inch from the frosted edge of the slide. **Note : make the smear immediately after you have applied the drop of blood. :‫لحتى تعمل مسحة جيدة اتبع الخطوات التالية‬.‫ اختار شريحتين نظيفتين وما فيهم خدش على الحواف‬-1 ‫ اعمل ميالن باالنبوب‬, ‫ضع االنبوب فوق الشريحة‬,‫اعمل وخزة بأصبعك وامأل االنبوب بالدم‬-2 ‫ القطرة او نقطة الدم الزم تكون‬.‫ مم على نهاية الشريحة‬2 ‫ الى‬1 ‫وضع قطرة من الدم قطرها من‬. ‫بوسط الشريحة وتبعد ¼ انش من الحافة‬ ‫ كيف بنعمل المسحة؟‬. ‫ اعمل المسحة مباشرة بعد ما تحط القطرة‬:‫**مالحظة‬ 3. Hold the slid with the drop of blood at the opposite end with the thumb and four finger of your non-dominant hand. Grasp the spreader slide similarly with your dominant hand. 4. Rest the left end of the spreader slide at a 45-degree angle just in front of the drop of blood.draw the spreader slide backward until it just touches the drop of blood. Allow the drop of blood to spread in the angle between the slide and the spreader. ‫ امسك الشريحة يلي عليها القطرة من النهاية االخرى(يعني مش الجهة يلي حطيت عليها‬-3 ‫ و امسك الشريحة االخرى بايدك السائدة‬. ‫القطرة) باالبهام و االصبع الرابع من ايدك الغير سائدة‬ )‫(يلي انت بتستخدمها‬ ‫ حرك‬.‫ امام قطرة الدم‬45 ‫ خلي الجهة اليسرى من الشريحة يلي رح تعمل فيها المسحة بزاوية‬-4 ‫الشريحة لجهة القطرة لحتى يلمس القطرة وبعدها رجع الشريحة بنفس االتجاه الي بلشت منه‬.....‫شوفوا هاد الفيديو السريع لحتى تعرفوا كيف بنعمل المسحة‬.... https://youtu.be/cI9GObT73lY ‫‪5. Keep the spreader slid at the 45 – degree angle. then push the‬‬ ‫‪spreader slide rapidly across the stationary slide with one even‬‬ ‫‪stroke and pressure.‬‬ ‫– ‪6. Allow the slide to air dry, then fix the slide with methanol from 3‬‬ ‫‪5 minutes.‬‬ ‫‪-The faster the spreader slide is moved, the longer and thinner the‬‬ ‫‪film will be. the slower the spreader is moved, the shorter and‬‬ ‫‪thicker the slide will be.‬‬ ‫‪.5‬ضع الشريحة اللي رح تنشر فيها الدم بزاوية ‪ 45‬درجة ‪.‬بعد ذلك حركها على الشريحة اللي‬ ‫حاطط عليها الدم (الثابتة)بسرعة وبضغط واحد على طول الشريحة الثابتة‪.‬‬ ‫‪.6‬اسمح للشريحة بانها تجف ‪ ,‬بعد ذلك ضع الميثانول وخليه مدة ‪ 5-3‬دقائق‬ ‫‪-‬كل ما حركت الشريحة بشكل أسرع ‪ ,‬رح تكون المسحة طويلة ورقيقة ‪..‬‬ ‫وكل ما حركت الشريحة بشكل ابطأ كل ما كانت المسحة قصيرة وسميكة ‪.‬‬ ‫‪The angle will also vary the results. an angle greater than 45‬‬ ‫‪degrees makes the smear thicker; less than 45 degrees ,the smear‬‬ ‫‪is thinner.‬‬ ‫‪So , speed, angle and drop size can be varied slightly to produce a‬‬ ‫‪good smear.‬‬ ‫‪-‬أيضا الزاوية الها دور بتغير النتيجة ‪ :‬اذا كانت الزاوية أكبر من ‪ ,45‬رح تكون المسحة سميكة‪,‬‬ ‫اذا كانت الزاوية أصغر من ‪ 45‬رح تكون المسحة رقيقة‪.‬‬ ‫‪-‬وبالتالي (السرعة والزاوية وحجم القطرة ) بتحكموا بجودة المسحة‪.‬‬ ‫السرعة‪:‬‬ ‫كلما حركت الشريحة بشكل أسرع كل ما كان المسحة رقيقة‬ ‫كلما حركت الشريحة بشكل أبطأ كل ما كان المسحة أسمك‬ ‫الزاوية‪(:‬الزم تكون ‪ 45‬درجة )‬ ‫اذا كانت الزاوية أكبر من ‪ 45‬درجة كلما كانت المسحة أسمك‬ ‫اذا كانت الزاوية أصغر من ‪ 45‬درجة كلما كانت المسحة رقيقة‬ Staining the cells  Staining the blood smear highlights the difference among the different types of Leukocytes, for easier recognition during the counting process.  The most popular stain used for this purpose is Wright’s Gimsa stain. : ‫صبغ الخاليا‬.‫ وبالتالي بقدر أعد كل نوع بسهولة‬, ‫صبغ مسحة الدم بتعمل على توضيح الخاليا‬- Wright gisma stain ‫أفضل صبغة بستخدمها لهاي التجربة هي‬-  Wright’s stain is a methyl alcohol (methanol) solution of an acid dye and basic dye.  acid dye (eosin) red in colure  Basic dye (methelen blue) Blue.‫ وفيه صبغة حمضية وصبغة قاعدية‬,)‫ هو عبارة عن محلول ميثيل الكحول (ميثانول‬:Wright stain ‫لونها أحمر‬ eosin‫الصبغة الحامضية‬ ‫لونها أزرق‬ methelen blue ‫الصبغة القاعدية‬  Use two staining containers , one filled with the stain solution, & the other with distilled water  Immerse the slide in the stain 15-30 seconds then remove the slide to drain excess stain  Immerse the slide in distilled water for 5-15 seconds, then remove the slide, drain excess water and wipe the back of the slide to reduce background color.  Place slide in horizontal position and allow to air dry.‫ االول ضع فيه محلول الصبغ والثاني ضع فيه ماء مقطر‬,‫استخدم وعاء الصبغ‬-.‫ بعدها قم بازالة الشريحة من الوعاء‬,‫ ثانية‬30-15 ‫ضع الشريحة داخل وعاء الصبغ من‬- ‫ بعدها قم بازالة الشريحة من الوعاء وتخلص‬, ‫ ثانية‬15-5 ‫ضع الشريحة داخل الماء المقطر من‬-.‫من الماء الزائد و امسح الجزء الخلفي من الشريحة‬.‫ضع الشريحة على سطح افقي و خليها تنشف‬- Counting the cells 1. Place the slide under the microscope & focus the thin area under low power lens 2. Place large drop of immersion oil on the thin area of the blood smear 3. Switch the oil immersion objective (100x) into position above thin area covered with the oil. 4. Rotate the coarse adjustment until you see some cells, bring the cells into perfect focus by rotating the fine adjustment 5. Count 100 consecutive white cells by using the cell counter, follow the pattern indicating in the figure. then calculate the percent of each type by using the relation: ‫‪relative count of certain cells% = # of cells counted/100 * 100%‬‬ ‫عد الخاليا ‪:‬‬ ‫‪-1‬ضع الشريحة تحت المجهر‪ ,‬ركز المنطقة الرقيقة على العدسة االصغر‪X10‬‬ ‫‪-2‬ضع قطرة كبيرة من الزيت على المنطقة الرقيقة من مسحة الدم‪.‬‬ ‫‪-3‬ركز على العدسة‪X100‬‬ ‫‪-4‬استخدم ‪ coarse adjustment‬وهي جزء من المجهر ‪ ,‬لحتى تشوف بعض الخاليا‪ ,‬بعدها‬ ‫لحنى تشوفهم مزبوط استخدم ‪Fine adjustment‬‬ ‫‪ -5‬عد ‪ 100‬خلية على التوالي (حسب الجهاز يلي بالشكل‪ ،‬اذا شفت خلية مونوسايت بكبس على‬ ‫الكبسة يلي عند اسمها و بضل اعمل نفس العملية لحتى يوصل العدد الكلي ‪ )100‬بعدها احسب‬ ‫نسبة كل نوع من الخاليا عن طريق هاي العالقة ‪:‬‬ ‫نسبة الخاليا=عدد الخاليا‪ 100/‬ضرب ‪%100‬‬ ‫هأل رح نبلش بأنواع خاليا الدم البيضاء وصفات كل خلية ‪( :‬األرقام مهمه و شكل كل خلية مهم‬ ‫نعرفه)‬ ‫‪Neutrophils‬‬  Constitute the vast majority of granulocytes 40 – 60 %. They are somewhat larger than RBC’s (medium size ) and distinguished by having a polymorphic nuclear structure ( 3- 5 lobes ). Phagocytes activity. Called neutrophils because their cytoplasmic granules stain with neutral dyes. Increased numbers usually indicates an infection. Neutrophils.%60-40 ‫بتشكل الغالبية العظمى من الخاليا الحبيبية (متعددة النوى)بحيث تكون‬- ‫ وبميزها عن طريق وجود هيكل نووي‬,)‫حجمها أكبر بقليل من خاليا الدم الحمراء (حجمها متوسط‬-. )‫متعدد االشكال(يعني شكل النواة مش نفسه بكل الخاليا‬ )‫تقوم بعملية البلعمة (مهههم‬- ))‫ ألن حبيبياتها تنصبغ بصبغة محايدة (يعني ال حمضية وال قاعدية (متعادلة‬Neutrophils‫تسمى‬-.‫ازدياد عددها يدل على وجود العدوى عند الشخص‬- Neutrophils subdivided into 2 types: Type Neutrophils Neutrophilic band segmented (young neutrophilic) nucleus Broken up into Shaped like a band segments cytoplasm Small pink or Small pink or brownish granules brownish granules % in normal 55-75% 2-6%  blood Increased in Appendicitis, Appendicitis, pneumonia pneumonia ‫***متل ما حكينا شكل النواة بهاد النوع من الخاليا مش ثابت لذلك بترجع تنقسم لكمان‬ ***‫ احفظوا الجدول كاااامل‬،‫نوعين متل ما بوضح الجدول‬ Eosinophils Stains with acidic dyes. Represent 5 % of the leukocytes ( 200 cell/cc of blood ). They are about the same size as neutrophils (medium size ),but have only 2 lobes or segments in their nuclei. The granules stain red to orange and are much larger than in neutrophils. Increased eosinophil counts are found in response to allergies, parasitic infections , asthma and high fever. Eosinophils ‫تنصبغ بصبغة حمضية‬- )‫ من الدم‬3‫سم‬/ ‫ خلية‬200( ‫ من خاليا الدم الييضاء‬%5 ‫تكون‬-.‫بس هون النواة بتتكون من فصين‬, )‫ (متوسط‬Neutrophils‫حجمها تقريبا نفس حجم‬- ‫الحبيبات بكون لونها أحمر لبرتقالي و بكون حجمها اكبر بكثير من حبيبات‬- )‫ (شوف الصور جدا مهمات‬Neutrophils‫ال‬.‫ الربو والحمى الشديدة‬,‫ الطفيليات‬, ‫بزيد عددها في حاالت الحساسية‬- Basophils The rarest form of leukocytes ( 0 – 1 % ). The same size as neutrophils and eosinophils (small, medium size). Stain with basic dyes, have large, numerous, blue to black ,purple or purplish-black granules, which often obscure the nucleus. These granules contain : histamine : potent vasodilator. heparin : an anticoagulant. Basophils )%1-0( ‫أقل نسبة من خاليا الدم البيضاء‬-  )‫ (صغير و متوسط‬slihpEosino‫ و‬Neutrophils‫حجمها نفس حجم ال‬- ‫بنفسجي‬,‫عندها عدد هائل من الحبيبات يلي بكون لونها أزرق ألسود‬, ‫تنصبغ بصبغة قاعدية‬- ‫ فبالتالي هاد العدد الكبير من الحبيبات يلي بتكون مصبوغة رح تخفي النواة‬. ‫أو بنفسجي ألسود‬ ‫ لكن لو ما صبغناها رح نقدر نشوف النواة تحت المجهر‬،‫و مارح نقدر نشوفها تحت المجهر‬.‫بشكل واضح‬ ‫مضاد لتخثر‬: ‫ موسع فعال لألوعية الدموية –هيبارين‬:‫ هستامين‬-:‫الحبيبات بتحتوي على‬-.‫الدم‬ Lymphocytes Are the most abundant of the Agranulocytes. 20 – 40 % of leukocytes ( 2500 / cc ). They are variable in size ( small, medium and large ). They have a round, densely (closely knit ) stained nucleus which occupies most of the volume of the cell. Light blue cytoplasm, cytoplasm may be absent in small lymphocytes. They are the key cells of the immune system, they are  ‫‪subdivided into B and T lymphocytes.‬‬ ‫‪ Increased in lymphocytic leukemia , infectious mononueieosis.‬‬ ‫‪Lymphocytes‬‬ ‫‪-‬هي االكثر وفرة من الخاليا الغير حبيبية‬ ‫‪ %40-20-‬من خاليا الدم البيضاء‬ ‫‪-‬حجمها متفاوت (صغير‪,‬متوسط‪,‬وكبير)‬ ‫‪-‬النواة بتكون دائرية وكثيفة (متماسكة)‪,‬تأخذ تقريبا حجم الخلية بالكامل‪.‬‬ ‫‪-‬السيتوبالزم لونه ازرق فاتح‪,‬وممكن ما يكون موجود في الخاليا الصغيرة ألنه النواة حجمها‬ ‫كبير)‬ ‫‪-‬هي الخلية االساسية في جهاز المناعة‪,‬وبتنقسم الى‪. B ,T‬‬ ‫‪-‬بزيد عددها في سرطان الدم الليمفاوي وفي حاالت العدوى‬ ‫‪Monocytes‬‬ ‫‪ Represent up to 7 % of the leukocytes ( 300/cc ).‬‬ ‫‪ They are the largest of the leukocytes.‬‬ ‫‪ More or less round nucleus but often with depressions giving it‬‬ ‫‪a kidney-bean shape (spongy & sprawling).‬‬ ‫‪ Light gray cytoplasm.‬‬  ‫‪ The monocytes often move into the tissue spaces where they‬‬ ‫‪become macrophages and histiocytes.‬‬ ‫‪ The macrophages and histiocytes show significant phagocytotic‬‬ ‫‪activity.‬‬ ‫‪ Increased in tuberculosis, monocytic leukemia‬‬ ‫‪Monocytes‬‬ ‫‪-‬نسبتها ‪ %7‬من خاليا الدم البيضاء (النسب جدا مهمة)يعني ‪ 300‬خلية لكل سم‪ 3‬من الدم‬ ‫‪-‬االكبر حجم من بين خاليا الدم البيضاء‪.‬‬ ‫‪-‬النواة بتكون دائرية بس غالبا بكون فيها انحناء ‪ ,‬فبكون شكلها متل حبة الفاصوليا (اسفنجية ومتدلية‬ ‫االطراف)شوف شكلها‬ ‫‪-‬السيتوبالزم لونه رمادي فاتح‬ ‫‪-‬هاي الخاليا بتتحرك داخل االنسجة لحتى تصير خاليا بلعمة ونسيجية‪.‬‬ ‫‪-‬الخاليا البلعمية والنسيجية تظهر نشاط بلعمي كبير‪.‬‬ ‫‪-‬بزيد عددها في حالة مرضى السل وسرطان الدم المؤثر على خاليا ال‪Monocytes‬‬ ‫‪Significance of the test‬‬ ‫‪ Useful in general health exam‬‬ ‫‪ Help to investigate a Variety of illness, including:‬‬  ‫)‪ infection (if Eosinophils parasites infection‬‬ ‫)‪ allergy ( Basophils & mast cells‬‬ ‫‪ leukemia‬‬ ‫‪ Treatment monitoring‬‬ ‫أهمية التجربة‪:‬‬ ‫‪-‬يساعد في تحديد مختلف انواع االمراض مثل‪:‬‬ ‫‪-‬العدوى (عدوى الطفيليات بزيد عدد ال ‪)esoinophils‬‬ ‫‪-‬الحساسية (بزيد عدد ال‪)Basophils‬‬ ‫‪-‬سرطان الدم‪.‬‬ ‫‪-‬مراقبة العالج‪(.‬الفحص بساعد لحتى نشوف هل فعليًا المريض عم بستجيب للدوا يلي بياخده‬ ‫او ال)‬ ‫‪ an increase in number (Leukocytosis) may result from :‬‬ ‫‪ Bacterial or viral infection, metabolic disorders, chemical and‬‬ ‫‪drug poisoning and acute hemorrhage.‬‬ ‫‪ a decrease in number (leukopenia) may result from :‬‬ ‫‪ Typhoid infection, measles, infectious hepatitis , tuberculosis or‬‬ ‫‪cirrhosis of the liver.‬‬ ‫‪-‬زيادة عدد خاليا الدم البيضاء‪ Leukocytosis‬نتيجة ل‪:‬‬ ‫عدوى بكتيرية‪,‬اضطرابات أيضية‪,‬تسمم كيميائي و دوائي ‪,‬ونزف حاد‪.‬‬ ‫‪-‬انخفاض عدد خاليا الدم البيضاء‪ Leukopenia‬نتيجة ل‪:‬‬ ‫عدوى التفوئيد‪ ,‬الحصبة‪ ,‬التهاب الكبد المعوي ‪ ,‬السل ‪ ,‬التليف الكبدي‪.‬‬ ‫**الصورة يلي تحت مع الحكي يلي تحتها عبارة عن ملخص لكل أنواع الخاليا مع شكل كل‬ ‫وحده كيف بكون‬  Basophils (J) can increase in cases of leukemia, chronic inflammation, the presence of a hypersensitivity reaction to food, or radiation therapy. Decreased basophil levels can indicate acute infection, a response to an overactive thyroid gland, and stress (normal=0-1% basophils).  Eosinophils ( D) can increase in response to allergic disorders, inflammation of the skin, and parasitic infections. They can also occur in response to some infections or to various bone marrow malignancies. Decreased levels of eosinophils can occur as a result of infection (normal=0-3% eosinophils).  Monocyte (F) levels can increase in response to infection of all kinds as well as to inflammatory disorders. Decreased monocyte levels can indicate bone marrow injury or failure and some forms of leukemia. (normal=3-7% monocytes)  Lymphocytes (B, H) can increase in cases of bacterial or viral infection, leukemia, cancer of the bone marrow, or radiation therapy. Decreased lymphocyte levels can indicate diseases that affect the immune system,  such as lupus, and the later stages of HIV infection (normal=25-33% lymphocytes).  Polymorphonuclear neutrophils (C, E) can increase in response to bacterial infection or inflammatory disease. Severe elevations in neutrophils may be caused by various bone marrow malignancies, such as chronic myelogenous leukemia. Decreased neutrophil levels may be the result of severe infection or other conditions, such as responses to various medications (normal=54-62% PMNs). Band cells (I) are immature PMNs and generally constitute 3-5% of the overall white blood cell population. THE END