Plant Tissue Culture PDF

6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช (Plant tissue culture) ดร.ปานจันทน์ ุจริตธุรการ 1 การเพาะเลีย้ งเนื้อเยื่อพืช การปั่นตา (กล้ ยไม้) Plant tissue culture Clonal propa...

6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช (Plant tissue culture) ดร.ปานจันทน์ ุจริตธุรการ 1 การเพาะเลีย้ งเนื้อเยื่อพืช การปั่นตา (กล้ ยไม้) Plant tissue culture Clonal propagation Micropropagation Aseptic culture Axenic culture In vitro culture 2 1  6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช (Plant tissue culture) การนาชิ้น ่ นพืช (explant) ที่เป็นเนื้อเยื่อเจริญ เพาะเลี้ยงบนอา าร ังเคราะ ์ ภายใต้ ภา ะที่ เ มาะ มและปลอดเชื้อ (Aseptic) เซลล์ของ ิ่งมีชี ิตมีคุณ มบัติ Totipotency มายถึง ค าม ามารถของเซลล์ที่จะมีการพัฒนา ไปเป็น ิ่งมีชี ิตที่ มบูรณ์ใ ม่ได้ 3 อ้ งปฏิบัติการ และอุปกรณ์ ในการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช อ้ งเตรียมอา ารเพาะเลี้ยง (Media preparation room) ้องย้ายเนื้อเยื่อ (Transfer room) ้องเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ (Culture room) 4 2  6/24/2024 ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง 5 ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง 3  6/24/2024 ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง 4  6/24/2024 ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง 10 5  6/24/2024 ห้องเตรียมอาหารเพาะเลี้ยง ห้องย้ายเนื้ อเยื่อ ตู้ย้ายเนื้ อเยื่อ (Laminar air flow cabinet) Horizontal Laminar Flow http://www.thaiind.com/machine-tools-spare-parts-accessories.php?post_id=3500 12 6  6/24/2024 13 Vertical Laminar Flow ตู้ย้ายเนื้ อเยื่อ (Laminar air flow cabinet) Horizontal Laminar Flow Vertical Laminar Flow http://www.terrauniversal.com/laminar-flow-hoods/horizontal-laminar-flow-hoods.php 14 7  6/24/2024 ตู้ย้ายเนื้ อเยื่อ (Laminar air flow cabinet) http://www.sc.su.ac.th/knowledge/cell.pdf 15 ห้องเพาะเลี้ยงเนื้ อเยื่อ อุณ ภูมิ 25+2 0C ค ามเข้มแ ง 1,000-3,000 ลักซ์ 12-16 ชั่ โมงต่อ ัน 16 16 8  6/24/2024 ห้องเพาะเลี้ยงเนื้ อเยื่อ Timer ห้องเพาะเลี้ยงเนื้ อเยื่อ 9  6/24/2024 หลักการที่สาคัญของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยือ่ พืช ต้องใช้เทคนิคปลอดเชื้อ างเลี้ยงบนอา าร ังเคราะ ์ใน ภาพปลอดเชื้อ เซลล์จากชิ้น ่ นต่าง ๆ เจริญเติบโตเป็นต้น แคลลั (callus) โซมาติก เอมบริโอ (somatic embryo) เมื่อ subculture ามารถเพิ่มปริมาณได้เป็นจาน นมาก ต้นที่ได้มีลัก ณะเ มือนกันทุกประการ 19 การทาให้ ปราศจากเชื้ อ 1. การใช้ค ามร้อน ได้แก่ ❖ ม้อนึ่งอัดไอ (Autoclave) - ใช้ค ามร้อนชื้นที่ค ามดันไอน้า 15 ปอนด์ต่อตารางนิ้ อุณ ภูมิ 1210C เป็นเ ลา 15-20 นาที 2. การกรองด้ ย Millipore filter - ิตามิน รือ ารค บคุมการเจริญเติบโตของพืช สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 20 10  6/24/2024 การทาให้ การท าให้ปปราศจากเชื ราศจากเชื้ อ้ อ 3. การใช้รัง ี - ฆ่าเชื้อที่พื้นผิ ัตถุด้ ยแ งอัลตราไ โอเลต (UV) เป็นเ ลา 30 นาที 4. การใช้ ารเคมี - แอลกอฮอล์ 70% และ 95% - NaOCl + Tween- 20 - Clorox สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 21 สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 22 11  6/24/2024 Media 1. Inorganic salt 2. Carbon sources 3. Vitamins 4. Plant growth regulators (PGRs) 5. Others 23 1. Inorganic salt 1. Macronutrients C, N, O, P, S, Ca, Mg 2. Micronutrients Fe, Cl, Mn, Zn, B, Mo 24 12  6/24/2024 2. Carbon sources Organic compound Energy sucrose 2-6% 25 3. Vitamins Thiamine (B1) Pyridoxine (B6) Nicotinic acid (Niacin) Myo-Inositol 26 13  6/24/2024 4. PGRs Auxin Cytokinin 27 Auxin cell elongation root initiation callus induction 14  6/24/2024 Auxin IAA: Indole-3-acetic acid NAA: Napthaleneacetic acid IBA: Indolebutyric acid 2,4-D: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 29 Cytokinin cell division shoot initiation and plant regeneration axillary buds formation 15  6/24/2024 Cytokinin Kinetin 2iP (N6-isopentenyladenine) Zeatin BAP (N6-benzylaminopurine) รือ BA (Benzyladenine) TDZ (Thidiazuron) 31 4. PGRs 32 16  6/24/2024 Intermediate-callus formation High-root formation Low-shoot formation 33 Auxin-Cytokinin Ratio Intermediate High Low 17  6/24/2024 5. Others Agar Activated charcoal Coconut water, banana, potato Distilled water Amino acid; Glycine 35 การเตรียมอา าร ตู รอา าร เช่น ูตร Murashige and Skoog (MS) ูตร Vacin and Went (VW) องค์ประกอบของอา ารมักเตรียมเป็น ารละลายเข้มข้น (Stock Solution) เพื่อ - ลดข้อผิดพลาดในการชั่ง าร - ประ ยัดเ ลาในการชั่ง ารเคมี 36 18  6/24/2024 MS ( ) MS 1. NH4NO3 1,650.00 KNO3 1900.00 KH2PO4 170.00 CaCl2 1H2O - Ca(NO3) 2 4H2O - CaCl2 2H2O 440.00 MgSO4 7H2O 370.00 37 ปริมาณสาร (มิลลิกรัมต่อลิตร) 2. KI 0.83 H3BO3 6.20 K2SO4 - MnSO41H2O 16.90 ZnSO4 7H2O 10.60 CuSO4 5H2O 0.025 Na2MoO4 0.25 CoCl 2H 2O 2 6H2O 0.025 38 19  6/24/2024 3. FeSO47H2O 27.80 Na2EDTA 37.30 4. Myo-inositol 100.00 Nicotinic acid 0.50 PyridoxineH 0.50 CL Thiamine.HC (Vit B6) 0.10 5.lGlycine ThiamineHC (Vit B1) 2.00 LSucrose (3%) 30,000.00 39 สมพร ประเสริฐส่งสกุล. ม.ป.ป. คูม่ ือปฏิบตั ิกำร วิชำ 722-487 ปฏิบตั ิกำรเพำะเลีย้ 40 มหำวิทยำลัยสงขลำนครินทร์ วิทยำเขตปัตตำนี. งเนือ้ เยื่อพืช. คณะวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยี 40 20  6/24/2024 การเตรียมชิ้น ่ นพืช เลือกพืชที่แข็งแรง ไม่เป็นโรค เลือกเนื้อเยื่อ ่ นที่อ่อน ขนาดของเนื้อเยื่อ - ใ ญ่ ปนเปื้อน ูง อัตราการเจริญ ูง - เล็ก ปนเปื้อนน้อย อัตราการเจริญต่า 41 สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 41 การฟอกฆ่าเชื้อที่ผิ (surface sterilization) 1. NaOCl (Sodium hypochlorite) ค ามเข้มข้น 1% เ ลา 5-30 นาที 2. Clorox ค ามเข้มข้น 5-20% เ ลา 5-20 นาที ❖ ยด Tween- 20 เพื่อใ ้ ารฟอกฆ่าเชื้อ ัมผั กับ ผิ ของชิ้น ่ นพืชดียิ่งขึ้น 3. Alcohol 95% ผ่านเปล ไฟ 2-3 ครั้ง 42 21  6/24/2024 ขั้นตอนการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช ชิ้นส่วนพืช ฟอกฆ่าเชื้อที่ผิว วางเลี้ยงบนอาหาร สับคัลเจอร์ 43 สมพร ประเสริฐส่งสกุล. กำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืช. พิมพ์ครัง้ ที่ 2. คณะวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยี มหำวิทยำลัยสงขลำนครินทร์,, 2541. 43 การเจริญของเนื้อเยื่อพืช Explants Cell division Callus Plantlets 44 22  6/24/2024 แคลลั (Callus) กลุ่มเซลล์ที่ยังไม่พัฒนาเป็นเนื้อเยื่อ รืออ ัย ะ ต่างๆ (undifferentiated mass) ประกอบด้ ยเซลล์ parenchyma ัด ่ น มดุลฮอร์โมน auxin = cytokinin เนื้อเยื่อที่มี ่ นของแคมเบียม (cambium) Compact callus และ Friable callus 45 คำนูณ กำญจนภูมิ. 2540. กำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อและอวัยวะพืช. คณะวิทยำศำสตร์ มหำวิทยำลัยสงขลำนครินทร์. 46 23  6/24/2024 การชักนาแคลลั จากกลีบดอกเบญจมา 24  6/24/2024 การเพาะเลีย้ งเนื้อเยื่อพืช 49 กล้ ยไม้ สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 50 25  6/24/2024 สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 51 การเพาะเมล็ดกล้ ยไม้ 26  6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเมล็ดกล้วยไม้ การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อข้า 27  6/24/2024 สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 55 สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 56 28  6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อเจริญปลายยอดกล้ ย อมทอง น่อ ลอกกาบใบ แช่ยากันเชื้อรา 1 10 นาที 0 แช่แอลกอฮอลล์ นาเข้าตู้ปลอดเชื้อ 1 1 29  6/24/2024 การฟอกฆ่าเชื้อและตัดแต่งชิ้น ่ น ฟอกฆ่าเชื้อด้ ยคลอรอกซ์ 40 % ตัดแต่งชิ้น ่ น เนื้อเยื่อเจริญปลายยอด 1 2 30 6/24/2024 31  6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยือ่ ดาหลา ัปปะรด สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 64 32  6/24/2024 น้า ั สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 65 33  6/24/2024 การชักนาการเกิดโพรโทคอร์มไลค์บอดี้จากชิ้น ่ นใบอ่อน ของกล้ ยไม้เอื้องกุ ลาบกระเป๋าปิด การเพาะเลีย้ งตาข้ าง (Axillary bud culture) 34  6/24/2024 การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อกุ ลาบ 35 6/24/2024 36 6/24/2024 37  6/24/2024 มะละกอ สุภำพ สุนทรนนท์, บรรณำธิกำร. เทคโนโลยีกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชสวน : เอกสำรวิชำกำร. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. กรุงเทพฯ : สถำบันวิจยั พืชสวน, 2546 76 38  6/24/2024 การชักนายอดจากกลีบดอกเบญจมา การเพาะเลีย้ งตาดอก (Flower bud culture) ตัดตาดอกนาไปเพาะเลี้ยงบนอา ารโดยตรง กระตุ้นใ ้ปลายยอดที่เลี้ยงใน ลอดทดลองออกดอก 39  6/24/2024 สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 80 40  6/24/2024 http://student.nu.ac.th/ 81 http://www.orchidtropical.com/articleid20.php 82 41  6/24/2024 www.redonapp.com 83 42  6/24/2024 http://taltal1122.blogspot.com/ 85 86 สำนักงำนพัฒนำวิทยำศำสตร์และเทคโนโลยีแห่งชำติ. คู่มือกำรเพำะเลีย้ งเนือ้ เยื่อพืชเบือ้ งต้น สำหรับมือใหม่. พิมพ์ครัง้ ที่ 1. ปทุมธำนี : สำนักงำน, 2556. 86 43  6/24/2024 ประโยชน์ของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยือ่ 1. การขยายพันธุ์ (Micropropagation) ทาใ ้ได้พืชตรงตามพันธุ์เดิม และปริมาณมากใน ระยะเ ลาอันร ดเร็ 2. การผลิตพืชปลอดเชื้อไ รั (Virus-free plant) Apical meristem และ Embryo 3. การผลิต ารทุติยภูมิ (Secondary metabolite) พืชผลิต ารที่มีคุณ มบัติทางยาได้มากก ่าธรรมชาติ 88 44  6/24/2024 ประโยชน์ของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 4. การผลิต ายพันธุ์แท้ (Inbred production) เพาะเลี้ยงอับเรณูและละอองเรณู 5. การคัดเลือก ายพันธุ์กลาย (Mutant selection) คัดเลือกพันธุ์พืชที่ดีเกิดการกลายทาใ ้เกิดการ เปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรม 89 ประโยชน์ของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยือ่ 5. การปรับปรุงพันธุ์พืช (Plant breeding) - การร มโปรโตพลา ต์ (Protoplast fusion) - พันธุ ิ กรรม (Genetic engineering) - การถ่ายโอนยีน (Gene transformation) 90 45  6/24/2024 ประโยชน์ของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 6. การเก็บรัก าพันธุ์พืช (Germplasm conservation) ารชะลอการเจริญเติบโต ไนโตรเจนเ ล -196 0C 7. การ ึก าทางชี เคมีและ รีร ิทยาของพืช (Biochemical and Physiological study) ค บคุมตั แปรต่างๆ ได้ง่ายก ่าในธรรมชาติ 91 46