Practical Biochemistry Lab Manual - Page 1-4 - جامعة طنطا

‫جامعة طنطا‬ ‫كلية الزراعة‬ ‫قسم علوم وتكنولوجيا األغذية‬ ‫الدروس العملية في‬ ‫أساسيات الكيمياء الحيوية‬ ‫ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ...

‫جامعة طنطا‬ ‫كلية الزراعة‬ ‫قسم علوم وتكنولوجيا األغذية‬ ‫الدروس العملية في‬ ‫أساسيات الكيمياء الحيوية‬ ‫ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ‬ ‫المستوي الثاني‬ ‫االسم‪:‬‬ ‫القسم‪:‬‬ ‫الرقم‪:‬‬  ‫الدروس العملية في الكيمياء الحيوية‬ ‫االختبارات العامة للكشف عن الكربوهيدرات ‪qualitative tests‬‬ ‫توجد طرق مختلفة للكشف عن السكريات تتوقف على نوع السكريات ودرجة تعقيدها‪ ،‬ومن أهم‬ ‫طرق الكشف (الطرق اللونية)‪.‬‬ ‫الطرق اللونية‬ ‫األساس العلمى ‪-:‬‬ ‫عند إضافة أحماض معدنية غير مؤكسدة متوسطة التركيز (‪ )%13-12‬يحدث تحليل مائى‬ ‫للسكريات العديدة واألوليجو إلى سكريات أحادية قد تكون من نوع الهكسوز أو البنتوز‪.‬ثم يقوم‬ ‫الحامض بنزع ‪ 3‬جزيئات ماء مكونا مركبات إما ‪-5‬هيدروكسي ميثيل فورفيورال أو‬ ‫فورفيورال‪.‬‬ ‫وتتكثف هذه المركبات مع الفينوالت المختلفة وتعطى ألوانا مميزة‪.‬‬ ‫– ‪(Phenol – Alpha Naphthol – Anthrone – Resorcinol‬‬ ‫) ‪phloroglucinol‬‬ ‫‪ )1‬اختبار موليش ‪molish test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫( اختبار عام للكشف عن المواد الكربوهيدراتية)‬ ‫األساس العلمى لالختبار (تفسير تكون الحلقة البنفسجية)‬ ‫بإضافة حمض كبريتيك متوسط التركيز (‪ )%13-12‬إلى المادة الكربوهيدراتية تتحلل إلى‬ ‫السكريات األحادية المكونة لها‪ ،‬ثم يقوم الحامض بنزع ‪ 3‬جزيئات ماء مكونا إما ‪-5‬هيدروكسي‬ ‫ميثيل فورفيورال أو فورفيورال‪ ،‬الذي يتكثف مع المركب الفينولي ألفا نافثول ويعطي مركب‬ ‫معقد ويعطي حلقة بنفسجية عند سطح انفصال الحامض والمحلول السكري وهذه الحلقة تنتشر‬ ‫بالرج‪.‬‬ ‫علل‪ -:‬فى بعض األحيان قد يتكون لون أخضر أسفل الحلقة ؟‬ ‫ن تيجة وجود زيادة من ألفا نافثول الذي يتفاعل مع حامض الكبريتيك ويتكون مركبات ذات لون‬ ‫أخضر‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:-‬‬  ‫المحاليل المستخدمة ‪-:‬‬ ‫‪ )1‬محاليل سكر‬ ‫‪ )2‬حمض كبريتيك أو هيدروكلوريك ‪%13-12‬‬ ‫‪ )3‬جوهر موليش ‪ ( molish reagent‬محلول ألفا نافثول ‪ %5‬فى كحول إيثايل ‪)%95‬‬ ‫خطوات العمل‬ ‫‪ 1‬مل من محلول السكر ‪ +‬بضع نقاط من جوهر موليش مباشرة ( مع الرج الشديد) ‪ 2 +‬مل‬ ‫‪ %13-12H2SO4‬باحتراس على جدار األنبوبة مع عدم الرج بعد إضافة الحامض ؟ حتى ال‬ ‫تختلط طبقة الحامض مع محلول السكر والجوهر‪.‬‬ ‫المشاهدة ‪ :‬ظهور حلقة بنفسجية عند سطح إنفصال الحامض والمحلول السكرى تنتشر بالرج‪.‬‬ ‫اإلستنتاج ‪ :‬يوجد مادة كربوهيدراتية‪ ،‬حيث اختبار موليش يستخدم للكشف عن الكربوهيدرات‪.‬‬  ‫‪ )2‬اختبار األنثرون ‪Anthrone test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫( اختبار عام للكشف عن المواد الكربوهيدراتية )‬ ‫ثانيا ‪ :-‬األساسالعلميلالختبار‪( :-‬مثل اختبار موليش ولكن الجوهر مختلف)‪.‬‬ ‫بإضافة حمض كبريتيك متوسط التركيز (‪ )%13-12‬إلى المادة الكربوهيدراتية تتحلل إلى‬ ‫السكريات األحادية المكونة لها‪ ،‬ثم يقوم الحامض بنزع ‪ 3‬جزيئات ماء مكونا إما ‪-5‬هيدروكسي‬ ‫ميثيل فورفيورال أو فورفيورال‪ ،‬الذي يتكثف مع المركب الفينولي األنثرون ‪Anthrone‬‬ ‫وتعطى لون أخضر مزرق فى حالة وجود المادة الكربوهيدراتية‪.‬‬ ‫كماهوموضح بالمعادالتاآلتية‪: -‬‬ ‫المحاليل المستخدمة‪-:‬‬ ‫‪ )1‬محاليل السكر‬ ‫‪ )2‬جوهر األنثرون ‪ % 0.2 ( Anthrone reagent‬أنثرون فى حمض الكبريتيك )‬ ‫خطوات العمل ‪-:‬‬ ‫‪ 2‬مل جوهر األنثرون ‪ 1 +‬مل محلول سكر ( مع االحتراس)‬ ‫ويجرى تجربة مقارنة ‪ 1 :‬مل ماء مقطر ‪ +‬جوهر األنثرون‬ ‫( إذا لم يظهر لون توضع األنبوبة فى حمام مائى لمدة دقيقة )‬ ‫المشاهدة ‪ :‬ظهور لون أخضر مزرق‬  ‫االستنتاج ‪ :‬توجد مادة كربوهيدراتية‪ ،‬حيث اختبار األنثرون هو اختبار عام للكشف عن‬ ‫الكربوهيدرات‪.‬‬ ‫وإذا لم يظهر لون فإنه ال يوجد مادة كربوهيدراتية‬ ‫‪ )3‬اختبار تأثير اليود ‪Iodine test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫( اختبار مميز يستخدم للكشف عن النشا أو الجليكوجين والدكسترينات )‬ ‫األساس العلمى لالختبار‪-:‬‬ ‫عند إضافة اليود إلى النشا تعطى لون أزرق واضح‪ ،‬حيث النشا تتكون من مركبين أساسيين هما‬ ‫‪ Amylose , Amylopectin‬واألميلوز يوجد على شكل ‪ alpha Helix‬تتوزع بداخلها‬ ‫جزيئات اليود التى تمتص الضوء المرئى ماعدا اللون األزرق لذا يظهر اللون األزرق لمعقد‬ ‫النشا مع اليود‪.‬‬ ‫وعند إضافة اليود إلى األميلوبكتين والجليكوجين والدكسترينات ( هي نواتج التحليل المائى‬ ‫الجزئي للنشا ) فتعطى لون أحمر‪ /‬بني‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالشكاللتالى‪:-‬‬ ‫نتيجة التحليل المائى الجزئي للنشا يعطي لون بني ( التحلل بواسطة أحماض معدنية )‬ ‫‪Starch….. dextrin…. Maltose….. Glucose‬‬ ‫المحاليل المستخدمة ‪-:‬‬ ‫‪ )1‬محلول النشا ‪%1‬‬ ‫‪ )2‬محلول اليود ( إما محلول يود ‪ 0.01‬ع ) أو ( يود ‪ 0.005‬ع فى يوديد بوتاسيوم ‪)%3‬‬ ‫‪ )4‬اختبار سيلفانوف ‪seliwanoff's test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪: -‬‬ ‫(اختبار يستخدم للتفرقة بين السكريات الكيتونية ‪ ketoses‬والسكريات األلدهيدية ‪، aldoses‬‬ ‫فيعطى نتيجة موجبة مع السكريات الكيتونية بسرعة أكبر من السكريات األلدهيدية )‬ ‫األساس العلمي لالختبار ‪-:‬‬ ‫عند تسخين السكريات مع األحماض المعدنية غير المؤكسدة ‪ %13-12‬تتكون مركبات‬ ‫الفورفيورال‪ ،‬ولكن سرعة تكوين هذه المركبات فى حالة السكريات الكيتونية تكون أكبر منه‬ ‫بكثير عن حالة السكريات األلدهيدية‪.‬‬ ‫وبذلك نجد أن الفركتوز يعطى ‪ 5-hydroxy methyl furfural‬أسرع بالمقارنة بالجلوكوز‪،‬‬ ‫وبالتالي يتكثف هذا المركب الناتج مع الريزورسينول ‪ Resorcinol‬مكونا لون أحمر أسرع‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪: -‬‬ ‫المحاليل المستخدمة‬ ‫‪)1‬محاليل السكر‬ ‫‪ )2‬جوهر سيلفانوف ( يحضر بإذابة ‪ 0.5‬جم ريزورسينول فى ‪ 1000‬مل حمض‬ ‫هيدروكلوريك ‪ 6‬ع )‬ ‫خطوات العمل‬ ‫‪ 2‬مل جوهر سيلفانوف ‪ 0.5 +‬مل عينة السكر ( مع التسخين فى حمام مائي يغلي لمدة ‪ 2‬دقيقة‬ ‫)‬ ‫المشاهدة‬ ‫يظهر لون أحمر فى حالة الفركتوز أسرع من ظهوره فى حالة الجلوكوز‬ ‫االستنتاج‬ ‫اختبار سيلفانوف يعطي نتيجة موجبة مع السكريات الكيتونية (الفركتوز) أسرع من السكريات‬ ‫األلدهيدية (الجلوكوز) وبالتالي يستخدم فى التفرقة بينهما‪.‬‬ ‫نتيجة موجبة (ظهور لون أحمر بسرعة) ‪...‬فركتوز‬ ‫باختصار ‪:‬‬ ‫نتيجة سالبة ( لم يظهر اللون بسرعة ) ‪...‬جلوكوز‬ ‫اختبار خالت األنيلين والفلوروجلوسينول ‪Aniline acetate and phluroglucinol test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪: -‬‬ ‫( يستخدم للتميز بين السكريات الخماسية ‪ pentoses‬والسكريات السداسية ‪، Hexoses‬‬ ‫فيعطينتيجةموجبةمعالسكرياتالخماسيةبسرعةاكبرمنالسكرياتالسداسية‪).‬‬ ‫األساس العلمي لالختبار ‪-:‬‬ ‫عند إضافة الحامض المعدني غير المؤكسد ‪ %13-12‬إلي السكر األحادي ينزع منه ‪ 3‬جزيئات‬ ‫ماء ويتكون الفورفيورال إذا كان سكر خماسي بينما يتكون ‪5-hydroxy methyl furfural‬‬ ‫إذا كان السكر سداسي‪ ،‬ولكن مركب الفورفيورال يتطاير فى بخار الماء عند الغليان وعند‬ ‫تعريض ورقة مبلل ة بخالت األنيلين ألبخرة الفورفيورال تتكثف معا وتعطي معقدا ذو لون‬ ‫وردي بسرعة‪.‬‬ ‫بينما مركبات ‪ 5‬هيدروكسي ميثيل فورفيورال بطئ التطاير ويعطي لون عند تعرض ورقة‬ ‫مبللة بخالت األنيلين لألبخرة المتصاعدة بعد فترة طويلة‪.‬‬ ‫أما إذا أضيف للناتج الفلوروجلوسينول يعطي مع الفورفيورال راسب أسود اللون‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:-‬‬  ‫المحاليل المستخدمة‬ ‫‪ )1‬محاليل السكر محلول سكر سداسي مثل الجلوكوز ‪%1‬‬ ‫محلول سكر خماسي مثل الزيلوز أو األرابينوز ‪%1‬‬ ‫‪ )2‬جوهر خالت األنيلين ‪Aniline acetate reagent‬‬ ‫( ‪ 35‬مل حامض خليك ثلجي ‪ 15 + glacial acetic acid‬مل ماء ‪ 5 +‬مل أنيلين ) وامزج‬ ‫جيدا‬ ‫خطوات العمل‬ ‫‪5‬مل محلول سكر ‪2 +‬مل حمض الهيدروكلوريك ‪ ( %13-12‬مع التسخين للغليان)‬ ‫ثم تعريض األبخرة المتصاعدة لورقة ترشيح مبللة بخالت األنيلين‪ ،‬وكتجربة تأكيدية ‪ :‬يضاف‬ ‫لمحلول الدورق بعد الغليان محلول الفلوروجلوسينول‪.‬‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫سكر خماسي‬ ‫ظهور لون وردي بسرعة‬ ‫سكر سداسي‬ ‫ظهور لون وردي بعد فترة طويلة‬ ‫سكر خماسي‬ ‫ظهور راسب أسود‬  ‫طرق مبنية على القدرة االختزالية للسكريات ‪reducing power of sugars‬‬ ‫تقسم السكريات تبعا لقدرتها االختزالية إلى ‪-:‬‬ ‫‪ -1‬سكريات مختزلة ‪reducing sugars‬‬ ‫وهي التى تحتوي على مجموعة كربونيل حرة ‪ free sugar group‬على صورة هيمي أسيتال‬ ‫أو هيمي كيتال‪.‬‬ ‫‪ -2‬سكريات غير مختزلة ‪non-reducing sugars‬‬ ‫وهي التي يكون فيها مجموعة الهيمي أسيتال أو الهيمي كيتال فى صورة مرتبطة مثل‬ ‫السكريات العديدة وبعض األوليجو( سكروز‪ -‬رافينوز‪ -‬بانوز‪ -‬استاكيوز)‬ ‫ملحوظة ‪ :‬السكريات العديدة مثل النشا والجليكوجين والسليولوز تكون ذات سلسلة طويلة جدا‬ ‫وبالتالي فإن وحدة السكر الطرفية المحتوي على مجموعة هيمي أسيتال حرة ( الطرف المختزل‬ ‫) واحدة بالنسبة لعدد الوحدات البنائية الكبيرة المكونة للسلسلة فتبدو في هذه االختبارات وكأنها‬ ‫غير مختزلة‪.‬‬ ‫القدرة االختزالية للسكريات ‪reducing power of sugars‬‬ ‫هي مدي قدرة هذه السكريات على اختزال أيونات بعض المعادن مثل النحاسيك ‪ Cu++‬والزئبقيك‬ ‫وذلك فى محاليل قلوية إلي أيونات نحاسوز ‪ Cu+‬وزئبقوز وبالتالي تتأكسد السكريات معطية‬ ‫مخلوط من األحماض السكرية‪ ,‬وأشهر هذه التفاعالت تفاعل فهلنج‪.‬‬ ‫اختبار فهلنج ‪fehling test‬‬ ‫( يستخدم للتفرقة بين السكريات المختزلة والسكريات غير المختزلة )‬ ‫يتكون فهلنج من محلولين ‪-:‬‬ ‫محلول (أ) ‪ :‬محلول كبريتات نحاس ‪CuSO4.5H2O‬‬ ‫يحضر عن طريق إضافة ‪ 34.65‬جم كبريتات نحاس في الماء ويكمل المحلول إلى ‪ 500‬مل‬ ‫في دورق عياري‬ ‫‪ -1‬هيدروكسيد صوديوم ‪ -2‬ملح روشيل ( طرطرات الصوديوم‬ ‫محلول (ب) ‪ :‬عبارة عن‬ ‫والبوتاسيوم )‬ ‫جممنهيدروكسيدالبوتاسيوم‪ 173 +‬جم منملحروشيل )‬ ‫يحضربإذابة ‪125‬‬ ‫طرطراتالصوديوموالبوتاسيوم فيالماءويكماللمحلواللي ‪ 500‬ملفيدورقمعياري‬ ‫وال يخلطفهلنجأمعفهلنجباالعنداالستعمالمباشرة؟‬ ‫ألن ملح روشيل مختزل ضعيف‪.‬‬  ‫أهمية ملح روشيل ‪ :‬يجعل النحاس في صورة سهلة قابلة لإلختزال‪.‬‬ ‫األساس العلمي ‪-:‬‬ ‫عند خلط محلول أ مع ب ينتج هيدروكسيد النحاسيك الذي يبقى في صورة معلق ال يرسب‬ ‫الرتباطه بطرطرات الصوديوم والبوتاسيوم‪،‬‬ ‫‪CuSO4 +2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4‬‬ ‫وعند تسخين هيدروكسيدالنحاسيك يتحول إلي أكسيد نحاسيك ‪ ) CuO‬الذي يؤكسد المجموعة‬ ‫ا اللدهيديةأو الكيتونية إلي مجموعة كربوكسيل ويختزل هو إلي أكسيد نحاسوز‪ Cu2O‬في صورة‬ ‫راسب أحمر اللون‪.‬‬ ‫‪2CuO + R-CHO R-COOH + CU2O‬‬ ‫وعند قياس كمية الراسب من أكسيد النحاسوز يمكن معرفة كمية السكر المختزل في المحلول‬ ‫المختبر‪.‬‬ ‫*في الوسط القلوي يحدث عمليات إينولية‪ ،‬حيث يتكون من السكر خليط من المركبات ثنائية‬ ‫اإلينول ‪ Enediols‬التي تنكسر في مواضع الرابطة المزدوجة مكونة مركبات صغيرة نشطة‬ ‫‪ Active fragments‬وهي التي تعتبر العامل المختزل والتي تتأكسد بواسطة أكسيد النحاسيك‬ ‫( العامل المؤكسد ) إلى األحماض المقابلة بينما تختزل أيونات النحاسيك ‪Cu++‬إلى أيونات‬ ‫النحاسوز ذات اللون األحمر الطوبي‪.‬‬ ‫وهذا التفاعل يمكن استخدامه في التقدير الكمي للسكريات المختزلة بتوحيد وضبط ظروف‬ ‫التفاعل مثل درجة الحرارة ومدة التسخين وغير ذلك حتى تكون النتائج متماثلة‪.‬‬  ‫التتمرة أو التغير اإلينولي‬ ‫التغيرات التي تحدث في الجزيء نتيجة النتقال ذرة الهيدروجين من ذرة الكربون المجاورة‬ ‫لمجموعة الكربونيل إلى ذرة أكسجين مجموعة الكربونيل وتتكون مجموعة هيدروكسيل وكذلك‬ ‫تتكون رابطة زوجية بين ذرتي الكربون المتجاورتين‪.‬‬ ‫خطوات االختبار‪:‬‬ ‫‪.1‬يوضع في انبوبة اختبار نظيفة ‪ 1‬مل من كال من محلول فهلنج أومحلول فهلنج ب‬ ‫وترج االنبوبة جيدا‬ ‫‪.2‬يضاف لألنبوبة ‪ 1‬مل من محلول السكر المراد اختباره وتسخيناالنبوبة للغليان‬ ‫المشاهدة واالستنتاج‬ ‫تكون راسب أحمر دليل على وجود سكر مختزل‬ ‫‪ )2‬اختبار بندكت ‪Bendict`s test‬‬ ‫( للتفرقة بين السكريات المختزلة والسكريات غير المختزلة )‬ ‫يعطي هذا االختبار نتيجة موجبة مع جميع السكريات المختزلة حيث تتأكسد السكريات‬ ‫األلدهيدية إلى أحماض لها نفس عدد ذرات الكربون أما السكريات الكيتونية فتعطي أحماض‬ ‫تحتوي كل منها على عدد أقل من ذرات الكربون‪.‬‬ ‫أوال ‪ -:‬الفكرة العامة لالختبار‪:-‬‬ ‫يعتبر هذا االختبار أحد االختبارات المبنية علي القدرة االختزالية ويقصدبالقدرة االختزالية هنا‬ ‫مدي قدرة السكريات علي اختزال أيونات بعض المعادنمثل النحاسيك والزئبقيك في محاليل‬ ‫قلوية إلي أيونات نحاسوز وزئبقوزوبالتالي تتأكسد السكريات معطية مخلوط من األحماض‬ ‫السكرية‪.‬‬ ‫األساس العلمي‪-:‬‬ ‫تفاعل كبريتات النحاس ‪CuSO 4‬مع كربونات الصوديوم فينتج راسبمن كربونات النحاس وعند‬ ‫تفاعل كربونات النحاس مع سترات الصوديومينتج معقد النحاس مع السترات وبالتحليل المائي‬ ‫للمعقد ينتج هيدروكسيدالنحاسيك الي تحول بالتسخين إلي أكسيد نحاسيك) ‪( CuO‬الذي يؤكسد‬ ‫المجموعة االلدهيدية أو الكيتونية إلي مجموعةكربوكسيل ويختزل هو إلي أكسيد نحاسوز )‬ ‫( ‪Cu2O‬في صورة راسبأحمر اللون‪.‬‬ ‫كما هو موضح بالمعادالت اآلتية ‪-:‬‬  ‫ثالثا ‪ :‬المحاليل و االدوات المطلوبة‪:‬‬ ‫‪ -1‬محلول السكر ( محلول سكر مختزل واخر غير مختزل ‪)%2‬‬ ‫‪ -2‬جوهر بندكت ‪ :‬ويحضر بإذابة ‪ 173‬جم كبريتات نحاس في ‪ 100‬ملماء ساخن ويبرد المحلول‬ ‫ثم يخفف الي ‪ 150‬مل بالماء ‪.‬وفي نفسالوقت يذاب ‪ 173‬جم من سترات صوديوم و ‪ 100‬جم‬ ‫كربوناتصوديوم ال مائية في ‪ 600‬مل ماء مع التسخين ويبرد ويخففالمحلول الي ‪ 850‬مل ثم‬ ‫أضف المحلول األول الي المحلول الثانيمع التقليب الجيد‪.‬‬ ‫رابعا خطوات االختبار‪:‬‬ ‫‪ -1‬يوضع في انبوبة اختبار ‪ 2‬مل من جوهر بندكت ثم أضف اليه ‪ 1‬ملمن محلول السكر المختبر‬ ‫‪ -2‬سخن للغليان لمدة ‪ 5 - 2‬دقائق‬ ‫المشاهدة واالستنتاج‪:‬‬ ‫ظهور راسب أحمر دليل على وجود سكر غير مختزل‬ ‫عدم ظهور راسب أحمر دليل على وجود سكر غير مختزل‬ ‫‪ )3‬اختباربارفويد ‪:- Barfoed test‬‬  ‫أوال‪ :‬الفكرة العامة لالختبار‪:-‬‬ ‫يعتبر هذا االختبار أحد االختبارات المبنية علي القدرة االختزالية ويقصدبالقدرة االختزالية هنا‬ ‫مدي قدرة السكريات علي اختزال أيونات بعض المعادنمثل النحاسيك في محلول حمضي إلي‬ ‫نحاسوز وبالتالي تتأكسد السكرياتمعطية مخلوط من األحماض السكرية ‪.‬‬ ‫ثانيا ‪ -:‬األساس العلمي لالختبار‪:-‬‬ ‫وهو مشابه الختبار فهلنج وبندكت من حيث أنه مبني علي القدرة االختزاليةولكن في‬ ‫هذااالختبار يستعمل خالت النحاسيك في وجود حمض الخليك أيهنا الوسط حامضي وليس قلويا‬ ‫كما في فهلنج وبندكت لذلك فإن تكوين أكسيدالنحاسوز يحتاج مدة أطول وتتفاوت المدة علي‬ ‫حسب نوع السكر ‪ ،‬حيثالسكريات األحادية تعطي الراسب بعد دقيقة بينما السكريات الثنائية‬ ‫تحتاجمدة غليان أكثر وبناء علي ذلك يستخدم هذا االختبار في التفرقة بينالسكريات األحادية‬ ‫والثنائية المختزلة‪.‬‬ ‫كما هو موضح بالمعادالت اآلتية ‪-:‬‬ ‫األسباب التي تجعل السكريات األحادية المختزلة تعطي نتيجة موجبة أسرع من السكريات‬ ‫الثنائية المختزلة ‪-:‬‬ ‫‪ ) 1‬محلول بارفويد عبارة عن محلول حمضي ضعيف (حمض خليك) وفي هذا الوسط يوجد‬ ‫حوالي ‪ %95‬من السكريات في شكل حلقي ‪ cyclic form‬وليس لها القدرة على االختزال‬ ‫سواء كانت أحادية أو ثنائية‪ ،‬ويوجد ‪ % 5‬فقط من هذه السكريات على شكل سلسلة مفتوحة وهي‬ ‫التي لها القدرة على اختزال أيونات النحاسيك في محلول بارفويد‪.‬‬ ‫‪ ) 2‬قوة اختزال السكريات األحادية والثنائية في محلول بارفويد كاالتي‪-:‬‬ ‫قوة االختزال للسكر األحادي المختزل = ( كمية السكر التي لها القدرة على االختزال ‪/ %5‬‬ ‫الوزن الجزيئي للسكر األحادي ‪) 180‬‬  ‫قوة االختزال للسكر الثنائي المختزل = ( كمية السكر التي لها القدرة على االختزال ‪/ %5‬‬ ‫الوزن الجزيئي للسكر الثنائي ‪) 342‬‬ ‫لذلك نجد أن السكر األحادي المختزل له قوة اختزال أكبر من الثنائي المختزل حيث حيث يتكون‬ ‫راسب أحمر بسيط بقاع األنبوبة بينما في تجارب االختزال االخري (فهلنج وبندكت) يتكون‬ ‫الراسب األحمر بنسبة كبيرة جدا ‪ ،‬ألن نسبة الصورة المختزلة في الوسط القاعدي هي ‪%100‬‬ ‫حيث يعمل الوسط القلوي على تحويل السكريات المختزلة من الصورة الحلقية إلى الصورة‬ ‫اإلينولية (المفتوحة) ذات قوة االختزال الكبيرة‪.‬‬ ‫ثالثا المحاليل و االدوات المطلوبة‪:‬‬ ‫‪ -1‬محلول السكر ويحضر باستخدام سكر احادي الجلوكوز ‪ %2‬ومحلول سكر ثنائي مختزل‬ ‫مالتوز ‪%2‬‬ ‫‪ -2‬جوهر بارفويد ‪ :‬يذاب ‪ 33‬جم خالت نحاسيك في ‪ 200‬مل ماءمقطر مثلج ثم يضاف لها‬ ‫‪ 18‬مل حامض خليك ثلجي‬ ‫رابعا خطوات االختبار‪:‬‬ ‫‪ -1‬يوضع ‪ 1‬مل من محلول السكر في أنبوبة اختبار نظيفة‬ ‫‪ -2‬يضاف ‪ 3‬مل من جوهر بارفويد مع الرج الجيد‬ ‫‪ -3‬ضع االنبوب في حمام ماء يغلي ويحسب الزمن الالزم لتكوينالراسب ويقارن هذا الوقت بين‬ ‫عينة من سكر احادي جلوكوزواخر من سكر ثنائي مختزل المالتوز‬ ‫خامسا المشاهدة و االستنتاج ‪:‬‬ ‫ظهور راسب أحمر خفيف بعد دقيقة ( دليل على أن العينة سكر أحادي مختزل (جلوكوز))‬ ‫ظهور الراسب بعد فترة طويلة ( العينة سكر ثنائي مختزل (مالتوز))‬  ‫بعضاالختباراتالوصفيةللكربوهيدرات‬ ‫‪ -1‬تكويناألسازونات‪Formation of Osazones‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫يستخدمهذااالختبارللتمييزبينالسكرياتاألحاديةواألليجوالمختزلةعنطريقالفحصالميكرسكوبي‪.‬‬ ‫ثانيا ‪ :-‬األساسالعلميلالختبار‪:-‬‬ ‫عندتسخينمحلولمنسكرمختزلمعالفينيلهيدرازينيتكونمركببللوريأصفريعرفباسماألسازون ‪.‬‬ ‫وفيهذاالتفاعلتتحدالسكرياتاألحاديةعنطريقمجاميعهاااللدهيديةأوالكيتونيةمعالفينيلهيدرازينلتكوينهذه‬ ‫المركباتالتيتختلففيشكلهاالبلوريممايسهلمعهكشفوتعييننوعالسكر ‪.‬‬ ‫واألسازوناتمركباتقليلةالذوبانيسهلفصلهاعليصورةبللوراتنقيةذاتدرجاتانصهارمحددةوتختلففيشكلهاا‬ ‫لبللوريتبعالنوعالسكر‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:-‬‬ ‫ثالثاالمحاليلواالدواتالمطلوبة‪:‬‬ ‫‪ -1‬محالياللسكر‬ ‫‪ -2‬محلواللفينايلهيدرازين ‪ 15 :‬جم فينايلهيدرازينتذابفي ‪250‬ملماءمقطر‬ ‫رابعاخطواتاالختبار‪:‬‬ ‫‪ -1‬يوضعفيأنبوبةجافةنظيفةحوالي ‪ 2‬ملمنمحلواللفينايلهيدرازينهيدروكلوريد‬  ‫‪ -2‬يضاف ‪ 2‬ملمنمحلواللسكرثم ‪1‬‬ ‫جمخالتصوديوماذاكانمركبالفينايلهيدرازينعليصورةكلوريدأمااذاكانعليصورةفينايلهيدرازينفقطفي‬ ‫ضاف ‪ 0.5‬ملحامضخليكبدالمنخالتالصوديوممعالرجالشديد‪.‬‬ ‫‪ -3‬توضعاألنبوبةفيحماممائييغليلمدة ‪ 5 - 30‬دقيقة‪.‬‬ ‫‪ -4‬ع ندتكوينالراسبيبردويالحظظهوربللوراتذاتلونأصفر‪.‬‬ ‫‪ -5‬تؤخذبعضالبللوراتوتفحصميكروسكوبياويرسمشكاللبللورة‪.‬‬ ‫خامساالمشاهدةواالستنتاج‪:‬‬ ‫‪ -2‬اختبارحمضالميوسيك‪:- Mucic acid test‬‬ ‫أوال ‪ :-‬الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫يعتبرهذااالختبارأحداالختباراتالمتخصصةفيالكشفعنسكرالجاالكتوزسواءكانحراأومرتبطا‪.‬‬ ‫ثانيا ‪ :-‬األساسالعلميلالختبار‪:-‬‬ ‫يعملحمضالنيتريكالمركزعليتحليلسكرالالكتوزأوالإليسكرالجلوكوزوالجاالكتوزثميتاكسدالجاالكتو‬ ‫زإليسكرثنائيالكربوكسيلوهوحمضالجاالكتاريك ‪ ( D- galactaric‬حمض الميوسيك‬ ‫‪) Mucic acid‬‬ ‫وتكوينهذاالحامضناتجمنأكسدةالمجموعةاأللدهيديةوالكحوليةاألوليةعليجزئالسكروهوحمضاليذوب‬ ‫فيالماءولهشكلبللوريمعينوتكوينهدليلعليوجودالجاالكتوزحراأومرتبطا‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:‬‬ ‫ثالثاالمحاليلواالدواتالمطلوبة‪:‬‬  ‫‪ -1‬محالياللسكر ‪) %5‬محلولجاالكتوزومحلواللالكتوز(‬ ‫‪ -2‬حمضالنيتريكالمركز‬ ‫رابعاخطواتاالختبار‪:‬‬ ‫ضعفيأنبوبةإختبارنظيفة ‪ 2‬ملمنمحلواللسكر‬ ‫‪.1‬‬ ‫أضفلمحتوياتاالنبوبة ‪ 5‬ملحمضنتريكمركزمعالرجالجيد‬ ‫‪.2‬‬ ‫سخناالنبوبةفيحماممائييغليلمدةنصفساعةثمبرداالنبوبة واتركهالمدة ‪ 12‬ساعة‪.‬‬ ‫‪.3‬‬ ‫افحصالبللوراتبالميكروسكوبواكتبمالحظاتكواستنتاجاتك‬ ‫‪.4‬‬ ‫خامساالمشاهدةواالستتاج‪:‬‬  ‫التحلياللمائيلسكرياتاألوليجوغيرالمختزلةوالسكرياتالعديدة‬ ‫‪ -1‬التحلياللمائيللسكروز‪Hydrolysis of Sucrose -:‬‬ ‫الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫سكرالسكروزسكرثنائيغيرمختزلالرتباطالمجموعةالمختزلةااللدهيديةفيالجلوكوزبالمجموعةالمخت‬ ‫زلةالكيتونيةفيالفركتوزبروابطجليكوسيديةوبذلكيفقدكالمنهذينالسكرينصفتهمااالختزاليةوعليهفانهيع‬ ‫طينتائجسالبةمعاختباراتاالختزالمثالختبارفهلنجأوبندكتوبالتحلياللمائيللسكروزباألحماضأواإلنزيما‬ ‫تالمتخصصة ) االنفرتيز (‬ ‫فإننواتجالتحليلتكونالجلوكوزوالفركتوزويسمىمخلوطهمامعابالسكرالمحولويعطيهانتائجإيجابيةمعنت‬ ‫ائجاالختزااللسابقة‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:-‬‬  ‫‪ -2‬التحلياللمائيللنشا‪: Hydrolysis of Starch‬‬ ‫الفكرةالعامةلالختبار‪:-‬‬ ‫يتمالتحلياللمائيللنشاباألحماضالمعدنيةالمخففةأواإلنزيماتالمتخصصةمثالألميليزوالدياستيزحيثيتحل‬ ‫اللنشاالذائبالذييعطيلونأزرقمعاليودباألحماضالمعدنيةإليأرثودكسترينالذييعطياللوناألحمرثمأكرودك‬ ‫سترينالذياليعطيلونمعاليودثمالمالتوزوفيالنهايةالجلوكوز‪.‬‬ ‫كماهوموضحبالمعادالتاآلتية‪:-‬‬  ‫الدروس العملية في أساسيات الكيمياء الحيوية‬ ‫ثانيا ‪ :‬البروتينات‬ ‫‪ -1‬عرف البروتينات وما هي األقسام المختلفة لها؟‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪ -2‬قارن بين البروتينات الليفية و الكروية ؟‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪ -3‬وضح الفرق بين األحماض األمينية الضرورية و الغير ضرورية مع ذكر أهم‬ ‫المصادر الطبيعية لها؟‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪ -4‬وضح الفرق بين الحمض المعدنى – الحمض العضوي – الحمض األمينى؟‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪ -5‬ما هى الرابطة الببتيدية – رابطة ثنائى الكبريتيد؟‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................................‬‬ ‫‪ -6‬تعرف على األحماض األمينية اآلتية موضحا خصائصها ؟‬ ‫مجموعةالمميزة‬ ‫الرمز‬ ‫الحمض‬ ‫‪-‬خصائصها‬ ‫الكيميائي‬ ‫األميني‬ ‫البرولين‬ ‫‪L-Alanine‬‬ ‫‪Arg‬‬ ‫األسبارتك‬  ‫‪Tyrosine‬‬ ‫الليسين‬ ‫‪Serine‬‬ ‫)‪(His, H‬‬ ‫بعض االختبارات الوصفية للبروتينات‬ ‫الدرس العملي السادس ‪:‬‬ ‫اختبار البيورايت‪: Biuriet test‬‬ ‫أوال ‪ :‬الفكرة العامة لالختبار ‪ :‬يعد هذا االختبار اختبار عام للكشف عن البروتينات‬ ‫وهو متخصص في الكشف عن الروابط الببتيدية الموجودة في السالسل الببتيدية أو في‬ ‫جزئ البروتين‪.‬‬ ‫ثانيا ‪:‬األساس العلمي لالختبار‪ :‬إن مركب البيورايت الذي يتكون عند انصهار اليوريا‬ ‫في وجود أيونات النحاسيك والوسط القلوي يتحد أيون النحاس مع ‪ 4‬ذرات نيتروجين‬ ‫من الروابط البببتيدية وتعطي معقد النحاس مع البيورايت الذي يتراوح لونه ما بين‬ ‫اللون الوردي إلي القرمزي ثم اللون البنفسجي وتتوقف درجة تركيز اللون علي عدد‬ ‫وحدات البيورايت المتكونة كما هو موضح بالمعادالتاآلتية‪:‬‬ ‫تكون البيوريت من اليوريا ‪:‬‬  ‫معقد البروتين مع النحاس‬ ‫ثالثا المحاليل المطلوبة‪ :‬محلول البروتين ‪ -‬اليوريا ‪-‬محلول هيدروكسيد‬ ‫الصوديوم ‪ - % 5‬محلول كبريتات نحاس ‪%1‬‬ ‫رابعا خطوات االختبار ‪:‬‬ ‫‪ )1‬في أنبوبة جافة ونظيفة ضع ‪ 2‬مل من محلول البروتين‬ ‫‪ )2‬ضع ‪ 2‬مل من الصودا الكاوية في األنبوبة السابقة واخلط جيدا‬ ‫‪ )3‬ضع بضع نقاط من كبريتات النحاس الي أنبوبة االختبار تدريجيا‬ ‫‪ )4‬أجري التجربة السابقة في وجود اليوريا كاالتي‪:‬‬  ‫‪.A‬ضع اجم من اليوريا الصلبة في أنبوبة اختبار جافة ونظيفة‬ ‫‪.B‬ضع األنبوبة علي اللهب وسخن تسخينا هينا حتي يتم انصهار‬ ‫اليوريا تماما وخروج كل النشادر من األنبوبة‬ ‫‪.C‬أضف بعد ذلك ‪ 2‬مل من الصودا الكاوية ‪%5‬‬ ‫‪.D‬أضف بضع نقط من كبريتات النحاس ببطء الي األنبوبة‬ ‫السابقة‬ ‫خامسا المشاهدة و االستنتاج ‪:‬‬ ‫دون مالحظاتك واستنتاجاتك في الجدول التالي ‪:‬‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫رقم‬ ‫العينة‬ ‫تدريب ‪:‬‬ ‫‪ )1‬يعطي اختبار البيورايت نتيجة موجبة مع البروتينات ؟‬ ‫‪ )2‬عدم ظهور اللون البنفسجي عند اجراء اختبار البيورايت مع األحماضاألمينية الحرة؟‬ ‫‪ )3‬وضح دور طرطـــــرات الصوديوم و البوتاسيوم فى اختبار البيوريت ؟‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬  ‫الدرس العملي السابع ‪:‬‬ ‫اختبار ميلون ‪: Millon's test‬‬ ‫أوال ‪ :‬الفكرة العامة لالختبار ‪ :‬يعتبر هذا االختبار من االختبارات المتخصصة حيث يعطي نتيجة‬ ‫موجبة مع الحامض األميني التيروسين والذي يحتوي علي نواة الفينول سواء كان هذا الحامض‬ ‫حرا أو مرتبطا في صورة بروتين‬ ‫ثانيا ‪ :‬األساس العلمي لالختبار‪ :‬تتفاعل حلقة الفينول المكونة للحامض األميني تيروسين‬ ‫‪ Tyrosine‬مع جوهر ميلون مكونا معقدات ذات لون أحمر‪.‬هذا ويختلف عمق اللون الناتج مع‬ ‫البروتين بعدد الحلقات الفينولية الداخلة في تكوينه ‪.‬كما يالحظ أنه إذا أجري هذا االختبار مع‬ ‫مركب الفينول ) وهو مركب عضوي غير بروتيني ( فإنه يعطي نتيجة موجبة حيث أنه يستطيع‬ ‫أن يتفاعل مع الزئبق ويكون نفس اللون كما هو موضح بالمعادالتاآلتية ‪:‬‬ ‫ثالثا المحاليل المطلوبة ‪:‬‬ ‫❖ جوهر ميلون ‪ :‬وهو محلول كبريتات الزئبقيك ‪%15‬في حمض كبرتيك ‪% 15‬‬ ‫❖ فينول ‪% 0.1‬‬ ‫❖ نتريت الصوديوم ‪% 1‬‬ ‫رابعا خطوات االختبار‪:‬‬  ‫‪ )1‬يوضع ‪ 1‬مل من البروتين الذي امامك في انبوبة اختبار نظيفة‬ ‫‪ )2‬يوضع ‪ 5‬نقط من جوهر ميلون علي األنبوبة السابقة ثم سخن لمدة ‪ 10‬دقائق علي حمام‬ ‫مائي‬ ‫‪ )3‬يبرد الي درجة حرارة الغرفة ثم يضاف ‪ 5‬نقط من محلول نتريت الصوديوم‬ ‫‪ )4‬كرر التجربة السابقة مع محلول الفينول‬ ‫خامسا المشاهدة و االستنتاج ‪:‬‬ ‫دون مالحظاتك واستنتاجاتك في الجدول التالي‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫رقم‬ ‫العينة‬ ‫تدريب ‪:‬‬ ‫‪ )1‬نتيجة اختبار ميلون عبارة عن تكون لون ‪........‬من معقد الزئبق مع التيروسين‬ ‫‪ )2‬يعتبر اختبار‪........‬من االختبارات المتخصصة في الكشف عن مركب الفينول‬ ‫‪ )3‬لماذا يعطي اختبار ميلون نتيجة موجبة مع الحامض األميني التيروسين فقط دون غيره‬ ‫من األحماضاألمينية ؟‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪....................................................................................‬‬ ‫الدرس العملي الثامن ‪:‬‬  ‫اختبارالزانثوبروتين ‪Xanthoprotien test :‬‬ ‫أوال ‪ :‬الفكرة العامة لالختبار ‪ :‬يعتبر هذا االختبار من االختبارات المتخصصة في الكشف عن‬ ‫(األحماضاألمينيةاألروماتية ) المحتوية علي حلقة بنزين أو مشتقاتها ( مثل الفينيل أالنين‬ ‫‪ Phenyl alanine‬وغيرها سواء كانت حرة أو مرتبطة في شكل سالسل ببتيدية أو بروتين‪.‬‬ ‫ثانيا ‪ :‬األساس العلمي لالختبار ‪ :‬عند تسخين األحماضاألمينيةاألروماتية مع حمض النيتريك‬ ‫المركز يحدث نيترة للحامض األميني العطري ويتكون اللون األبيض ال ذي يتغير إلي اللون‬ ‫األصفر ثم يتحول إلي اللون البرتقالي في الوسط القلوي حيث أنه من المعروف أن مركبات‬ ‫النيترو تتغير لونها في الوسط القلوي من األصفر إلي البرتقالي كما هو موضح بالمعادالتاآلتية‪:‬‬ ‫ثالثا المحاليل المطلوبة ‪:‬‬ ‫❖ حمض نيتريك مركز‬ ‫❖ هيدروكسيد صوديوم ‪%40‬‬ ‫❖ فينول ‪% 0.1‬‬ ‫رابعا خطوات االختبار ‪:‬‬ ‫‪ )1‬يوضع ‪ 2‬مل من محلول البروتين في انبوبة اختبار جافة ونظيفة‬ ‫‪ )2‬يوضع ‪ 2‬مل من حمض النيتريك المركز باألنبوبة السابقة‬  ‫‪ )3‬يسخن علي لهب بنزن ببطء (يجب أال يحدث فوران) أو يسخن في حمام مائي‬ ‫‪ )4‬الحظ تغير المحلول داخل األنبوبة ‪ ,‬برد ثم أضف ‪ 2‬مل هيدروكسيد الصوديوم والحظ‬ ‫تغير اللون ‪.‬‬ ‫خامسا المشاهدة و االستنتاج ‪:‬‬ ‫دون مالحظاتك واستنتاجاتك في الجدول التالي‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫رقم‬ ‫العينة‬ ‫تدريب‪:‬‬ ‫‪ )1‬لماذا يعطي اختبار الزانثوبروتين نتيجة سالبة مع الحامض األميني اسباراتيك ؟‬ ‫‪ )2‬ما هو سبب اعطاء اختبار الزانثوبروتين نتيجة موجبة مع الحمض األميني الفينيل اآلنين‬ ‫؟ ‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫‪...................................................................................‬‬ ‫الدرس العملي التاسع‬ ‫اختبار كبريتيد الرصاص ‪: Lead sulphid test‬‬  ‫أوال ‪ :‬الفكرة العامة لالختبار‪:‬‬ ‫‪NaOH‬‬ ‫‪+‬‬ ‫يعتبر هذا االختبار من‬ ‫االختبارات المتخصصة في‬ ‫الكشف عن األحماضاألمينية‬ ‫الكبريتية مثاللسيستين‬ ‫والسيستئين (المحتوية علي‬ ‫مجموعة السلفاهيدريل ‪) SH‬‬ ‫سواء كانت حرة أو مرتبطة في‬ ‫شكل سالسل ببتيدية أو بروتين‬ ‫‪.‬‬ ‫ثانيا ‪:‬األساس العلمي لالختبار‪ :‬تتفاعل مجمـــــــوعة السلفــاهيدريل ‪ SH‬الموجـودة في‬ ‫الحـــــامض األميني مع الص ـــودا الكــاويــة في وجــــود الحــــــرارة وانطـالق كبــــــــرتيــــــد‬ ‫الصــــــــوديوم والـــــذي يتفــــــــــــــــاعـــــــل بـــــدوره مع خـــــالت الرصـــاص مكونا‬ ‫راسـب أســود أو رمادي من كبرتيد الرصـــــاص ‪ PbS‬وعنـــد إضــافة نقطة من حـــامض‬ ‫الهيدروكلوريـــك ‪ HCl‬المـــــــخفف يح ــدث فـــــــوران ويتــكون راسـب أبيض من كلوريــد‬ ‫الرصـاص كما هو موضـــح بالمعادالتاآلتية ‪:‬‬  ‫ثالثا المحاليل المطلوبة ‪:‬‬ ‫❖ خالت رصاص ‪%2‬‬ ‫❖ هيدروكسيد صوديوم ‪% 5‬‬ ‫❖ حمض هيدروكلوريك ‪% 12‬‬ ‫❖ رابعا خطوات اإلختبار‪:‬‬ ‫‪ )1‬أضف ‪ 1‬مل من محلول البروتين في انبوبة جافة ونظيفة‬ ‫‪ )2‬ضع باألنبوبة ‪ 2‬مل من محلول الصودا الكاوية حتي يصبح الوسط قلوي‬ ‫‪ )3‬أضف الي االنبوبة ‪ 1‬مل من خالت الرصاص‬ ‫‪ )4‬سخن االنبوبة علي لهب برفق وهدوء أو في حمام مائي ثم برد‬ ‫‪ )5‬يالحظ تكون لون أو راسب رمادي باألنبوبة‬ ‫‪ )6‬أضف الي هذا الراسب ‪ 3‬مل من حمض الهيدروكلوريك الذي أمامك والحظ تصاعد‬ ‫رائحة كبرتيد الهيدروجين المميز‬ ‫خامسا المشاهدة واالستنتاج ‪:‬‬ ‫دون مالحظاتك واستنتاجاتك في الجدول التالي‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫رقم‬ ‫العينة‬  ‫تدريب‬ ‫‪ )1‬اليعطياختباركبرتيدالرصاصنتيجةموجبةمعالحامضاألميني‬ ‫الفينيالالنين؟‬ ‫‪ )2‬وضحسببإعطاءاختباركبرتيدالرصاصنتيجةموجبةمع‬ ‫األحماضاالمينيةالكبريتية؟‪.‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫الدرس العملي العاشر‬ ‫التحليل المائى البروتينات ‪: Protein hydrolysis‬‬ ‫الفكرة العامة لالختبار ‪:‬‬ ‫تجري عملية التحليل المائي للبروتينات بغليانها مع االحماض المعدنية ذات تركيز عالي حوالي‬ ‫‪ 6‬عياري وكذلك القلويات المركزة ذات تركيز ‪20 %‬أوبتأثير اإلنزيمات المتخصصة مثل‬ ‫انزيمات الببسين – التربسين – الكيموتربسين وذلك عند حرارة ‪ 37‬م‪.‬‬ ‫ويمكن تتبع عملية التحليل الم ائي للبروتينات وتفككها الي مركبات أبسط منها بواسطة اختبار‬ ‫البيورايت‬ ‫تدريب‬ ‫‪.A‬ماهى هى العوامل المؤثرة على تحليل البروتين؟‬ ‫‪.B‬ما هى االنزيمات التى تقوم بتحليل البروتين ؟‬ ‫‪.C‬اذكر االختبارات التى يمكن بها تتبع تحلل البروتين؟‬ ‫‪.D‬لماذا يعطي اختبار البيورايت نتيجة سالبة مع االحماضاألمينية المنفردة ؟‬ ‫‪.E‬اذكر بالمعادالتاالساس العلمي الذي بني عليه التحليل المائي للبروتينات؟‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫الدرس العملي الحادى عشر‬ ‫ترسيب و دنترة البروتينات‬ ‫ما المقصود بكل من ترسيب و دنترة البروتين؟‬ ‫ما هى العوامل التى تودى لترسيب البروتين ؟‬ ‫وضح تاثير عملية الدنتره على البروتين؟‬ ‫مستعينا بالرسومات التوضيحية وضح كل من ‪:‬‬ ‫❖ الصورة األيونية و الكاتيونية للحمض األميني‬  ‫❖ تأثير أمالح المعادن الثقيلة على البروتين‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................‬‬ ‫ثالثا ‪ :‬اللبيدات‬ ‫‪ -1‬عرف اللبيدات مع توضيح أقسمها المختلفة؟‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪...............................................................................‬‬ ‫‪...........................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪.............................................................................‬‬ ‫‪............................................................................‬‬ ‫االختبارات الوصفية لـليبيدات)‪(Qualitative tests of lipids‬‬ ‫اوال ‪ :‬اختبار الذوبانية)‪:(Solubility test‬‬ ‫الهدف من االختبار ‪:‬‬ ‫ان يكون الطالب قادرا علي التفريق بين الدهون والمحاليل البيولوجية االخري عن طريق الكشف‬ ‫عن ذوبانية الدهون في الماء والمذيبات العضوية‬ ‫االدوات ‪:‬‬  ‫‪ -1‬حمام مائي – حمام ثلجي‬ ‫‪ -2‬انابيب اختبار – حامل انابيب‬ ‫‪ -3‬حمض كبرتيك مركز‬ ‫‪ -4‬مذيبات مختلفة مثل البنزين – كلوروفورم‪ -‬اثير‪ -‬ماء مقطر‬ ‫‪ -5‬زيت زيتون – زبدة‬ ‫‪ -6‬حمض هيدروكلوريك‬ ‫االساس العلمي‪:‬‬ ‫التذوب الزيوت والدهون في الماء نظرا لطبيعتها غير القطبية ولكنها تذوب في المذيبات العضوية‬ ‫مثل البنزين والكلورفورم واالثير والكحول المغلي‪.‬‬ ‫طريقة العمل‪:‬‬ ‫‪ -1‬خذ عينة من الزيت أو الدهن وضعها في انابيب إختبار جافة ونظيفة ورقمها‬ ‫‪ -2‬أضف لكل أنبوب نوعا مختلفا من المذيبات المختلفة المذكورة اعاله‬ ‫دون النتائج في الجدول التالي‬ ‫االستنتاج‬ ‫الذوبان‬ ‫او المذيب‬ ‫العينة‬ ‫رقم‬ ‫االنبوبة‬ ‫اجب عن االسئلة التالية‪:‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪.................................................................................................‬‬ ‫‪ -1‬ضع عالمة صح أو خطأ مع تصحيح الخطأ‬ ‫)‬ ‫‪ -1‬أضافة الماء الي زيت الزيتون يعمل علي اذابة زيت الزيتون (‬ ‫‪.......................................................................................................‬‬ ‫‪..............................................................‬‬ ‫‪ -2‬عدم ذوبانية المارجرين في الماء نظرا لطبيعة الماء الغير قطبية( )‬ ‫‪.......................................................................................................‬‬ ‫‪.......................................................................................................‬‬ ‫‪.......................................................................................................‬‬ ‫‪..........................‬‬ ‫)‬ ‫(‬ ‫‪ -3‬يذوب زيت بذرة القطن في الكلوروفورم‬ ‫‪.......................................................................................................‬‬ ‫‪..............................................................‬‬ ‫ثانيا ‪ :‬تحضير االحماض الدهنية‬ ‫الهدف من التجربة‪:‬‬ ‫فصل االحماض الدهنية من المواد الدهنية‬ ‫االساس العلمي‪:‬‬ ‫عند اضافة حمض الهيدروكلوريك المخفف ‪ %10‬الي محلول الصابون في وسط تلجي بارد تتكون‬ ‫طبقة زيتية طافية علي السطح وهي عبارة عن الحمض الدهني‪.‬‬ ‫االدوات ‪:‬‬ ‫‪ -1‬محلول حمض الهيدروكلوريك المخفف ‪%10‬‬ ‫‪ -2‬محلول الصابون ( ‪ 5‬ملليلتر )‬ ‫‪ -3‬حمام ثلجي‬ ‫‪ -4‬أنابيب اختبار‬ ‫طريقة العمل‪:‬‬  ‫‪ -1‬ضع حوالي ‪ 5‬ملليلتر من محلول الصابون بانبوبة اختبار‬ ‫‪ -2‬ضع انبوبة االختبار في حمام ثلجي‬ ‫‪ -3‬اضف ‪ 5‬الي ‪ 8‬نقاط من حمض الهيدروكلوريك المخفف ‪%10‬‬ ‫ الحظ تكون طبقة زيتية طافية علي سطح االنبوبة‬ ‫اجب عن االسلة التالية‪:‬‬ ‫‪ -1‬ماهي الطبقة الزيتية الطافية؟‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪...........................‬‬ ‫‪ -2‬اذا استخدمت بالميتات الصوديوم – او استيرات الصوديوم كمحلول صابون ماهو الحمض‬ ‫الدهني الذي يمكن فصله في الحالتين؟‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪............................................................................................................‬‬ ‫‪...........................‬‬ ‫ثالثا‪ :‬اختبار االكرولين)‪(Acrolein test‬‬ ‫الهدف ‪:‬‬ ‫يستخدم هذا اإلختبار للكشف عن وجود الليبيداتلوجود الجزء الجليسرولي بها ‪،‬فهو يعطي نتيجة‬ ‫موجبة سواء كان الجليسرول حرا او مرتبطا وتظهر رائحة مميزة من األكرولين‪.‬ويفرق هذا‬ ‫االختبار ايضا بين االحماض الدهنية ووالدهون المتعادلة‪.‬‬ ‫االساس العلمي‪:‬‬ ‫تعمل بيكبريتات البوتاسيوم ‪( KHSO4‬الصلبة) او كلوريد الكالسيوم ‪ CaCl2‬على نزع جزيئين‬ ‫ماء )‪ (dehydration‬من كل جزئ جليسرول بالزيوت أو الدهون حيث يتحول الجليسرول إلى‬ ‫مركب اكرولين ‪ acrolein‬والذي يمكن تمييزه من رائحته النفاذةالمهيجة لألغشية (ابخرة زرقاء‬ ‫اللون لها رائحة السمن المحروق)‪.‬‬ ‫طريقة العمل‪:‬‬ ‫‪ -1‬ضع عدة نقط من الجليسرول أو الدهن في أنبوبة إختبار ‪ ،‬ثم أضف ‪ 2/1‬جم من مسحوق‬ ‫كلوريد الكالسيوم‬ ‫‪ -2‬سخن بلطف علي لهب والحظ تصاعد ابخرة ( زرقاء اللون تقريبا ) ولها رائحة السمن‬ ‫المحروق تؤدي الي تهيج االغشية التنفسية‬ ‫‪ -3‬الحظ انه باستخدام ورق الترشيح المبلل بمحلول من نترات الفضة يمكن الكشف عن‬ ‫أبخرة االكرولين ‪ ،‬وذلك الختزال الفضة ‪ ،‬والتي تترسب علي الورقة في صورة راسب‬ ‫أسود‪.‬‬ ‫دون ماتالحظه في الجدول التالي‬ ‫االستنتاج‬ ‫المشاهدة‬ ‫رقم العينة‬  ‫اجب عن االسئلة التالية‬ ‫‪ -1‬يعطي اختبار االكرولين نتيجة موجبة مع ‪...............‬و ‪...................‬‬ ‫‪ -2‬تعتبر مادة ‪...............‬مادة نازعة للماء وتستخدم في اختبار االكرولين‬ ‫‪ -3‬تتهيج االغشية التنفسية عند اجراء اختبار االكرولين بسبب تصاعد ابخرة زرقاء‬ ‫اللون من مركب ‪.................‬‬ ‫‪ -4‬يرجع دور نترات الفضة في اختبار االكرولين الي ‪...........................‬‬ ‫‪ -5‬من وجهة نظرك هل يعتبر اختبار االكرولين اختبار متخصص للكشف عن الدهون‬ ‫؟ ولماذا؟‬ ‫‪..................................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................................‬‬ ‫‪..................................................................................................‬‬ ‫‪....................................................................................‬‬