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Questions and Answers

¿Qué características de las colonias de Clostridium difficile se observan en agar CCFA bajo luz ultravioleta?

  • Colonias incoloras
  • Diámetro de 10 a 12 mm
  • Fluorescencia amarilla verdosa (correct)
  • Color azul

El olor que exhalan las colonias de Clostridium difficile es similar al de las heces de los caballos.

True (A)

¿Cuánto tiempo se requiere para que crezcan las colonias de Clostridium difficile en agar CCFA?

48 horas

Clostridium difficile es un organismo _____ positivo y forma esporas.

<p>gram</p> Signup and view all the answers

Asocia los tipos de cultivo o tinción con su característica principal:

<p>Agar CCFA = Fluorescencia amarilla verdosa Tinción de Gram = Observación de esporas Cultivo de sangre = Examen directo del espécimen Microscopio electrónico = Detección a nivel celular</p> Signup and view all the answers

La temperatura óptima para el crecimiento de Clostridium difficile es:

<p>30-37°C (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función principal del inmunoensayo enzimático (ELISA) en el proceso descrito?

<p>Detección de toxinas A y B de Clostridium difficile (D)</p> Signup and view all the answers

El color verde en el resultado del test indica la presencia de toxinas de Clostridium difficile.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué se debe hacer con la muestra de heces antes de realizar el inmunoensayo?

<p>Centrifugar la muestra hasta obtener el sobrenadante.</p> Signup and view all the answers

La prueba de ELISA utiliza _________ específicos para detectar las toxinas A y B.

<p>anticuerpos</p> Signup and view all the answers

Asocia las partes del proceso con su descripción correspondiente:

<p>Glutamato Deshidrogenasa (GDH) = Útil para la detección simultánea Toxina A y B = Sustancias que se detectan en el ensayo Muestra de heces = Material en el que se analizan las toxinas Proceso de incubación = Período de espera antes de añadir el segundo anticuerpo</p> Signup and view all the answers

¿Qué se añade al pocillo después de lavar para continuar el proceso de ELISA?

<p>Un segundo anticuerpo conjugado con una enzima (A)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes especies de Clostridium causa botulismo?

<p>Clostridium botulinum (B)</p> Signup and view all the answers

Clostridium difficile es un bacilo Gram negativo.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de toxinas produce Clostridium difficile?

<p>Toxina A y Toxina B</p> Signup and view all the answers

Clostridium difficile se transmite vía _____ porque se puede ingerir en su forma vegetativa o esporulada.

<p>fecal-oral</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función principal de la Toxina B de Clostridium difficile?

<p>Causa inflamación intestinal (B)</p> Signup and view all the answers

Asocia las siguientes especies de Clostridium con sus efectos clínicos:

<p>Clostridium botulinum = Botulismo Clostridium difficile = Colitis pseudomembranosa Clostridium perfringens = Gangrena gaseosa Clostridium tetani = Tétanos</p> Signup and view all the answers

La formación de endosporas en Clostridium difficile le permite sobrevivir en ambientes hostiles.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

Clostridium difficile es un _____ estricto, lo que significa que no puede crecer en presencia de oxígeno.

<p>anaerobio</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es el síntoma más común de la colitis pseudomembranosa?

<p>Diarrea acuosa y maloliente (D)</p> Signup and view all the answers

La colitis pseudomembranosa se caracteriza por la formación de placas amarillentas en la mucosa del colon.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué dos toxinas principales produce Clostridium difficile al colonizar el intestino?

<p>Toxinas A y B</p> Signup and view all the answers

Las muestras utilizadas para el diagnóstico de la infección pueden ser heces, biopsias ________ y superficie contaminadas.

<p>intestinales</p> Signup and view all the answers

Asocia el tipo de prueba con su función:

<p>ELISA = Detección de toxinas A y B Prueba rápida = Detección de antígenos y toxinas PCR = Identificación de genes de toxinas Cultivo = Aislamiento del microorganismo</p> Signup and view all the answers

¿Qué efecto tienen las toxinas de Clostridium difficile en la mucosa intestinal?

<p>Causan inflamación y formación de seudomembranas (A)</p> Signup and view all the answers

La deshidratación es un síntoma común de la colitis pseudomembranosa.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué método diagnóstico se utiliza para demostrar la presencia de toxinas en muestras de heces?

<p>Inmunoensayo enzimático (ELISA)</p> Signup and view all the answers

Clostridium difficile se germina en un entorno ________ y se transforma en su forma vegetativa.

<p>anaeróbico</p> Signup and view all the answers

Asocia el síntoma con su descripción:

<p>Diarrea acuosa = Frecuentemente maloliente Cólicos = Dolor abdominal intenso Náuseas = Sensación de malestar estomacal Fiebre = Elevación de la temperatura corporal</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Clostridium difficile

A bacterium that can cause infections, often in hospitalized patients.

Agar CCFA

A specialized growth media that promotes the growth of Clostridium difficile.

Colony Morphology (CCFA)

The visual characteristics of a growing C.difficile colony on CCFA agar, like size, color, and fluorescence.

Gram Stain

A staining technique that helps identify bacteria based on their cell wall structure by differentiating gram positive and gram negative bacteria.

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Spores

Resistant dormant forms of bacteria that can survive harsh environments and can lead to infections.

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Microscopic Examination

Using a microscope to examine the colony or bacteria and observing its form, shape, structures under specific microscopic techniques

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Clostridium difficile

A bacterium that causes colitis pseudomembranosa (inflammation of the colon).

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C. difficile toxins

Toxins produced by Clostridium difficile leading to inflammation and intestinal damage in infections.

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Toxins A and B

Two main toxins produced by C. difficile, Toxin A is an enterotoxin, Toxin B is a cytotoxin causing severe damage.

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Transmission route

Clostridium difficile is transmitted via the fecal-oral route, through spores.

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Spore-forming

Clostridium difficile forms durable spores that enable survival in the environment for extended periods.

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Anaerobic bacteria

Clostridium difficile is a bacteria that grows without oxygen.

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Gram-positive

Clostridium difficile is gram positive, meaning that it takes up gram stain and is a specific type of bacteria when tested.

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Fecal-oral transmission

Transmission of infection through the ingestion of contaminated fecal matter or spores.

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Clostridium difficile infection

Infection caused by the bacterium Clostridium difficile, often following antibiotic use, leading to intestinal inflammation and diarrhea.

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Toxins A and B

Harmful substances produced by C. difficile that trigger inflammation and damage to the intestinal lining.

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Pseudomembranous colitis

Inflammation of the colon characterized by the formation of yellowish plaques (false membranes) on the intestinal lining.

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Antibiotic-associated diarrhea

Diarrhea that occurs after taking antibiotics, often caused by disruption of the gut's normal bacteria and allowing C.difficile to proliferate

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Fecal sample

A sample of stool used to identify the presence of Clostridium difficile or its toxins in diagnosis.

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ELISA test

A blood test that detects the presence of toxins A and B produced by C.difficile.

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PCR test

Identifies C. difficile by amplifying the genetic material of the bacteria using specific DNA sequences.

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Rapid test

A quick test for detecting C.difficile toxins, often using a colorimetric reaction.

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Symptom of pseudomembranous colitis

Symptoms can include watery diarrhea, abdominal pain, fever, and nausea.

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Bacterial toxins

Inflammatory and damaging components produced by bacteria like C. difficile, causing cellular breakdown.

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ELISA Test

A method using antibodies to detect Clostridium difficile toxins (A and B) in stool samples.

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Rapid Test

A quick test to detect Clostridium difficile toxins directly in stool samples using special reagents to look for lines.

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Stool Sample Prep

Treating and preparing a stool sample for toxin detection tests.

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Toxins A & B

Harmful substances produced by Clostridium difficile that cause illness by damaging intestinal cells.

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Microtiter Plate

A plate with many small wells used for lab work (as mentioned for ELISA).

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Centrifugation

A process to separate solid from liquid parts of a stool sample by spinning it in a machine.

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Study Notes

Clostridium Difficile Generalidades

  • Género: Clostridium
  • Especie: Existen más de 200, pero las de importancia clínica son:
    • Clostridium botulinum (causa botulismo)
    • Clostridium difficile (causa colitis pseudomembranosa)
    • Clostridium perfringens (causa gangrena gaseosa)
    • Clostridium septicum
    • Clostridium tetani (causa tétanos)

Características de Clostridium difficile

  • Bacilo Gram positivo (+)
  • Anaerobio estricto
  • Móvil, flagelos perítricos
  • Formador de esporas, ovaladas y subterminales
  • Se encuentra en el ambiente y como microbiota gastrointestinal
  • Produce 2 citotoxinas que causan infección intestinal

Factores de Virulencia

  • Toxina A: Enterotoxina
  • Toxina B: Citotoxina
  • Hialuronidasa: Enzima que produce actividad hidrolítica del ácido hialurónico
  • Formación de endosporas: Permite la supervivencia durante meses en el medio hospitalario

Toxinas

  • Toxina A:
    • Enterotoxina
    • Aumenta la permeabilidad de la mucosa intestinal
    • Produce inflamación intestinal por la liberación de citocinas proinflamatorias que causa quimiotaxis
  • Toxina B:
    • Citotoxina
    • Más potente que la toxina A
    • Responsable de los síntomas más graves
    • Induce la despolimerización de la actina, causando pérdida del citoesqueleto celular y apoptosis
    • Puede llevar a necrosis y daño severo del tejido intestinal

Patogenia

  • Se transmite vía fecal-oral, en forma vegetativa o esporulada
  • La infección comienza al ingerir esporas que germinan en un entorno anaeróbico
  • Al germinar, coloniza el colon y produce toxinas A y B
  • Las toxinas provocan inflamación grave de la mucosa intestinal, dando lugar a la formación de seudomembranas en el colon
  • Destrucción de la mucosa intestinal, alterando la absorción de líquidos y electrolitos, resultando en diarrea severa y desequilibrio electrolítico

Cuadro Clínico

  • Diarrea asociada a antibióticos: es el síntoma más común, después del uso de antibióticos que alteran la microbiota intestinal
  • Colitis pseudomembranosa: inflamación del colon caracterizada por la formación de placas amarillentas en la mucosa

Síntomas

  • Diarrea acuosa, maloliente
  • Cólicos y dolor abdominal
  • Fiebre
  • Náuseas
  • Vómito
  • Pérdida de apetito
  • Pérdida de peso
  • Deshidratación

Tipos de Muestras

  • Heces
  • Biopsias intestinales
  • Colonoscopia
  • Superficie contaminadas (esporas)

Diagnóstico

  • Pruebas para detección de toxinas (ELISA, Ensayo citotoxicidad, GDH)
  • Pruebas moleculares (PCR)
  • Cultivo

Detección de Toxinas (Prueba rápida)

  • Útil para la detección simultánea de Glutamato Deshidrogenasa (GDH), de Toxina A y B en muestras de heces

Inmunoensayo Enzimático (ELISA)

  • Técnica que se basa en anticuerpos monoclonales para detectar directamente toxinas A y B en heces.
  • Proceso: Se procesa la muestra para obtener las toxinas y se colocan en pocillos con anticuerpos específicos para toxinas A y B. Tras un periodo de incubación, se añaden anticuerpos marcados con enzimas, y luego un sustrato que permite medir la intensidad del color proporcional a la cantidad de toxina en la muestra.

Ensayo de Citotoxicidad

  • Permite detectar la toxina B en heces, utilizando células Vero
  • Proceso: Se centrifuga la muestra de heces para obtener el sobrenadante. El sobrenadante se inocula a las células Vero. Si la toxina B está presente, daña las células Vero.

Medios de Cultivo

  • Agar sangre CDC: Para material fecal previamente tratado con alcohol al 50% por una hora o calor. Las colonias crecen después de 48 horas de incubación a 37°C
  • Agar yema de huevo: Útil para material fecal previamente tratado. Los resultados son negativos para lecitinasa y lipasa.
  • Agar CCFA (fructosa-cicloserina-cefoxitina): Las colonias crecen después de 48 horas de incubación a 30-37°C .Bajo luz ultravioleta, muestra fluorescencia amarilla verdosa.

Morfología de la colonia

  • Agar sangre CDC: Coloias no hemolíticas. Grises translúcidas, de 2-4 mm de diámetro, ligeramente elevadas y con orillas filamentosas.
  • Agar yema de huevo: Colonias blanquecinas y opacas con bordes irregulares.
  • Agar CCFA: Colonias de 5-8 mm de diámetro, fluorescencia amarilla verdosa bajo luz ultravioleta.
  • Otras: Bajo luz normal, son amarillentas y expelen un olor similar al de las heces de los caballos.

Tinción de Gram

  • Útil para el examen directo del espécimen y la observación de las esporas.

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