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Clostridium Difficile Generalidades

• Género: Clostridium
• Especie: Existen más de 200, pero las de importancia clínica son:
  • Clostridium botulinum (causa botulismo)
  • Clostridium difficile (causa colitis pseudomembranosa)
  • Clostridium perfringens (causa gangrena gaseosa)
  • Clostridium septicum
  • Clostridium tetani (causa tétanos)

Características de Clostridium difficile

• Bacilo Gram positivo (+)
• Anaerobio estricto
• Móvil, flagelos perítricos
• Formador de esporas, ovaladas y subterminales
• Se encuentra en el ambiente y como microbiota gastrointestinal
• Produce 2 citotoxinas que causan infección intestinal

Factores de Virulencia

• Toxina A: Enterotoxina
• Toxina B: Citotoxina
• Hialuronidasa: Enzima que produce actividad hidrolítica del ácido hialurónico
• Formación de endosporas: Permite la supervivencia durante meses en el medio hospitalario

Toxinas

• Toxina A:
  • Enterotoxina
  • Aumenta la permeabilidad de la mucosa intestinal
  • Produce inflamación intestinal por la liberación de citocinas proinflamatorias que causa quimiotaxis
• Toxina B:
  • Citotoxina
  • Más potente que la toxina A
  • Responsable de los síntomas más graves
  • Induce la despolimerización de la actina, causando pérdida del citoesqueleto celular y apoptosis
  • Puede llevar a necrosis y daño severo del tejido intestinal

Patogenia

• Se transmite vía fecal-oral, en forma vegetativa o esporulada
• La infección comienza al ingerir esporas que germinan en un entorno anaeróbico
• Al germinar, coloniza el colon y produce toxinas A y B
• Las toxinas provocan inflamación grave de la mucosa intestinal, dando lugar a la formación de seudomembranas en el colon
• Destrucción de la mucosa intestinal, alterando la absorción de líquidos y electrolitos, resultando en diarrea severa y desequilibrio electrolítico

Cuadro Clínico

• Diarrea asociada a antibióticos: es el síntoma más común, después del uso de antibióticos que alteran la microbiota intestinal
• Colitis pseudomembranosa: inflamación del colon caracterizada por la formación de placas amarillentas en la mucosa

Síntomas

• Diarrea acuosa, maloliente
• Cólicos y dolor abdominal
• Fiebre
• Náuseas
• Vómito
• Pérdida de apetito
• Pérdida de peso
• Deshidratación

Tipos de Muestras

• Heces
• Biopsias intestinales
• Colonoscopia
• Superficie contaminadas (esporas)

Diagnóstico

• Pruebas para detección de toxinas (ELISA, Ensayo citotoxicidad, GDH)
• Pruebas moleculares (PCR)
• Cultivo

Detección de Toxinas (Prueba rápida)

• Útil para la detección simultánea de Glutamato Deshidrogenasa (GDH), de Toxina A y B en muestras de heces

Inmunoensayo Enzimático (ELISA)

• Técnica que se basa en anticuerpos monoclonales para detectar directamente toxinas A y B en heces.
• Proceso: Se procesa la muestra para obtener las toxinas y se colocan en pocillos con anticuerpos específicos para toxinas A y B. Tras un periodo de incubación, se añaden anticuerpos marcados con enzimas, y luego un sustrato que permite medir la intensidad del color proporcional a la cantidad de toxina en la muestra.

Ensayo de Citotoxicidad

• Permite detectar la toxina B en heces, utilizando células Vero
• Proceso: Se centrifuga la muestra de heces para obtener el sobrenadante. El sobrenadante se inocula a las células Vero. Si la toxina B está presente, daña las células Vero.

Medios de Cultivo

• Agar sangre CDC: Para material fecal previamente tratado con alcohol al 50% por una hora o calor. Las colonias crecen después de 48 horas de incubación a 37°C
• Agar yema de huevo: Útil para material fecal previamente tratado. Los resultados son negativos para lecitinasa y lipasa.
• Agar CCFA (fructosa-cicloserina-cefoxitina): Las colonias crecen después de 48 horas de incubación a 30-37°C .Bajo luz ultravioleta, muestra fluorescencia amarilla verdosa.

Morfología de la colonia

• Agar sangre CDC: Coloias no hemolíticas. Grises translúcidas, de 2-4 mm de diámetro, ligeramente elevadas y con orillas filamentosas.
• Agar yema de huevo: Colonias blanquecinas y opacas con bordes irregulares.
• Agar CCFA: Colonias de 5-8 mm de diámetro, fluorescencia amarilla verdosa bajo luz ultravioleta.
• Otras: Bajo luz normal, son amarillentas y expelen un olor similar al de las heces de los caballos.

Tinción de Gram

• Útil para el examen directo del espécimen y la observación de las esporas.