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Questions and Answers
¿Cuál es la función principal de un vector en técnicas de clonación o ADN recombinante?
¿Cuál es la función principal de un vector en técnicas de clonación o ADN recombinante?
¿Qué caracteriza a los plásmidos bacterianos?
¿Qué caracteriza a los plásmidos bacterianos?
¿Cuál es el propósito del sitio de clonación múltiple (MCS) en un plásmido?
¿Cuál es el propósito del sitio de clonación múltiple (MCS) en un plásmido?
¿Qué se inserta en el sitio de clonación múltiple (MCS) para su posterior estudio?
¿Qué se inserta en el sitio de clonación múltiple (MCS) para su posterior estudio?
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¿Qué función cumple la región promotora en un plásmido de expresión?
¿Qué función cumple la región promotora en un plásmido de expresión?
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¿Cuál es el componente vital para los vectores de expresión que determina en qué tipos de células se expresa el gen y la cantidad de proteína recombinante producida?
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¿Cuál es el tipo de enzimas de restricción que no escinde el ADN en secuencias específicas?
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¿Qué se genera al cortar el ADN con enzimas de restricción?
¿Qué se genera al cortar el ADN con enzimas de restricción?
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¿Cuál es el paso en la clonación molecular donde se inserta el gen diana en un plásmido apropiado?
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¿Por qué es importante que los sitios de restricción estén ausentes en el gen diana?
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Study Notes
Vectores y plásmidos
- Un vector es una molécula de ADN (a menudo plásmido o virus) que se utiliza para transportar un segmento de ADN particular a una célula huésped.
- Los vectores ayudan a replicar y/o expresar la secuencia de ADN insertada dentro de la célula huésped.
Características de los plásmidos
- Los plásmidos son moléculas de ADN pequeñas, circulares y de doble cadena, distinta del ADN cromosómico de una célula.
- Los plásmidos bacterianos a menudo contienen genes que codifican enzimas que pueden beneficiar a la célula huésped.
Elementos de un plásmido
- Origen de replicación (ORI): Secuencia de ADN que permite el inicio de la replicación dentro de un plásmido.
- Resistencia a los antibióticos: Permite la selección de bacterias que contienen plásmidos.
- Sitio de clonación múltiple (MCS): Segmento corto de ADN que contiene varios sitios de restricción.
- Inserto: Gen promotor u otro fragmento de ADN clonado en el MCS para su posterior estudio.
- Región promotora: Impulsa la transcripción del gen objetivo.
- Marcador seleccionable: El gen de resistencia a los antibióticos permite la selección en bacterias.
Factores que afectan las copias
- Condiciones de crecimiento: Aireación, temperatura, volumen de cultivo, antibiótico y medio.
- Inóculo de cultivo: Las bacterias recién rayadas tienen un mayor número de copias.
- La incubación durante 12 a 16 horas tiende a dar números de copias más altos.
Enzimas de restricción
- Son enzimas bacterianas que escinden el ADN de doble cadena.
- Tipo I: Importante en la función bacteriana, pero no escinde el ADN en secuencias específicas.
- Tipo II: Sitios altamente específicos para la escisión del ADN (Clonación).
Aplicación de las enzimas de restricción
- Clonación molecular: Mapeo de ADN y generación de fragmentos de diferentes longitudes.
- Corte/digestión: El uso de enzimas de restricción es crítico en la tecnología de ADN recombinante e ingeniería genética.
Reconocimiento de secuencia palindrómica
- La secuencia 5' a 3' es idéntica en cada cadena de ADN/Igual cuando una cadena se lee de izquierda a derecha y la otra se lee de derecha a izquierda.
Clonación molecular
- Aislamiento del ADN diana (insertar)
- Ligación del inserto en un plásmido apropiado
- Transformación de plásmido recombinante
- Selección y cribado
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Description
Prueba tus conocimientos sobre los vectores de ADN, que se utilizan para transportar segmentos de ADN a células huésped, y los plásmidos, pequeñas moléculas de ADN circulares. Aprende sobre su función en la clonación y la terapia génica.