Vectores de ADN y Plásmidos

Vectores y plásmidos

• Un vector es una molécula de ADN (a menudo plásmido o virus) que se utiliza para transportar un segmento de ADN particular a una célula huésped.
• Los vectores ayudan a replicar y/o expresar la secuencia de ADN insertada dentro de la célula huésped.

Características de los plásmidos

• Los plásmidos son moléculas de ADN pequeñas, circulares y de doble cadena, distinta del ADN cromosómico de una célula.
• Los plásmidos bacterianos a menudo contienen genes que codifican enzimas que pueden beneficiar a la célula huésped.

Elementos de un plásmido

• Origen de replicación (ORI): Secuencia de ADN que permite el inicio de la replicación dentro de un plásmido.
• Resistencia a los antibióticos: Permite la selección de bacterias que contienen plásmidos.
• Sitio de clonación múltiple (MCS): Segmento corto de ADN que contiene varios sitios de restricción.
• Inserto: Gen promotor u otro fragmento de ADN clonado en el MCS para su posterior estudio.
• Región promotora: Impulsa la transcripción del gen objetivo.
• Marcador seleccionable: El gen de resistencia a los antibióticos permite la selección en bacterias.

Factores que afectan las copias

• Condiciones de crecimiento: Aireación, temperatura, volumen de cultivo, antibiótico y medio.
• Inóculo de cultivo: Las bacterias recién rayadas tienen un mayor número de copias.
• La incubación durante 12 a 16 horas tiende a dar números de copias más altos.

Enzimas de restricción

• Son enzimas bacterianas que escinden el ADN de doble cadena.
• Tipo I: Importante en la función bacteriana, pero no escinde el ADN en secuencias específicas.
• Tipo II: Sitios altamente específicos para la escisión del ADN (Clonación).

Aplicación de las enzimas de restricción

• Clonación molecular: Mapeo de ADN y generación de fragmentos de diferentes longitudes.
• Corte/digestión: El uso de enzimas de restricción es crítico en la tecnología de ADN recombinante e ingeniería genética.

Reconocimiento de secuencia palindrómica

• La secuencia 5' a 3' es idéntica en cada cadena de ADN/Igual cuando una cadena se lee de izquierda a derecha y la otra se lee de derecha a izquierda.

Clonación molecular

• Aislamiento del ADN diana (insertar)
• Ligación del inserto en un plásmido apropiado
• Transformación de plásmido recombinante
• Selección y cribado

Prueba tus conocimientos sobre los vectores de ADN, que se utilizan para transportar segmentos de ADN a células huésped, y los plásmidos, pequeñas moléculas de ADN circulares. Aprende sobre su función en la clonación y la terapia génica.