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Questions and Answers
¿Cuál es el propósito del yoduro de propidio en la técnica de citometría de flujo?
¿Cuál es el principio básico de la inmunotipificación de subpoblaciones celulares por citometría de flujo?
¿Qué tipo de proteínas funcionales de membrana se utilizan en la inmunotipificación de subpoblaciones celulares?
¿Cuál es la ventaja de la citometría de flujo frente a otras técnicas de cuantificación de ADN?
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¿Cuál es el principio del análisis espectrofotométrico para cuantificar ADN?
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¿Qué se utiliza en el análisis espectrofotométrico para determinar la concentración de ADN?
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¿Cuál es el objetivo del etiquetado con un colorante fluorescente en la PCR cuantitativa?
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¿Cuál es la ventaja de la PCR cuantitativa con etiquetado con un colorante fluorescente frente al análisis espectrofotométrico?
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¿Qué técnica se utiliza para localizar el conjunto de ADN de las células muertas?
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¿Cuál es el papel del 7-AAD en la citometría de flujo?
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Study Notes
Células y Citometría de Flujo
- Las células pueden ser separadas según su contenido de ADN utilizando la citometría de flujo.
- El contenido de ADN es característico de cada fase del ciclo celular.
- En la fase G1, el contenido de ADN es diploide, en la fase S es diploide o tetraploide, y en la fase G2 es tetraploide.
Compensación de la Señal en la Citometría de Flujo
- La compensación de la señal es necesaria para ajustar la señal en la citometría de flujo.
- El control A y el control B no están bien compensados, por lo que la señal debe disminuirse (↓).
- El control C está bien compensado, por lo que no es necesario ajustar la señal.
Ventajas y Desventajas de los Métodos de Separación de Células
- La deflexión electrostática tiene la ventaja de alta viabilidad de las células separadas, pero la desventaja del uso de equipos grandes.
- La mecánica o hidráulica tiene la ventaja de uso fácil, pero la desventaja de baja concentración celular.
Moléculas Intercalantes de Ácidos Nucleicos
- El bromuro de etidio es una molécula intercalante comúnmente utilizada en la tinción de ADN.
- Tiene la ventaja de gran calidad, pero la desventaja de producir mutagénesis y residuos contaminantes.
Coeficiente de Variación
- El coeficiente de variación es un parámetro estadístico que representa la relación entre la desviación típica de una muestra y su media.
- Tiene un significado biológico relacionado con la variabilidad de una población.
Relación entre la Tasa de Proliferación Celular y el Contenido de ADN
- La tasa de proliferación celular se relaciona directamente con el contenido de ADN y la progresión del ciclo celular.
- Durante la interfase, el contenido de material genético celular aumenta, lo que se asocia con una gran velocidad de progresión del ciclo celular.
Viabilidad Celular
- La viabilidad celular se puede determinar mediante la citometría de flujo o sin ella.
- Se pueden utilizar colorantes o fluorocromos para determinar la viabilidad celular.
Diferencia entre Colorantes de Exclusión y Retención
- Los colorantes de exclusión tiñen los ácidos nucleicos de las células con membranas deterioradas.
- Los colorantes de retención utilizan sustratos fluorescentes que son degradados por enzimas intracelulares y generan productos fluorescentes.
Tinción Celular con Yoduro de Propidio y 7-AAD
- El yoduro de propidio tiñe las células no viables.
- El 7-AAD facilita el uso del marcador y se utiliza en la técnica de tinción celular.
Inmunotipificación de Subpoblaciones Celulares por Citometría de Flujo
- La técnica se basa en la reacción antígeno-anticuerpo.
- Se utilizan anticuerpos capaces de identificar las células de interés en las poblaciones celulares heterogéneas mediante la detección de antígenos determinados.
Métodos Alternativos para Cuantificar ADN
- La determinación mediante análisis espectrofotométrico es posible.
- La PCR cuantitativa con etiquetado fluorescente es otra opción.
- La citometría de flujo tiene la ventaja de ser más sensible que estos métodos.
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