UD5: Preparación de Materiales y Reactivos

UD5. Preparación de Materiales y Reactivos

• El módulo se centra en Cultivos Celulares, un curso de Especialista en Cultivos Celulares del IES Leonardo Da Vinci.
• La profesora es Verónica Rivero Hernández.

Unidad 5: Preparación de materiales y reactivos

• Limpieza y lavado de superficies, equipos y material.
• Uso de desinfectantes.
• Esterilización mediante métodos físicos (calor húmedo y seco, filtración y radiación) y químicos.
• Control de esterilidad.
• Manejo de material estéril.
• Pesaje y medida de volúmenes en el laboratorio.
• Disolución y diluciones. Etiquetado.

Asepsia y Antisepsia

• Asepsia: procedimientos o actividades destinados a prevenir la introducción de microorganismos.
• Antisepsia: procedimientos o actividades destinados a inhibir o destruir los microorganismos.

Clasificación de material e instrumental

• No crítico: Limpieza y desinfección de bajo nivel.
• Semicrítico: Limpieza y desinfección de nivel medio.
• Crítico: Limpieza y desinfección de nivel alto.
• Tipos de suciedad: microorganismos (Mycobacterium tuberculosis, esporas, priones), protozoos (Giardia, Criptosporidium), virus (pequeños sin envoltura, grandes sin envoltura, grandes con envoltura lipídica), esporas fúngicas, formas vegetativas bacterianas y fúngicas.

¿Qué es la limpieza?

• Combinación de frotación y acción química de detergentes.
• A veces, la simple limpieza es suficiente.
• En otros casos, es un paso previo a la desinfección o esterilización.
• Factores que afectan a la efectividad:
  • Acción mecánica (limpieza manual, con lavavajillas, ultrasonidos).
  • Acción química.
  • Tiempo.
  • Temperatura.
  • Cantidad y calidad del agua.

Limpieza en un laboratorio de cultivo celular

• Casi todo el material es de un solo uso, aunque hay excepciones.
• El material de vidrio y plástico, utensilios de disección, contenedores y dispensadores de células.
• Generalmente, va seguido de esterilización o desinfección.
• Superficies, cabinas, incubadores, estufas, baños de agua, centrífugas, micropipetas, pipetas….

Limpieza de material

• Uso de guantes y bata.
• Limpieza con agua fría y detergente (usando cepillos, escobillas, etc. para materiales de disección).
• Evitar usar agua caliente para no coagular las proteínas orgánicas.
• Si hay restos adheridos, usar productos corrosivos siguiendo las instrucciones e indicaciones de seguridad del fabricante.
• Aclarado con agua caliente y detergente, cepillando bien todos los rincones.
• Aclarar con abundante agua del grifo, luego agua desionizada o destilada.
• Secar el material en un soporte adecuado.

Limpieza con ultrasonidos

• Útil con instrumentos que tienen partes difíciles de limpiar.
• Se sumergen los objetos en una cubeta con agua y detergente.
• El ultrasonido hace vibrar el agua, limpiando los objetos.

Limpieza de superficies y equipos

• Depende del material.
• En general:
  • Limpiar con jabón o detergente suave diluido (para evitar espuma).
  • Usar paños de algodón.
  • No necesita aclarado.

Limpieza de material: Detergentes

• Mezclas de sustancias tensioactivas para disolver la suciedad sin corroer el objeto.
• Tipos de tensioactivos:
  • Tensioactivos/surfactantes.
  • Poder humectante.
  • Dispersión.
  • Suspensión/emulsión de micelas.

¿Qué es la desinfección?

• Método que destruye la mayoría de los microorganismos patógenos en un objeto o superficie.
• Intensidades de desinfección:
  • Baja (destruye formas vegetativas bacterianas y algunos virus y hongos), no destruye esporas bacterianas.
  • Media (destruye todas formas vegetativas bacterianas , mayoría virus y hongos), no destruye esporas bacterianas.
  • Alta (destruye todos los microorganismos, excepto algunas esporas bacterianas).
• Métodos físicos (calentamiento, radiación UV, ultrasonidos, filtrado) y químicos (productos desinfectantes)

Métodos físicos de desinfección en un laboratorio de cultivo celular

• Radiación UV (254 nm): acción de 20 segundos de lámparas UV mata la mayoría de los gérmenes. Poco penetrante, solo efectivo para superficies lisas.
• Filtros de flujo laminar: desinfectan el aire en cabinas y salas. Necesarios para trabajar con ciertos microorganismos. Captan, filtran y devuelven el aire de modo continuo.

Métodos químicos de desinfección habituales en un laboratorio de cultivo celular

• Desinfección por inmersión.
• Desinfección por loción.
• Desinfección por pulverización.
• Hipoclorito sódico (lejía): desinfectante ambiental común para suelos y paredes.
• Alcohol etílico al 70 %: elimina bacterias, algunos virus y hongos (no esporas), desinfectante de superficies.

Viricidas y fungicidas

• Aqua Stabil: aditivo para agua para prevenir el crecimiento de algas, bacterias y otros microorganismos.

Precauciones en el uso de desinfectantes

• Uso de guantes.
• Atención a riesgos respiratorios.
• No mezclar desinfectantes salvo indicación del fabricante.
• Conservación en recipientes tapados, protegidos de luz y calor, etiquetados con la información general, la concentración y la fecha de preparación.

¿Qué es la esterilización?

• Proceso que mata todos los microorganismos patógenos, incluidos esporas, en un objeto o superficie.
• Muerte exponencial de los microorganismos.

Métodos de esterilización

• Calor húmedo.
• Calor seco.
• Filtración.
• Radiaciones.
• Ácido peracético.
• Óxido de etileno.
• Peróxido de hidrógeno
• Formaldehído y glutaraldehído.

Métodos Físicos

• Calor húmedo: Autoclave (vapor de agua >100°C)
• Calor seco: Horno Pasteur (160ºC).
• Filtración: para líquidos o gaseosos termolábiles
• Radiaciones: Rayos UV, Rayos Gamma.

Métodos Físicos: Tindalización

• Método para esterilizar productos no resistentes al calor (>100ºC).
• Se expone repetidamente al calor por corto tiempo para matar esporas.

Métodos Físicos: Horno Pasteur

• Apto para vidrio, sólidos termoestables y objetos no humedecidos.
• Temperatura: 160ºC, duración: 2 horas.

Métodos Físicos: Incineración - Flameado

• Se usa para destruir residuos como asas, agujas, etc.

Métodos Químicos

• Ácido peracético (2%).
• Óxido de etileno.
• Peróxido de hidrógeno.
• Formaldehído y glutaraldehído.

Sistemas de empaquetado para esterilización en un LCC

• Tipos de materiales:
  • Puntas de micropipetas
  • Tubos y plásticos resistentes
  • Material de disección
  • Vidrios
  • Líquidos
  • Mangas mixtas
  • Bolsas Tyvek
  • Botes de vidrio
  • Contenedores estériles

Cómo controlamos la esterilización en un LCC

• Indicadores físicos: datos impresos sobre tiempo, temperatura y presión.
• Indicadores químicos: cambio de color en papeles como indicador de calentamientos.
• Indicadores biológicos: preparados comerciales con esporas para corroborar la eficiencia.

Manejo del material estéril

• Almacenamiento: guardado correcto, protegido del polvo.
• Técnica aséptica: siempre usar cabina o mechero.
• Apertura de envases: abrir en zona no en contacto con células.
• Reutilización: nunca meter puntas ni tubos en contenedores usados.
• Cierre final: asegurarse de que todo está cerrado al terminar.

Casos Autoclavables / No Autoclavables

• Líquidos: (agua destilada, tampones, medios de cultivo)
• Sólidos: (paquetes, instrumentos)
• Sustancias termolábiles (proteínas, hormonas, DMSO,etc)
• Medios de cultivo complejos: filtrar en cabina
• Comprobar esterilización mediante prueba de crecimiento bacteriano
• Paquetes húmedos, secar 60ºC

Preparación de reactivos

• Pesaje y medida de volúmenes en el laboratorio.
• Disolución y diluciones.
• Etiquetado.

Este cuestionario aborda la unidad 5 del curso de Especialista en Cultivos Celulares, centrado en la preparación de materiales y reactivos. Se cubrirán temas como limpieza, desinfección, esterilización, y prácticas de asepsia y antisepsia en el laboratorio. Además, se explorará la clasificación de material e instrumental según su nivel de riesgo.