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Questions and Answers
Quale tecnica non è comunemente utilizzata per misurare l'abbondanza relativa in un sistema DAR?
Qual è l'importanza della distribuzione del farmaco legato (DOP) nel contesto dei coniugati?
Quale fattore può alterare la carica complessiva dell'anticorpo e influenzare il legame del farmaco?
Quale delle seguenti affermazioni è vera riguardo al punto isoelettrico di una proteina?
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Perché è importante la mappatura delle sequenze peptidiche nella determinazione del DOP?
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Qual è il principale rischio associato alla presenza di troppe molecole di farmaco libero in un prodotto finito?
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Quali tecniche possono essere utilizzate per determinare la quantità di farmaco non coniugato?
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Qual è l'importanza della sequenza amminoacidica nel contesto della coniugazione del farmaco?
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Qual è una conseguenza del legame di farmaci lipofili in un anticorpo?
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Qual è la differenza tra l'approccio top-down e middle-down nelle tecniche analitiche?
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Study Notes
Tecniche analitiche per DAR e DOP
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DAR (Drug-to-Antibody Ratio): Rappresenta l'abbondanza relativa e viene analizzato mediante:
- Cromatografia a interazione idrofobica (HIC) e spettroscopia UV
- Cromatografia a esclusione dimensionale (SEC) accoppiata a spettrometria di massa (MS)
- SDS-PAGE seguita da analisi MS
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Distribuzione del farmaco legato (DOP):
- È critica per l'efficacia del farmaco; il legame del payload può influenzare negativamente l'interazione con l'antigene.
- Un DOP eterogeneo porta a vari pattern di legame delle lisine, influenzando farmacocinetica e tossicologia.
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Punto isoelettrico:
- La coniugazione del farmaco può alterare la carica dell'anticorpo, causando aggregazione.
- Modifiche come coniugazione, deaminazione e glicosilazione influiscono sulla stabilità.
- Tracciato mediante cromatografia a scambio ionico (IEX) o isoelettrofocusing (IEF).
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Quantità di farmaco libero:
- Troppo farmaco libero comporta tossicità e instabilità del prodotto.
- Tecniche per la determinazione includono HPLC e CE, valutando solubilità e proprietà del payload.
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Sequenza amminoacidica:
- Importante per garantire che le reazioni chimiche non alterino la struttura dell'anticorpo.
- Sequenziamento e mappatura delle modifiche sono essenziali.
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Peso molecolare:
- Determinato con le stesse tecniche di DAR, cruciale per identificare aggregati.
- Analisi può essere top-down (proteina intatta) o middle-down (trattamento parziale).
Tecniche cromatografiche e analitiche
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Cromatografia:
- Utilizza eluizione isocratica (composizione fissa) o a gradiente (cambiamento composizione durante l'analisi).
- Gradiente ottimale riduce i tempi di analisi ma abbassa la risoluzione.
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Cromatografia a esclusione molecolare:
- Non lavorata a gradiente per evitare interazioni con la fase stazionaria.
- Impiega solventi organici e sali per rompere interazioni indesiderate.
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Metodi cromatografici 2D:
- Consente separazione sequenziale per picchi non risolti, frazionando il campione.
Spettroscopia UV-VIS
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Propagazione delle onde:
- Onde si propagano nel vuoto con velocità costante; innalzano periodicamente energia, λ e frequenza.
- Intensità (energia totale per secondo su area) misurata in steradiante.
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Orbitale molecolare:
- Comportamento elettronico in due o più atomi; presenta orbitali di legame e anti-legame.
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Cromofori e auxocromi:
- Aggiunta a sostanze come benzene modifica ε, causando shift batocromico e ipercromico favorendo la delocalizzazione.
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Legame peptidico:
- Assorbe tra 210-220nm; aa aromatici (Phe, Tyr, Trp) assorbono a 260-280nm per i loro sostituenti.
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Tecniche di emissione:
- Misurano radiazione emessa dopo eccitazione; l'emissione avviene a λ maggiore e bassa energia rispetto all'assorbimento.
- Due monocromatori utilizzati per separare radiazione incidente e quella emessa.
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Esplora le tecniche analitiche utilizzate per la misurazione dell'abbondanza relativa in biochimica, come la cromatografia a interazione idrofobica e l'SDS-PAGE. Questo quiz approfondisce anche la distribuzione del farmaco legato e le interazioni con gli antigeni. Testa le tue conoscenze nei metodi di analisi e nei loro utilizzi pratici.