Técnica HPLC
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Questions and Answers

¿Cuál es la fase móvil utilizada en la técnica HPLC?

  • Gas
  • Semisólida
  • Líquida (correct)
  • Sólida

    • ¿Qué presión es necesaria para que los analitos pasen a través de la columna en HPLC?

  • 400 atm (correct)
  • 800 atm
  • 600 atm
  • 200 atm

    • ¿Cuál es un factor que determina el tiempo de separación en HPLC?

  • Tamaño de la columna (correct)
  • Tiempo de reacción del analito
  • La temperatura ambiente
  • La densidad del solvente

    • ¿Qué tipo de cromatografía se utiliza para analitos con tamaño molecular menor a 30 nm?

    <p>Cromatografía de fase reversa</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de los siguientes componentes no forma parte del sistema HPLC?

    <p>Sistema de refrigeración</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de cromatografía se usa para separar compuestos iónicos?

    <p>Cromatografía de intercambio iónico</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el rango típico de tiempo de separación en HPLC?

    <p>Desde horas hasta días</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de compuestos se caracteriza por tener una masa molecular mayor a 2000 en HPLC?

    <p>Compuestos no iónicos</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es una desventaja de la bomba disipativa utilizada en HPLC?

    <p>Limita la capacidad de la fase móvil</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué caracteriza a una bomba de HPLC de tipo reciprocante?

    <p>Genera pulsos de un solo pistón</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el propósito principal del eliminador de polvo en el sistema de solventes?

    <p>Prevenir la interferencia con la detección</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de bomba es más comúnmente utilizada en sistemas de HPLC?

    <p>Bomba multicabezal</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué función tiene el desgasificador en el sistema de solventes?

    <p>Eliminar burbujas de gas del solvente</p> Signup and view all the answers

    El flujo y la velocidad constante en una bomba de HPLC son importantes para?

    <p>Mantener la calidad de los resultados analíticos</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de las siguientes es una propiedad importante de la fase móvil en un sistema HPLC?

    <p>Su composición debe ser exacta</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué efecto tiene el uso de un cambio continuo en los sistemas de elución?

    <p>Crea un sistema más eficiente comparado con el paso a paso</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál de las siguientes aplicaciones NO corresponde al HPLC?

    <p>Purificación de proteínas</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el rango de trabajo del HPLC para muestras líquidas?

    <p>𝛍g L-1 a mg L-1</p> Signup and view all the answers

    Entre los siguientes compuestos, ¿cuál es un objetivo común para el análisis mediante HPLC?

    <p>Hidrocarburos poliaromáticos</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de contaminantes es el HPLC capaz de analizar en el agua?

    <p>Compuestos orgánicos volátiles</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de muestras se pueden analizar en HPLC para determinar pesticidas?

    <p>Muestras líquidas y sólidas</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la principal función de los compuestos fluorescentes en el análisis?

    <p>Absorber radiación y emitir radiación fluorescente a longitud de onda más larga.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de compuestos son ejemplos de fluorescentes?

    <p>Quinoleínas, esteroides y alcaloides.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es el principio de funcionamiento del detector de dispersión de luz?

    <p>Registra la luz dispersada por partículas sólidas después de la evaporación de la fase móvil.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es un límite de detección típico de un detector de dispersión de luz?

    <p>0.1 a 1 ng.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué interfaz utiliza calefacción y nitrógeno para convertir el eluato en aerosol en espectrometría de masas?

    <p>Interfase de ionización química a presión atmosférica (APCI).</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es la función del termovaporizador en un espectrómetro de masas?

    <p>Vaporizar el eluato y ionizarlo químicamente.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es una característica del detector de fluorescencia?

    <p>Es sensible, pero responde a un tipo limitado de analitos.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de analitos puede detectar el detector de dispersión de luz?

    <p>Solutos menos volátiles que la fase móvil.</p> Signup and view all the answers

    Cuáles son las longitudes de onda seleccionadas para el ácido salvianólico A y B?

    <p>286 nm</p> Signup and view all the answers

    Qué compuesto se detectó a 326 nm según los espectros UV?

    <p>Ácido salvianólico D</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué solvente se utilizó como fase móvil durante el experimento HPLC?

    <p>Acetonitrilo acuoso</p> Signup and view all the answers

    Cuál de las siguientes aplicaciones no se menciona en relación con HPLC?

    <p>Control de calidad en cosméticos</p> Signup and view all the answers

    Cuántos ácidos fenólicos se detectaron simultáneamente en la inyección de Danshen?

    <p>Siete</p> Signup and view all the answers

    Cuál es el objetivo principal de aplicar HPLC en la industria farmacéutica?

    <p>Controlar la calidad de los ingredientes activos</p> Signup and view all the answers

    Qué compuesto se menciona específicamente en la figura asociada a los espectros UV?

    <p>Danshensu</p> Signup and view all the answers

    Cuál es la longitud de onda para el Danshensu y el aldehído protocatecuico?

    <p>280 nm</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Técnica HPLC

      • La fase móvil en la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un líquido que desempeña un papel fundamental en el proceso de separación de los analitos. Esta fase es crucial, ya que es el medio a través del cual los componentes de una mezcla se mueven y se separan a medida que fluyen por la columna cromatográfica.
      • Los analitos, que son las sustancias o compuestos que se desean analizar, se disuelven en un solvente específico. Este solvente se somete a una presión extrema, que puede alcanzar hasta 400 atmósferas, facilitando así su movimiento eficiente a través de la columna. Esta alta presión es necesaria para mantener el flujo constante y para asegurar que los analitos se separen adecuadamente en función de sus propiedades químicas y físicas.
      • El tiempo que se requiere para llevar a cabo la separación de los analitos varía considerablemente, oscilando entre 5 y 10 minutos en condiciones normales, aunque en algunos casos puede extenderse hasta varias horas o incluso días, dependiendo de la complejidad de la muestra y de las condiciones operativas de la HPLC.

      Características de los Analitos

    • Las macromoléculas, con una masa molecular superior a 2000, son de especial interés en diversas aplicaciones químicas y biológicas. La solubilidad de estas sustancias en solventes orgánicos es fundamental, ya que determina su comportamiento en diferentes entornos de reacción, así como su capacidad para ser purificadas y analizadas.

    • En el campo de la nanomedicina y la nanotecnología, las distintas escalas de tamaños moleculares que van desde menos de 30 nanómetros (nm) hasta 400 nm son cruciales para el desarrollo de nuevos materiales y sistemas de entrega de fármacos, permitiendo un mejor control sobre sus propiedades físicas y químicas.

    • Las técnicas cromatográficas como la cromatografía en fase reversa, el intercambio iónico y la exclusión molecular son métodos analíticos y de separación eficaces para purificar y caracterizar compuestos según su masa molecular y carga, garantizando la obtención de productos de alta pureza en la investigación y el desarrollo de fármacos.

    Componentes del HPLC

    • Sistema de solventes: permite la elución isocrática y el uso de filtros para eliminar el polvo.
    • Sistema de bombeo: proporciona alta presión, esencial para el funcionamiento eficaz de la HPLC.
    • Sistema de inyección de muestra y detector de datos: capturan y procesan las señales.

    Sistema de Solventes

    • Utiliza depósitos diversos para la fase móvil y un desgasificador para mantener la calidad de los solventes.
    • Incluye un eliminador de polvo para evitar interferencias en la detección y daño al sistema de bombas.

    Tipos de Bombas

    • Bombas de alta presión: operan sobre 6000 psi para mantener el flujo adecuado.
    • Bombas reciprocantes y de jeringa son las más comunes, cada una con ventajas y desventajas en cuanto a pulsos y capacidad.

    Sistema de Inyectores y Detectores

    • Detectores más sencillos usan luz ultravioleta y fuentes de excitación específicas para compuestos fluorescentes.
    • El detector de dispersión de luz es prácticamente universal y responde a analitos menos volátiles que la fase móvil.

    Acoplamiento HPLC-Espectrómetro de Masas

    • Se utiliza una interfaz para eliminar solventes del eluato y vaporizar e ionizar analitos.
    • Existen diversas interfaces, incluyendo termovaporizadores y opciones de ionización química.

    Aplicaciones de HPLC

    • Utilizado en la industria farmacéutica para el control y estabilización de drogas.
    • Imprescindible para la separación de moléculas complejas y control de calidad en productos farmacéuticos.
    • Otras aplicaciones incluyen análisis de contaminantes en aire y agua, identificación de narcóticos y análisis de pesticidas.

    Usos del HPLC

    • Ideal para investigación en química y bioquímica, y monitoreo de materiales de salud.
    • También es efectivo en la purificación de compuestos químicos y análisis de alimentos.
    • Rango de trabajo incluye muestras líquidas (𝛍g L-1 a mg L-1) y sólidas (𝛍g kg-1 a 𝛍g g-1).

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