TD5: La Microscopie Electronique

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Questions and Answers

Quel est l'objectif de la fixation d'un échantillon?

  • Rendre l'échantillon transparent
  • Augmenter le volume de l'échantillon
  • Conserver l'échantillon dans un état proche de l'état vivant (correct)
  • Déshydrater complètement l'échantillon

Quel solvant est utilisé pour remplacer l'eau durant la déshydratation dans la méthode de la microscopie électronique à transmission (MET)?

  • Métanol
  • Chloroforme
  • Éthanol
  • Acétone (correct)

Quel type de résine est utilisé pour l'inclusion dans MET?

  • Paraffine uniquement
  • Résine naturelle
  • Cire d'abeille
  • Résine synthétique (correct)

Quelle est l'épaisseur des coupes fines réalisées pour la MET?

<p>3-10 µm (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle technique est employée pour rendre certaines structures visibles dans la microscopie optique?

<p>Coloration par fluorescence (B)</p> Signup and view all the answers

Quel type de contraste est créé par les sels de métaux lourds dans la MET?

<p>Contraste chimique (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'objectif principal de l'ombrage métallique?

<p>Créer une impression de relief sur l'échantillon (A)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle des acides phosphotungstiques dans la préparation des échantillons?

<p>Ils permettent une observation brillante sur fond opaque (D)</p> Signup and view all the answers

Quelle méthode de déshydratation utilise la méthode physique désignée?

<p>Congélation dans l'azote liquide (C)</p> Signup and view all the answers

Quelle technique utilise la méthode d’électronographie?

<p>Coupe longitudinale (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est le but principal de l'inclusion d'un échantillon dans un milieu solide?

<p>Faciliter la coupe de l'échantillon (C)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'effet des atomes de masse élevée associés aux structures cellulaires?

<p>Ils augmentent le contraste lors de l'observation des cellules (C)</p> Signup and view all the answers

Dans la preparation d'échantillons pour la MET, quelle est la méthode de 'coloration' négative?

<p>Le montage dans un liquide dense aux e- (A)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'usage principal des électrons dans la microscopie électronique?

<p>Pour obtenir une résolution supérieure à celle des photons (D)</p> Signup and view all the answers

Quelle est la résolution maximale d'un microscope électronique?

<p>0,2 nm (D)</p> Signup and view all the answers

Quel composant est utilisé pour émettre des électrons dans un microscope électronique?

<p>Filament de tungstène (A)</p> Signup and view all the answers

Quelle est la principale différence entre le microscope électronique à transmission (MET) et le microscope électronique à balayage (MEB)?

<p>Le MET observe l'échantillon entier et le MEB observe uniquement la surface (B)</p> Signup and view all the answers

Pourquoi l'échantillon est-il émis sous vide dans un microscope électronique?

<p>Pour éviter la déviation des électrons (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est le grosissement maximum qu'un microscope électronique peut atteindre?

<p>500 000x (C)</p> Signup and view all the answers

Dans quel but les images générées par un microscope électronique sont-elles observées?

<p>Sur un écran (B)</p> Signup and view all the answers

Quelle étape est nécessaire pour préparer un échantillon pour la microscopie électronique?

<p>Coloration (D)</p> Signup and view all the answers

Quel est le rôle des lentilles électromagnétiques dans un microscope électronique?

<p>Focaliser les électrons sur l'échantillon (B)</p> Signup and view all the answers

Quel est l'effet de la métallisation de la surface de l'échantillon dans un MEB?

<p>Augmenter la conductivité de l'échantillon (C)</p> Signup and view all the answers

Quelle est l'une des principales caractéristiques des images obtenues par MEB?

<p>Images en 3D (B)</p> Signup and view all the answers

Pourquoi la fixation est-elle une étape cruciale dans la préparation des échantillons pour MET?

<p>Pour préserver la structure cellulaire (B)</p> Signup and view all the answers

Quelle est la vitesse d'accélération des électrons dans un microscope électronique?

<p>164 000 km/s (A)</p> Signup and view all the answers

Quel type d'échantillon est nécessaire pour la microscopie électronique à balayage?

<p>Un échantillon recouvert d'une fine couche métallique (B)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Fixation

Préserver l’échantillon en état quasi-vivant tout en l’empêchant de se décomposer.

Déshydratation

Remplacer l’eau de l’échantillon par un solvant compatible avec le milieu d’inclusion.

Inclusion

Durcir et enrober l’échantillon dans un milieu solide pour le couper.

Coupes

Couper l’échantillon en sections suffisamment fines pour la traversée des photons ou des électrons.

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Imprégnation de sels de métaux lourds

Technique utilisant des métaux lourds (uranium, plomb) pour rendre visibles certaines structures.

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Coloration négative

La coloration négative consiste à immerger l’échantillon dans un liquide dense aux électrons, qui ne pénétrera pas à l’intérieur de l’échantillon, le rendant brillant sur fond opaque. C’est une technique utilisée pour visualiser les structures de petite taille, comme les virus, bactéries, ou les molécules d’ADN.

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Préparation d’échantillons pour l’observation microscopique

Méthodes physiques et chimiques pour préserver les cellules ou les tissus.

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Contraste en microscopie électronique

Méthode en microscopie électronique utilisant des métaux lourds pour rendre visible les structures cellulaires.

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Ombrage métallique

Technique de microscopie électronique permettant de créer un effet de relief sur l’échantillon en le vaporisant avec des atomes métalliques sous un certain angle.

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Ombrage par projection

Technique de microscopie électronique qui permet de créer un effet de relief sur un échantillon en utilisant l’ombre projetée par un faisceau d’électrons.

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Microscopie électronique en transmission

Technique de microscopie électronique utilisant un faisceau d’électrons traversant un échantillon de l’échantillon.

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Microscopie électronique à balayage

Technique de microscopie électronique utilisant un faisceau d’électrons qui balaye la surface de l’échantillon.

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Microscopie optique

Technique de microscopie électronique utilisant un faisceau de lumière pour observer un échantillon.

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Microscopie électronique à transmission tridimensionnelle

Technique de microscopie électronique qui permet de visualiser les structures cellulaires en trois dimensions.

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Techniques de microscopie électronique

Méthodes de microscopie électronique qui nécessitent une préparation préalable de l’échantillon pour l’observation.

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Microscopie électronique

Technique d'imagerie utilisant des électrons pour observer les structures microscopiques.

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Résolution

La capacité d'un microscope à distinguer deux points adjacents.

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Grossissement

Le rapport entre la taille d'un objet sur l'image et sa taille réelle. C'est un facteur d'agrandissement.

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Canon à électrons

Source d'électrons utilisée dans la microscopie électronique.

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Cathode

Filament porté à haute température qui émet des électrons.

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Cylindre de Wehnelt

Cylindre qui focalise le faisceau d'électrons en un rayon fin.

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Anode

Électrode positive qui accélère les électrons vers l'échantillon.

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Pompe à vide

L'ultravide empêche la déviation des électrons par les molécules d'air.

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Lentilles électromagnétiques

Lentilles utilisant des champs magnétiques pour focaliser le faisceau d'électrons.

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Microscope électronique à transmission (MET)

Le faisceau d'électrons traverse l'échantillon, créant une image à partir de l'interaction entre l'échantillon et les électrons.

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Microscope électronique à balayage (MEB)

Le faisceau d'électrons balaye la surface de l'échantillon, produisant une image à partir des électrons secondaires émis.

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Faisceau focalisé en 1 point de l’échantillon

Le faisceau d'électrons est focalisé sur un seul point de l'échantillon.

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Balayage du faisceau sur toute la surface de l’échantillon

Le faisceau d'électrons se déplace systématiquement sur toute la surface de l'échantillon.

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Cartographie de la zone balayée

Représentation graphique de la zone balayée par le faisceau d'électrons en MEB, fournissant des informations sur la composition et la surface de l'échantillon.

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Image pseudo 3D

Image en MEB qui donne l'impression de relief à la surface de l'échantillon.

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Study Notes

TD5: La Microscopie Electronique

  • La microscopie électronique utilise des électrons (dont la longueur d'onde est inférieure à celle du photon, 0,04 Å), permettant une plus haute résolution que la microscopie optique.
  • La résolution est de 0,1 à 0,2 nm, avec un grossissement allant de 200 000 à 500 000 fois.
  • Un canon à électrons émet des électrons à partir d'un filament de tungstène chauffé à haute température.
  • Les électrons sont accélérés par une anode à une tension de 164 000 km/s.
  • Le vide empêche les collisions des électrons avec les molécules d'air.
  • Les électrons sont focalisés par des lentilles électromagnétiques.
  • L'observation n'est pas directe, l'image étant projetée sur un écran.
  • On distingue deux types de microscopie électronique : à transmission (MET) et à balayage (MEB).

Principe Généraux de la ME

  • La ME utilise des électrons au lieu de photons pour former une image.
  • La résolution est bien meilleure qu'avec la microscopie optique.
  • Le canon à électrons émet des électrons.
  • Les électrons sont focalisés par des lentilles électromagnétiques.
  • L'échantillon est éclairé par un faisceau d'électrons.
  • Les électrons traversent (ME à transmission) ou frappent (ME à balayage) l'échantillon.
  • Des différences de comportement des électrons selon les constituants de l'échantillon créent l'image.
  • L'image est projetée sur un écran fluorescent.

Microscope Electronique à Transmission (MET)

  • Les électrons traversent l'échantillon.
  • L'échantillon doit être très fin pour que les électrons puissent le traverser.
  • L'image résultante montre l'organisation interne de l'échantillon.

Microscope Electronique à Balayage (MEB)

  • Les électrons frappent la surface de l'échantillon.
  • L'échantillon doit être recouvert d'une couche de métal (or, platine).
  • L'image résultante montre la surface de l'échantillon à grande résolution.

Préparation de l'échantillon pour l'observation en MET

  • Fixation: Pour préserver la structure de l'échantillon dans un état proche de l'état vivant, tout en le rendant imputrescible.
    • Méthodes physiques : Congélation;
    • Méthodes chimiques : Fixateurs comme le glutaraldéhyde et le tétraoxyde d'osmium.
  • Déshydratation: Remplacer l'eau par un solvant compatible avec le milieu d'inclusion.
    • Utilisation d'éthanol (MP) ou acétone (MET).
  • Inclusion: Durcir l'échantillon pour pouvoir le couper en fines sections.
    • Pour MP : Résultant sur un bloc de paraffine.
    • Pour MET : Utilisation de résines synthétiques comme l'époxyde ou le méthacrylate.
  • Coupes: Couper l'échantillon en sections très fines pour permettre le passage des photons ou électrons.
    • Pour MP : Microtome, coupes de 3 à 10 micromètres.
    • Pour MET : Ultramicrotome, coupes de 50 à 80 nanomètres.
  • Contrastes: Pour rendre visibles certaines structures.
    • MP : Coloration topographique, cytochimique ou fluorochromes.
    • MET : Utilisation de sels de métaux lourds pour augmenter le contraste, opaques aux électrons
  • Coloration/Ombrage (MET): Méthodes spécifiques pour mettre en évidence des structures spécifiques.
  • Ombrage métallique (directionnel): Une vaporisation d'atomes métalliques sur l'échantillon pour créer du relief.

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