Questions and Answers
Quais são as citocinas e fatores de crescimento utilizados para induzir a diferenciação de macrófagos e células dendríticas a partir de CD14+ monócitos?
GM-CSF e IL-4
Qual a importância do hipocampo nas culturas neuronais primárias?
O hipocampo é importante para o aprendizado, memória e processamento espacial, sendo utilizado para estudar a fisiologia e patologia de neurônios.
Células dendríticas são diferenciadas utilizando M-CSF como fator de crescimento.
False
Qual o marcador utilizado para identificar dendritos em neurônios nas culturas neuronais do hipocampo? MAP2 para ______.
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Relacione os marcadores com as estruturas neurais corretas:
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O que são organoides e de onde podem ser derivados?
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Quais são as vantagens das culturas de organoides?
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A formação de um sistema vascular é crítica para a capacidade de crescimento dos organoides durante culturas prolongadas.
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Qual é o processo de substituição ou restauração de células, tecidos, órgãos e partes inteiras do corpo para sua função completa? A _____________
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Relacione as fases da cura de feridas com suas descrições:
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Study Notes
Seminários
Brain Organoids: Advanced In Vitro Models to Study Neurological Disorders
Introdução
- Os organoides cerebrais são estruturas tridimensionais derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) que replicam aspetos da organogénese cerebral.
- Eles fornecem um modelo inovador para estudar o desenvolvimento cerebral e doenças neurológicas.
Razões para Estudar o Desenvolvimento e as Doenças do Cérebro
- Doenças neurológicas, como Alzheimer, Parkinson, Huntington, esclerose múltipla, demência frontotemporal, transtornos do espectro autista (ASD), transtorno de déficit de atenção e hiperatividade (ADHD), depressão e esquizofrenia, são alvos importantes de estudo devido à sua complexidade e impacto na sociedade.
Caracterização Estrutural e Morfológica
- A diferenciação e maturação de neurônios ao longo do desenvolvimento dos organoides são avaliadas usando diversas técnicas laboratoriais e de imagem.
Culturas Neuronais Primárias
Obtenção de Neurônios
- Os neurônios do hipocampo são obtidos de embriões de ratos Wistar E18, sacrificados e dissecados.
- Os hipocampos são isolados, tratados com tripsina e dissociados mecanicamente para obter uma suspensão celular.
Preparo da Cultura
- As células são contadas e semeadas em placas multi-poço revestidas com poli-D-lisina.
- A alimentação ocorre semanalmente e 5-FDU é adicionado para inibir o crescimento de células da glia.
Zebrafish in vitro: Cultivo, Desafios e Potenciais Aplicações
Zebrafish
- Peixe de água doce do sul da Ásia, da família Cyprinidae.
- Utilizado em pesquisas por sua fisiologia e metabolismo de xenobióticos conservados, similaridade genética com humanos (71%) e boa predição da biologia do desenvolvimento de vertebrados.
Zebrafish in vitro
- Cultura de células de zebrafish:
- Células podem ser derivadas de embriões, larvas ou peixes adultos.
- Possibilita o estudo de mecanismos celulares, modelagem de doenças, ecotoxicologia e ritmos circadianos.
- Meio de cultura:
- Essencial para o sucesso do cultivo, deve atender às necessidades nutricionais e de fatores de crescimento das células.
- Exemplos: DMEM/Ham's F12, L15, LDF.
Culturas Celulares Primárias e Secundárias de Zebrafish
Cultura Primária
- Células obtidas diretamente do tecido original.
- Heterogêneas, com crescimento limitado e replicação por um tempo, mantendo características do tecido original.
Cultura Secundária
- Células derivadas da cultura primária.### Linhagens de Células de Zebrafish
- Linhagens de células permanentes, com crescimento rápido, mas perdem a capacidade de proliferar com o tempo e podem apresentar alterações.
Estabelecimento de Linhagens de Células de Zebrafish
- Isolamento de células tumorais ou embrionárias
- Cultivo em meio apropriado
- Adaptação e passagem celular
- Estabelecimento de um único tipo celular, processo que pode levar até um ano
Exemplos de Linhagens de Células de Zebrafish
- ZFL: Derivada de tecido hepático, utilizada em estudos de toxicologia e saúde humana/ambiental
- ZEM2S: Derivada de células de embriões, utilizada em estudos de desenvolvimento embrionário, biologia do desenvolvimento, adesão celular e toxicologia
Aplicação de Linhagens de Células de Zebrafish
- Desenvolvimento embrionário e organogênese
- Modelagem de doenças e tumorigênese
- Análise de migração celular
- Triagem de fármacos e estudos toxicológicos
Métodos de Cultivo Celular 3D de Células de Zebrafish
- Gotejamento
- Rotação
- Placa de baixo aderência (ULA)
- Hanging drop
Exemplos de Estudos com Células de Zebrafish
- Criação de estruturas cardíacas 3D a partir de larvas para estudos de maturação, regeneração e testes farmacológicos/toxicológicos
- Utilização da linhagem ZFL como modelo para testes de ecotoxicologia
Considerações Finais
- A cultura de células de zebrafish é uma ferramenta valiosa para a pesquisa biomédica, permitindo estudos em diversas áreas
- A escolha do método de cultivo, tipo de célula e linhagem celular depende dos objetivos específicos do estudo
- Otimização e padronização dos protocolos são importantes para garantir a reprodutibilidade dos resultados
- É fundamental considerar as questões éticas e de biossegurança ao trabalhar com animais e células
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