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Questions and Answers
¿Cuál es el principal objetivo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)?
¿Cuál es el principal objetivo de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)?
hacer millones de copias de un segmento específico de ADN
¿Cuáles son componentes esenciales de la PCR?
¿Cuáles son componentes esenciales de la PCR?
La _ es la más común y su temperatura óptima de funcionamiento es 70°C en la PCR.
La _ es la más común y su temperatura óptima de funcionamiento es 70°C en la PCR.
Taq Polimerasa
La PCR es una técnica molecular ampliamente utilizada en Astronomía.
La PCR es una técnica molecular ampliamente utilizada en Astronomía.
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Relaciona las fases de la PCR con su descripción correcta:
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¿Cuál es la principal característica que hace que la PCR sea una técnica tan eficiente?
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¿Qué es lo que se busca amplificar en una reacción de PCR?
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¿Cuál es el nombre del descubridor de la técnica de PCR?
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¿Cuál es el nombre del tipo de nucleótidos que se utilizan durante la PCR?
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¿Cuál es la función de los cebadores en la PCR?
¿Cuál es la función de los cebadores en la PCR?
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¿Cuál es el papel del cloruro de magnesio en la PCR?
¿Cuál es el papel del cloruro de magnesio en la PCR?
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¿Qué es el DNA molde en la PCR?
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¿Cuál es el nombre del tipo de PCR que se utiliza para amplificar una región específica de ADN?
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¿Qué se utiliza para extraer el DNA humano en la preparación de la reacción de PCR?
¿Qué se utiliza para extraer el DNA humano en la preparación de la reacción de PCR?
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¿Cuál es la función del primer reverse en la PCR?
¿Cuál es la función del primer reverse en la PCR?
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Study Notes
Introducción a la PCR
- La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica molecular que permite la amplificación exponencial de fragmentos de ADN.
- Fue desarrollada por Kary Mullis en 1983 y revolucionó el campo de la genética, la biotecnología y la medicina.
Características de la PCR
- Especificidad: amplifica únicamente la secuencia de ADN objetivo.
- Eficiencia: el número de copias máximo que se puede obtener en un determinado número de ciclos.
- Reproducibilidad: fácilmente reproducible.
Componentes Esenciales de la PCR
- Template DNA: contiene la región de ADN que se va a amplificar.
- Primers: secuencias cortas, de 18 a 30 nucleótidos, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Delimitan la zona de ADN a amplificar.
- dNTPs: desoxirribonucleótidos trifosfato (dATP, dTTP, dCTP, dGTP).
- Polimerasa: la más común es la Taq Polimerasa, que tiene una temperatura óptima de funcionamiento de 70°C.
- Cofactores: cloruro de magnesio (MgCl2).
- Solución buffer: mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la polimerasa.
Fases de una PCR
- Desnaturalización: rompe las dobles hélices de ADN.
- Annealing: los primers se unen a la región específica de ADN.
- Extensión: la polimerasa sintetiza una nueva cadena de ADN, colocando nucleótidos complementarios.
Preparación de la Reacción
- Preparación de la muestra de ADN: se extrae por método de columnas.
- Preparación del MasterMix: se mezclan los componentes esenciales en una solución buffer.
- Carga del MasterMix en cada tubo o pocillo: se adiciona la muestra de ADN para llega a un volumen final de 20 µL.
Termociclador
- Protocolo de amplificación de la PCR: se establecen las condiciones de temperatura y tiempo para cada fase de la PCR.
- Etapas del protocolo: desnaturalización inicial, desnaturalización, annealing, extensión, extensión final y cooling.
Variantes de la PCR
- PCR convencional (Punto final)
- PCR en tiempo real (qPCR RT-qPCR)
- PCR Anidada
- PCR Multiplex
- PCR de Transcripción Inversa (RT-PCR)
Objetivos de la PCR
- Comprender los fundamentos teóricos de la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
- Familiarizarse con los componentes esenciales de la PCR y su función
- Explorar los diferentes tipos de PCR y sus aplicaciones
Componentes Esenciales de la PCR
- Template DNA: contiene la región de ADN que se va a amplificar
- Primers: Forward y Reverse, secuencias cortas que permiten que la polimerasa inicie la reacción
- dNTPs: desoxirribobucléotidos trifosfato (dATP, dTTP, dCTP, dGTP)
- Polimerasa: la más común es la Taq Polimerasa, que sintetiza una nueva cadena de ADN
- Cofactores: Cloruro de magnesio (MgCl2)
- Solución buffer: mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la polimerasa
Fases de la PCR
- Desnaturalización: separación de las dos cadenas de ADN
- Annealing: unión de los primers a la cadena de ADN
- Extensión: síntesis de la nueva cadena de ADN por la polimerasa
Variantes de PCR
- PCR convencional (Punto final)
- PCR en tiempo real (qPCR o RT-qPCR)
- PCR Anidada
- PCR Multiplex
- PCR de Transcripción Inversa (RT-PCR)
Preparación de la Reacción
- Preparación del Template DNA: extracción de ADN humano mediante método de columnas
- Selección de la región a amplificar: gen de betaglobina humana
- Diseño de los primers: Forward y Reverse, con secuencias específicas
- Preparación del Master Mix: mezcla de los componentes esenciales de la PCR
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Description
Aprende sobre los fundamentos teóricos y componentes esenciales de la PCR, así como sus diferentes tipos y aplicaciones.
