Pruebas de RM/VP: Principio y Funcionamiento

Pruebas Bioquímicas

Prueba de Rojo Metilo (RM/VP)

• Se utiliza para determinar la presencia de iones hidrógeno cuando un microorganismo fermenta glucosa.
• Los miembros de la familia Enterobacteriaceae convierten glucosa en ácido pirúvico por el camino de Embden-Meyerhof.
• Los organismos que metabolizan ácido pirúvico producen ácido y bajan el pH a menos de 4.4.
• El indicador del medio, rojo de metilo, es rojo a pH < 5.0 y amarillo a pH > 5.8.
• Es útil para la diferenciación de Escherichia coli (rojo metilo positivo) de Klebsiella (rojo metilo negativo).

Prueba de Voges-Proskauer (VP)

• Detecta la producción de acetoína y 2,3-butanodiol en el metabolismo de la glucosa.
• La acetoína se oxida a diacetilo en presencia de oxígeno y KOH, lo que da un complejo rojo.
• La sensibilidad del ensayo se aumenta por el agregado de alfa-naftol antes del agregado de KOH.

Prueba de SIM (H2S, indol y motilidad)

• Determina si la bacteria produce indol a través de la degradación del triptófano.
• Determina si hay producción de H2S a partir de aminoácidos azufrados, lo que da como resultado un color negro.
• Determina si la bacteria es móvil mediante la difusión de la misma hacia los lados.

Prueba del Indol

• El indol es uno de los productos del metabolismo del aminoácido triptofano.
• Se utiliza el reactivo de Erlich para detectar la presencia del aldehído.
• Es especialmente útil en la identificación preliminar de Escherichia coli y para diferenciar Edwardsiella (+) de Salmonella (-).

Prueba del Citrato

• Determina si la bacteria puede metabolizar citrato como única fuente de carbono.
• Los organismos que metabolizan citrato producen una reacción alcalina y cambio de color del medio al azul.

Prueba del Malonato

• Se emplea para diferenciar enterobacterias del grupo de Enterobacter de bacterias del grupo de Escherichia.
• Los primeros son capaces de utilizar malonato como única fuente de carbono, produciendo una reacción alcalina y cambio de color del medio al azul.

Prueba de la Lisina (Carboxilasa-Dihidrolasa)

• La descarboxilación es un proceso en el cual las decarboxilasas atacan el extremo carboxilo de los aminoácidos, formando la correspondiente amina.
• La descarboxilación de lisina da cadaverina (diaminas).
• Se utiliza para determinar la capacidad de las bacterias para fermentar lactosa y glucosa.

Prueba del Kligler

• Se utiliza para determinar la capacidad de las bacterias para fermentar lactosa y glucosa con producción de gas.
• Se pueden observar diferentes resultados dependiendo de la capacidad de fermentación de la bacteria.

Prueba del Citrato de Kligler

• Indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato.
• Contiene citrato como única fuente de carbono, fosfato de amonio como única fuente de fosfato y azul de bromotimol como indicador de pH.

Prueba de la Fenilalanina

• Las desaminasas catalizan la pérdida de NH3 en un aminoácido originando un ácido carboxílico.
• Las bacterias que desaminan la fenilalanina producen ácido fenilpirúvico que con Fe3Cl en solución ácida produce un color verdoso.