Preparación de Muestras para Microscopía Óptica

Study Notes

Preparación de Muestras para Microscopía Óptica

La técnica de montaje en fresco permite observar microorganismos vivos en agua u otro líquido.
Se coloca una gota de la suspensión sobre un portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos.
La vaselina se utiliza para evitar la evaporación y el efecto de las corrientes de aire.
La fijación es un procedimiento que preserva estructuras celulares, se puede realizar por calor o químicamente.
La fijación por calor es la más utilizada para bacterias, preserva la morfología externa pero no las estructuras internas.
La fijación química se utiliza para preservar las estructuras celulares internas utilizando agentes como etanol, formaldehído y ácido acético.
Para preparar un frotis, se extiende una pequeña cantidad de muestra sobre un portaobjetos limpio y desengrasado con un ansa en anillo esterilizada.
Se seca el extendido al aire o se calienta suavemente.
Una vez seco, el preparado se fija por calor, evitando un recalentamiento excesivo del vidrio.
La fijación por calor evita que los microorganismos sean arrastrados por soluciones de colorantes o lavado durante la coloración.

Coloraciones

Las coloraciones se usan para aumentar el contraste de las células, facilitando su observación en el microscopio de campo claro.
Las soluciones de colorantes cubren el frotis seco y fijado, los tiempos, cantidades y tipos de colorantes varían según la tinción.
Se lava el portaobjetos, se seca, se coloca una gota de aceite de inmersión y se observa con un objetivo de 100x.
Los colorantes son compuestos orgánicos que tienen afinidad por sustancias celulares específicas.
Los colorantes se clasifican como ácidos o básicos:
- Los colorantes ácidos ionizan en soluciones acuosas produciendo un núcleo colorante con carga negativa.
- Los colorantes básicos tienen un ion colorante con carga positiva.
Los colorantes básicos son los más utilizados en microbiología debido a la gran cantidad de ribosomas en las células bacterianas.
Los microbiólogos utilizan diferentes clases de tinciones:
- Tinción simple: Se utiliza un solo colorante, generalmente básico (azul de metileno, cristal violeta o fucsina).
- Proporciona información limitada sobre la forma, tamaño y tipo de agrupación de los microorganismos, pero es un método sencillo y rápido.
- Tinción diferencial: Se utilizan varios colorantes para poner de manifiesto diferencias entre las células microbianas o las estructuras celulares.
- Tinción negativa: los microorganismos no fijan el colorante, el fondo se tiñe y los microorganismos aparecen brillantes sobre un fondo oscuro.
- Tinción de Gram: un método de tinción diferencial que permite clasificar bacterias en gram-positivas y gram-negativas.
- Tinción de Ziehl-Neelsen: una tinción diferencial que permite identificar bacterias ácido-alcohol resistentes.