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Questions and Answers
¿Qué función cumplen los plásmidos en los microorganismos?
¿Qué función cumplen los plásmidos en los microorganismos?
- Desencadenan mutaciones genéticas en el cromosoma microbiano.
- Ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno. (correct)
- Proporcionan caracterÃsticas esenciales para la función celular.
- Controlan la replicación del ADN bacteriano.
¿Qué diferencia clave existe entre la replicación del ADN bacteriano y la replicación de los plásmidos?
¿Qué diferencia clave existe entre la replicación del ADN bacteriano y la replicación de los plásmidos?
- Los plásmidos se replican en números fijos, pero de manera dependiente del cromosoma.
- Los plásmidos no se replican de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.
- La replicación de los plásmidos no está vinculada a la expresión de genes del cromosoma microbiano. (correct)
- La replicación del ADN bacteriano no está controlada por factores externos.
¿Qué tipo de plásmidos se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos?
¿Qué tipo de plásmidos se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos?
- Plásmidos convencionales
- Plásmidos reguladores
- Plásmidos recombinantes (correct)
- Plásmidos esenciales
¿Cuál es la función principal de un vector plasmÃdico utilizado en aplicaciones de biotecnologÃa e investigación?
¿Cuál es la función principal de un vector plasmÃdico utilizado en aplicaciones de biotecnologÃa e investigación?
¿Cuál es uno de los elementos funcionales que contiene el plásmido pCMV-GLuc2™?
¿Cuál es uno de los elementos funcionales que contiene el plásmido pCMV-GLuc2™?
¿Qué gen está controlado por el promotor PCMV en el plásmido pCMV-GLuc2™?
¿Qué gen está controlado por el promotor PCMV en el plásmido pCMV-GLuc2™?
¿Qué caracterÃstica permite a las bacterias adaptarse a diferentes entornos?
¿Qué caracterÃstica permite a las bacterias adaptarse a diferentes entornos?
¿Qué técnica se aprovecha de la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y genómico bacteriano?
¿Qué técnica se aprovecha de la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y genómico bacteriano?
¿Qué sucede con el ADN genómico y el plasmidial al neutralizar la reacción de Lisis Alcalina?
¿Qué sucede con el ADN genómico y el plasmidial al neutralizar la reacción de Lisis Alcalina?
¿Qué proceso se realiza para recuperar el plásmido en la técnica de Lisis Alcalina?
¿Qué proceso se realiza para recuperar el plásmido en la técnica de Lisis Alcalina?
En el procedimiento descrito, ¿cuál es la función del NaOH alcalino?
En el procedimiento descrito, ¿cuál es la función del NaOH alcalino?
¿Qué método se emplea para distinguir entre ADN plasmidial y genómico en la técnica de Lisis Alcalina?
¿Qué método se emplea para distinguir entre ADN plasmidial y genómico en la técnica de Lisis Alcalina?
¿Qué función cumple el gen GLuc en el contexto del texto?
¿Qué función cumple el gen GLuc en el contexto del texto?
¿Qué consecuencia se observarÃa al exponer cepas bacterianas que contienen el gen GLuc a una longitud de onda especÃfica?
¿Qué consecuencia se observarÃa al exponer cepas bacterianas que contienen el gen GLuc a una longitud de onda especÃfica?
¿Qué función cumple el péptido señal presente en el gen GLuc?
¿Qué función cumple el péptido señal presente en el gen GLuc?
¿Qué solución se utiliza para transformar quÃmicamente una cepa de E.coli con el vector pCMV-GLuc2?
¿Qué solución se utiliza para transformar quÃmicamente una cepa de E.coli con el vector pCMV-GLuc2?
¿Qué material o equipo NO se menciona como necesario para la transformación bacteriana con el vector pCMV-GLuc2?
¿Qué material o equipo NO se menciona como necesario para la transformación bacteriana con el vector pCMV-GLuc2?
¿Qué tipo de resistencia posee la cepa de E.coli seleccionada para la transformación con el vector pCMV-GLuc2?
¿Qué tipo de resistencia posee la cepa de E.coli seleccionada para la transformación con el vector pCMV-GLuc2?
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Study Notes
Plásmidos
- Los plásmidos son moléculas de ADN extra-genómicas que se encuentran en el citosol de algunos microorganismos.
- Proporcionan caracterÃsticas adicionales que ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno.
- La expresión de los genes en los plásmidos está vinculada a la expresión de los genes del cromosoma microbiano.
CaracterÃsticas de los plásmidos
- Se replican en números fijos, pero de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.
- Algunos plásmidos, llamados recombinantes, se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos.
Vectores plasmÃdicos
- Son plásmidos diseñados para transferir genes y fragmentos de ADN en aplicaciones de biotecnologÃa e investigación.
- Ejemplo: el plásmido pCMV-GLuc2, que contiene varios elementos funcionales, incluyendo el origen de replicación Ori pMB1, los promotores PCMV y PSV40, el gen para la enzima luciferasa del calamar Gaussia princeps (GLuc) controlado por el promotor PCMV, y genes de resistencia a los antibióticos neomicina y ampicilina.
Fundamentos
- Las bacterias pueden adaptarse a diferentes entornos gracias a la presencia de plásmidos, que pueden ser adquiridos mediante competencia natural, manipulación genética o conjugación entre bacterias.
- Los plásmidos pueden conferir nuevas caracterÃsticas a la bacteria receptora.
Técnica de Lisis Alcalina
- Aprovecha la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y el genómico bacteriano para distinguir entre ellos.
- La exposición de una suspensión bacteriana a un detergente aniónico y NaOH alcalino desnaturaliza todas las moléculas de ADN.
- El ADN plasmidial, al ser más pequeño, se renaturaliza más rápidamente que el genómico.
Procedimiento
- Preparación celular: cultivo de DH5α pCMV-GLuc2 en caldo NB con ampicilina.
- Incubación a 37°C en agitación constante a 300 rpm durante 18 horas.
- Obtención del plásmido a través de la técnica de Lisis Alcalina.
Gen GLuc
- Actúa como un gen reportero, lo que significa que su producto es fácilmente detectable o medible.
- Se utiliza como indicador de un proceso de clonación exitoso.
- El gen contiene un péptido señal que permite la secreción de la enzima luciferasa al medio de cultivo.
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