Plasmids and Alkaline Lysis Technique

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Questions and Answers

¿Qué función cumplen los plásmidos en los microorganismos?

Desencadenan mutaciones genéticas en el cromosoma microbiano.

Ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno. (correct)

Proporcionan características esenciales para la función celular.

Controlan la replicación del ADN bacteriano.

¿Qué diferencia clave existe entre la replicación del ADN bacteriano y la replicación de los plásmidos?

Los plásmidos se replican en números fijos, pero de manera dependiente del cromosoma.

Los plásmidos no se replican de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.

La replicación de los plásmidos no está vinculada a la expresión de genes del cromosoma microbiano. (correct)

La replicación del ADN bacteriano no está controlada por factores externos.

¿Qué tipo de plásmidos se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos?

Plásmidos convencionales

Plásmidos reguladores

Plásmidos recombinantes (correct)

Plásmidos esenciales

¿Cuál es la función principal de un vector plasmídico utilizado en aplicaciones de biotecnología e investigación?

Transferir genes y fragmentos de ADN. Signup and view all the answers

¿Cuál es uno de los elementos funcionales que contiene el plásmido pCMV-GLuc2™?

Origen de replicación Ori pMB1. Signup and view all the answers

¿Qué gen está controlado por el promotor PCMV en el plásmido pCMV-GLuc2™?

Enzima luciferasa del calamar Gaussia princeps (GLuc). Signup and view all the answers

¿Qué característica permite a las bacterias adaptarse a diferentes entornos?

La presencia de plásmidos Signup and view all the answers

¿Qué técnica se aprovecha de la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y genómico bacteriano?

Lisis Alcalina Signup and view all the answers

¿Qué sucede con el ADN genómico y el plasmidial al neutralizar la reacción de Lisis Alcalina?

El ADN plasmidial se renaturaliza más rápido que el genómico Signup and view all the answers

¿Qué proceso se realiza para recuperar el plásmido en la técnica de Lisis Alcalina?

Centrifugar la muestra Signup and view all the answers

En el procedimiento descrito, ¿cuál es la función del NaOH alcalino?

Desnaturalizar moléculas de ADN Signup and view all the answers

¿Qué método se emplea para distinguir entre ADN plasmidial y genómico en la técnica de Lisis Alcalina?

Reacción de neutralización Signup and view all the answers

¿Qué función cumple el gen GLuc en el contexto del texto?

Es un gen reportero que permite detectar o medir su producto fácilmente. Signup and view all the answers

¿Qué consecuencia se observaría al exponer cepas bacterianas que contienen el gen GLuc a una longitud de onda específica?

Emisión de luminiscencia. Signup and view all the answers

¿Qué función cumple el péptido señal presente en el gen GLuc?

Permite la secreción de la enzima luciferasa al medio de cultivo. Signup and view all the answers

¿Qué solución se utiliza para transformar químicamente una cepa de E.coli con el vector pCMV-GLuc2?

Solución 1 (fría) Signup and view all the answers

¿Qué material o equipo NO se menciona como necesario para la transformación bacteriana con el vector pCMV-GLuc2?

Cultivo de células sanguíneas Signup and view all the answers

¿Qué tipo de resistencia posee la cepa de E.coli seleccionada para la transformación con el vector pCMV-GLuc2?

Resistencia al antibiótico ampicilina Signup and view all the answers

Study Notes

Plásmidos

Los plásmidos son moléculas de ADN extra-genómicas que se encuentran en el citosol de algunos microorganismos.
Proporcionan características adicionales que ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno.
La expresión de los genes en los plásmidos está vinculada a la expresión de los genes del cromosoma microbiano.

Características de los plásmidos

Se replican en números fijos, pero de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.
Algunos plásmidos, llamados recombinantes, se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos.

Vectores plasmídicos

Son plásmidos diseñados para transferir genes y fragmentos de ADN en aplicaciones de biotecnología e investigación.
Ejemplo: el plásmido pCMV-GLuc2, que contiene varios elementos funcionales, incluyendo el origen de replicación Ori pMB1, los promotores PCMV y PSV40, el gen para la enzima luciferasa del calamar Gaussia princeps (GLuc) controlado por el promotor PCMV, y genes de resistencia a los antibióticos neomicina y ampicilina.

Fundamentos

Las bacterias pueden adaptarse a diferentes entornos gracias a la presencia de plásmidos, que pueden ser adquiridos mediante competencia natural, manipulación genética o conjugación entre bacterias.
Los plásmidos pueden conferir nuevas características a la bacteria receptora.

Técnica de Lisis Alcalina

Aprovecha la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y el genómico bacteriano para distinguir entre ellos.
La exposición de una suspensión bacteriana a un detergente aniónico y NaOH alcalino desnaturaliza todas las moléculas de ADN.
El ADN plasmidial, al ser más pequeño, se renaturaliza más rápidamente que el genómico.

Procedimiento

Preparación celular: cultivo de DH5α pCMV-GLuc2 en caldo NB con ampicilina.
Incubación a 37°C en agitación constante a 300 rpm durante 18 horas.
Obtención del plásmido a través de la técnica de Lisis Alcalina.

Gen GLuc

Actúa como un gen reportero, lo que significa que su producto es fácilmente detectable o medible.
Se utiliza como indicador de un proceso de clonación exitoso.
El gen contiene un péptido señal que permite la secreción de la enzima luciferasa al medio de cultivo.

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Description

Learn about how bacteria can adapt to different environments using plasmids, and how the Alkaline Lysis Technique is used to distinguish between plasmid DNA and genomic DNA.