Plasmids and Alkaline Lysis Technique
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Questions and Answers

¿Qué función cumplen los plásmidos en los microorganismos?

  • Desencadenan mutaciones genéticas en el cromosoma microbiano.
  • Ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno. (correct)
  • Proporcionan características esenciales para la función celular.
  • Controlan la replicación del ADN bacteriano.
  • ¿Qué diferencia clave existe entre la replicación del ADN bacteriano y la replicación de los plásmidos?

  • Los plásmidos se replican en números fijos, pero de manera dependiente del cromosoma.
  • Los plásmidos no se replican de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.
  • La replicación de los plásmidos no está vinculada a la expresión de genes del cromosoma microbiano. (correct)
  • La replicación del ADN bacteriano no está controlada por factores externos.
  • ¿Qué tipo de plásmidos se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos?

  • Plásmidos convencionales
  • Plásmidos reguladores
  • Plásmidos recombinantes (correct)
  • Plásmidos esenciales
  • ¿Cuál es la función principal de un vector plasmídico utilizado en aplicaciones de biotecnología e investigación?

    <p>Transferir genes y fragmentos de ADN.</p> Signup and view all the answers

    ¿Cuál es uno de los elementos funcionales que contiene el plásmido pCMV-GLuc2™?

    <p>Origen de replicación Ori pMB1.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué gen está controlado por el promotor PCMV en el plásmido pCMV-GLuc2™?

    <p>Enzima luciferasa del calamar Gaussia princeps (GLuc).</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué característica permite a las bacterias adaptarse a diferentes entornos?

    <p>La presencia de plásmidos</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué técnica se aprovecha de la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y genómico bacteriano?

    <p>Lisis Alcalina</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué sucede con el ADN genómico y el plasmidial al neutralizar la reacción de Lisis Alcalina?

    <p>El ADN plasmidial se renaturaliza más rápido que el genómico</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué proceso se realiza para recuperar el plásmido en la técnica de Lisis Alcalina?

    <p>Centrifugar la muestra</p> Signup and view all the answers

    En el procedimiento descrito, ¿cuál es la función del NaOH alcalino?

    <p>Desnaturalizar moléculas de ADN</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué método se emplea para distinguir entre ADN plasmidial y genómico en la técnica de Lisis Alcalina?

    <p>Reacción de neutralización</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué función cumple el gen GLuc en el contexto del texto?

    <p>Es un gen reportero que permite detectar o medir su producto fácilmente.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué consecuencia se observaría al exponer cepas bacterianas que contienen el gen GLuc a una longitud de onda específica?

    <p>Emisión de luminiscencia.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué función cumple el péptido señal presente en el gen GLuc?

    <p>Permite la secreción de la enzima luciferasa al medio de cultivo.</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué solución se utiliza para transformar químicamente una cepa de E.coli con el vector pCMV-GLuc2?

    <p>Solución 1 (fría)</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué material o equipo NO se menciona como necesario para la transformación bacteriana con el vector pCMV-GLuc2?

    <p>Cultivo de células sanguíneas</p> Signup and view all the answers

    ¿Qué tipo de resistencia posee la cepa de E.coli seleccionada para la transformación con el vector pCMV-GLuc2?

    <p>Resistencia al antibiótico ampicilina</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Plásmidos

    • Los plásmidos son moléculas de ADN extra-genómicas que se encuentran en el citosol de algunos microorganismos.
    • Proporcionan características adicionales que ayudan en la adaptación y supervivencia del microorganismo en su entorno.
    • La expresión de los genes en los plásmidos está vinculada a la expresión de los genes del cromosoma microbiano.

    Características de los plásmidos

    • Se replican en números fijos, pero de manera independiente en términos de tiempo y frecuencia.
    • Algunos plásmidos, llamados recombinantes, se crean en laboratorio a partir de fragmentos de ADN de diferentes organismos.

    Vectores plasmídicos

    • Son plásmidos diseñados para transferir genes y fragmentos de ADN en aplicaciones de biotecnología e investigación.
    • Ejemplo: el plásmido pCMV-GLuc2, que contiene varios elementos funcionales, incluyendo el origen de replicación Ori pMB1, los promotores PCMV y PSV40, el gen para la enzima luciferasa del calamar Gaussia princeps (GLuc) controlado por el promotor PCMV, y genes de resistencia a los antibióticos neomicina y ampicilina.

    Fundamentos

    • Las bacterias pueden adaptarse a diferentes entornos gracias a la presencia de plásmidos, que pueden ser adquiridos mediante competencia natural, manipulación genética o conjugación entre bacterias.
    • Los plásmidos pueden conferir nuevas características a la bacteria receptora.

    Técnica de Lisis Alcalina

    • Aprovecha la diferencia de tamaño entre el ADN plasmidial y el genómico bacteriano para distinguir entre ellos.
    • La exposición de una suspensión bacteriana a un detergente aniónico y NaOH alcalino desnaturaliza todas las moléculas de ADN.
    • El ADN plasmidial, al ser más pequeño, se renaturaliza más rápidamente que el genómico.

    Procedimiento

    • Preparación celular: cultivo de DH5α pCMV-GLuc2 en caldo NB con ampicilina.
    • Incubación a 37°C en agitación constante a 300 rpm durante 18 horas.
    • Obtención del plásmido a través de la técnica de Lisis Alcalina.

    Gen GLuc

    • Actúa como un gen reportero, lo que significa que su producto es fácilmente detectable o medible.
    • Se utiliza como indicador de un proceso de clonación exitoso.
    • El gen contiene un péptido señal que permite la secreción de la enzima luciferasa al medio de cultivo.

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    Quiz Team

    Description

    Learn about how bacteria can adapt to different environments using plasmids, and how the Alkaline Lysis Technique is used to distinguish between plasmid DNA and genomic DNA.

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