การใช้งาน PCR แบบเรียลไทม์ในคลินิก
24 Questions
1 Views

Choose a study mode

Play Quiz
Study Flashcards
Spaced Repetition
Chat to lesson

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

ขั้นตอนแรกในการทำ Reverse transcription PCR คืออะไร?

  • การเพิ่มจำนวน cDNA โดยใช้ DNA Polymerase
  • การตรวจหา RNA รวมทั้งหมด
  • การใช้งาน Housekeeping genes
  • การสร้าง cDNA โดยใช้ mRNA เป็นแบบจำลอง (correct)

    • คุณลักษณะของ RT-qPCR คืออะไร?

  • ใช้เพียง RNA ในการตรวจสอบ
  • ไม่ต้องมีการสร้าง cDNA
  • มีการสร้าง cDNA จาก DNA
  • ใช้ในการตรวจสอบและประมาณค่าของ mRNA (correct)

    • การทำ Normalization ในการวิเคราะห์ข้อมูลการแสดงออกของยีนมีจุดประสงค์อะไร?

  • เพื่อลดค่าตัวแปรระหว่างตัวอย่าง (correct)
  • เพื่อประเมินจำนวนไพรเมอร์ที่ใช้
  • เพื่อเพิ่มความแม่นยำในการแปลผลข้อมูล
  • เพื่อวิเคราะห์ค่าของ RNA รวมทั้งหมด

    • ข้อมูลใดที่ไม่ถือเป็น Housekeeping genes?

    <p>cDNA</p> Signup and view all the answers

    ΔΔCt Method ใช้เพื่ออะไร?

    <p>เพื่อคำนวณการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของยีน</p> Signup and view all the answers

    ข้อมูลใดที่ต้องใช้ในการสร้าง cDNA?

    <p>Reverse transcriptase</p> Signup and view all the answers

    ในการสร้าง cDNA ควรใช้หลักการใด?

    <p>ใช้ oligo dT เป็นไพรเมอร์ทั่วๆ ไป</p> Signup and view all the answers

    ต้องทำการทดลองอย่างไรเพื่อให้แน่ใจว่าผลลัพธ์มีความน่าเชื่อถือ?

    <p>ทำในจำนวนคู่หรือสามเท่า</p> Signup and view all the answers

    Real-time PCR คืออะไร?

    <p>เทคนิคที่แสดงผล PCR ในเวลาจริง</p> Signup and view all the answers

    อุปกรณ์ใดที่เชื่อมโยงกับ Real-time PCR?

    <p>ระบบออปติคัล</p> Signup and view all the answers

    การตรวจหาสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์แบบใดถือว่าธรรมดาที่สุดใน Real-time PCR?

    <p>Ethidium bromide</p> Signup and view all the answers

    อุปกรณ์ใดที่ไม่ใช่ส่วนหนึ่งของ Real-time PCR?

    <p>Microscope</p> Signup and view all the answers

    ประเภทของการวัดปริมาณ Real-Time ที่ใช้มาตรฐานในการสร้างกราฟมาตรฐานเรียกว่าอะไร?

    <p>Absolute Quantitation</p> Signup and view all the answers

    การแปลผลในการตรวจสอบ DNA ด้วยเทคนิค Real-time PCR ควรพิจารณาอะไร?

    <p>ความถูกต้องของข้อมูลและตรวจสอบการปนเปื้อน</p> Signup and view all the answers

    การใช้ Molecular beacons ใน Real-time PCR สามารถทำได้เพื่ออะไร?

    <p>การกำหนดปริมาณสารในกระบวนการ PCR</p> Signup and view all the answers

    สารหนึ่งที่ไม่สามารถใช้ในการตรวจสอบ DNA แบบ Probe based ได้คืออะไร?

    <p>Fluorescent dyes</p> Signup and view all the answers

    การวัดปริมาณสัมพัทธ์ในการวิเคราะห์ PCR ใช้ข้อมูลอย่างไร?

    <p>ใช้จากมาตรฐานภายนอกหรือข้อมูลจากตัวอย่างอ้างอิง</p> Signup and view all the answers

    วิธีการวัดอัตราส่วนเป้าหมาย/อ้างอิงใน PCR คืออะไร?

    <p>วิธี Comparative Ct</p> Signup and view all the answers

    ข้อใดเป็นข้อดีของการใช้ Real-Time PCR ในการวินิจฉัยเชื้อไวรัส?

    <p>การแยกกรดนิวคลีอิกจากไวรัสไม่ซับซ้อน</p> Signup and view all the answers

    ทำไม PCR จึงเป็นวิธีที่นิยมในการวินิจฉัยเชื้อแบคทีเรีย?

    <p>เพราะสามารถวินิจฉัยแบคทีเรียที่ยากต่อการเพาะได้</p> Signup and view all the answers

    การตรวจสอบการดื้อยาของเชื้อแบคทีเรียสามารถทำได้โดยวิธีใด?

    <p>Real-Time PCR</p> Signup and view all the answers

    การวิเคราะห์ยีนสำหรับการวินิจฉัยมะเร็งเกี่ยวข้องกับอะไร?

    <p>การเปลี่ยนแปลงพันธุกรรม</p> Signup and view all the answers

    RT-PCR แตกต่างจาก Real-Time PCR อย่างไร?

    <p>RT-PCR ใช้สำหรับการขยาย mRNA</p> Signup and view all the answers

    PCR ใช้สำหรับการวินิจฉัยเชื้อไหนบ้างที่ยากต่อการเพาะ?

    <p>Listeria monocytogenes</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Real-time PCR: Clinical Applications

    • Real-time PCR is a specialized technique that visualizes a PCR reaction "in real time" as the reaction progresses.
    • It links an optical system to a thermal cycler, capturing signals at each reaction step.
    • Also known as quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR).

    Learning Outcomes

    • Understand the principles of real-time PCR.
    • Understand how to interpret real-time PCR results.
    • Understand how to apply real-time PCR in a clinical setting.

    What is Real-Time PCR?

    • A specialized technique visualizing PCR reactions in real-time.
    • Links an optical system to a thermal cycler,
    • Captures signals at each reaction step.

    Fluorescence Signal Detection

    • Dye-based:
      • Ethidium bromide (1st generation)
      • SYBR Green I (2nd generation)
      • LC Green Plus (3rd generation)
    • Probe-based:
      • Molecular beacons
      • FRET
      • Scorpions
      • Hybridization
      • Hydrolysis (TaqMan, 5' nuclease assay, TaqMan MGB)

    Differences between Methods

    • Visual demonstration of the differences between SYBR Green, Hybridization Probes, and TaqMan Probes.

    Real-Time PCR Result

    • Shows a graph of Relative Fluorescence Units (RFU) versus the number of PCR cycles.
    • Includes phases like initiation, exponential, linear, and plateau.
    • Indicates Cycle threshold (Ct), baseline, threshold, and other key terms for analysis.
    • Also includes melting point graph (End-run Dissociation Curve, melting curve analysis)

    Types of Real-Time Quantification

    • Absolute Quantification: Uses a standard curve generated from serially diluted standards of known concentrations to calculate the concentration of an unknown sample.
    • Relative Quantification: Measures the target based on either an external standard or a reference sample using various methods like target/reference ratio, comparative Ct (2-ΔΔCt) method, Pfaffl model, or Q-Gene.

    Clinical Applications of Real-Time PCR: Viral Infection

    • Viral load has the strongest impact on virology.
    • Factors contributing to this include viral genetic simplicity.
    • Ease of nucleic acid isolation.
    • Less effort required compared to culture methods for other pathogens.
    • Also helps to identify co-infections.

    Clinical Applications of Real-Time PCR: Bacterial Infection

    • Preferred method for diagnosing bacteria difficult to cultivate.
    • Includes methods for identifying pathogens such as Listeria monocytogenes, Legionella pneumophila, Mycobacterium spp., Propionibacterium spp., Borrelia burgdorferi, and Leptospira genospecies.
    • Provides relevant information for physicians and veterinarians quickly to determine appropriate antibiotic usage for infections.
    • Identifies and monitors antibiotic resistance in bacterial isolates such as S. aureus, S. epidermidis, Helicobacter pylori, and Enterococcus species.

    Clinical Applications of Real-Time PCR: Cancer Diagnosis

    • Used for expression analysis of genes and differentiation of gene polymorphisms.
    • Identifies gene duplications, deletions, fusions, and overexpression.

    Clinical Applications of Real-Time PCR: Gene Expression

    • Used to analyze gene expression levels.
    • Demonstrates difference in gene expression between conditions.

    RT-PCR vs Real-Time PCR

    • RT-PCR (Reverse Transcriptase PCR) is a different technique than real-time PCR.
    • RT-PCR involves two steps: cDNA generation (using mRNA as a template) and cDNA amplification.
    • Quantitative Real-Time PCR (qPCR) is a combination of PCR and real-time analysis which allows precise quantification of DNA.

    Quantitative Reverse Transcription PCR (RT-qPCR)

    • Uses reverse transcription to convert RNA into cDNA followed by amplification via real-time PCR to detect and quantify RNA or mRNA.

    cDNA Synthesis

    • Process of converting mRNA into cDNA.
    • Uses different primers like oligo dT and random primers.
    • A crucial step in several molecular biology applications, including RT-qPCR.

    RT-PCR vs qPCR vs RT-qPCR

    • Descriptions of each method, demonstrating the separate processes and steps involved.

    Normalization

    • Corrects for sample-to-sample variation affecting gene expression data.
    • Uses housekeeping genes (mRNA), including GAPDH, β-actin, and 18S Ribosomal RNA (rRNA).

    ΔΔCt Method

    • A method for calculating the difference in cycle thresholds to determine the fold change in gene expression between treated and control groups.

    Studying That Suits You

    Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

    Quiz Team

    Related Documents

    Clinical Applications of Real-time PCR PDF

    Description

    Quiz นี้จะช่วยให้คุณเข้าใจหลักการของ PCR แบบเรียลไทม์ และการตีความผลลัพธ์ที่ได้จากการใช้เทคนิคนี้ในคลินิก รับรู้ถึงการประยุกต์ใช้งาน PCR แบบเรียลไทม์ และเรียนรู้เกี่ยวกับการตรวจจับสัญญาณฟลูออเรสเซนซ์ในกระบวนการนี้

    More Like This

    Use Quizgecko on...
    Browser
    Open
    Browser
    Browser