Microscopio Ottico: Parti e Funzioni

Microscopio e Conta Batterica Diretta

• Il microscopio è uno strumento composto da parti meccaniche, elettriche e ottiche che superano i limiti dell'occhio umano per ingrandire ed osservare la struttura e morfologia delle cellule.

Tipi di Microscopi

• Microscopio ottico: Utilizzo di lenti per ingrandire e visualizzare campioni.
• Microscopio elettronico: Utilizzo di elettroni per ingrandimenti maggiori rispetto al microscopio ottico.

Parti Meccaniche del Microscopio Ottico

• Stativo: Elemento centrale di sostegno del microscopio.
• Tavolino portaoggetti: Piano mobile per il campione.
• Traslatore: Per spostare il tavolino.
• Tubo: Struttura cilindrica per la formazione dell'immagine intermedia. Può avere oculari monoculare o bioculare; con possibilità di acquisizione con telecamera.
• Revolver portaobiettivi: Supporto girevole per diversi obiettivi con ingrandimenti differenti.
• Comandi di messa a fuoco: Vite macrometrica per spostamenti grandi e vite micrometrica per regolazioni fini.
• Diaframma di apertura: Regola la quantità di luce che attraversa l'obiettivo.

Parti Elettriche del Microscopio Ottico

• Trasformatore: Fornisce l'alimentazione elettrica.
• Regolatore della luminosità: Regola l'intensità della luce.
• Lampada d'illuminazione: Sorgente luminosa del microscopio.

Componenti Ottiche

• Condensatore: Sistema di lenti che concentra la luce sul campione.
• Obiettivi: Lenti che ingrandiscono inizialmente l'immagine. Gli ingrandimenti comuni sono 10x, 20x, 40x, e 100x (in immersione).
• Oculari: Lenti che ingrandiscono ulteriormente l'immagine. L'ingrandimento tipico è 10x.

Potere di Ingrandimento

• Il potere di ingrandimento è il prodotto dell'ingrandimento dell'obiettivo per l'ingrandimento dell'oculare.

Potere di Risoluzione

• Distanza minima fra due punti visibili come separati.

• Dipende dalla lunghezza d'onda della luce utilizzata, dall'angolo di apertura e dall'indice di rifrazione del mezzo.

• Potere di risoluzione più basso indica una migliore definizione dell'immagine.

Tipi di Microscopi

• Microscopio a campo chiaro: Campioni appaiono scuri su sfondo chiaro.
• Microscopio a campo oscuro: Solo la luce riflessa dalle cellule raggiunge l'obiettivo, quindi preparati chiari su sfondo scuro.
• Microscopio a contrasto di fase: Incrementa il contrasto tra le cellule e il mezzo circostante per visualizzazione senza colorare i preparati.
• Microscopio a fluorescenza: Utilizza la fluorescenza per visualizzare preparati colorati.

Colorazioni Batteriche

• Colorazioni semplici: Migliorano la visibilità microscopica dei campioni. Utilizzano un solo colorante.
• Colorazioni differenziali: Distinguono gruppi di microrganismi in base alle proprietà delle pareti cellulari (Gram positive o Gram negative). Usano più coloranti.

Preparati a Secco e a Fresco

• Preparati a secco: Campioni trattati al calore per ridurre i cambiamenti dopo la morte cellulare.
• Preparati a fresco: Campioni osservati nello stato vivente. Questo metodo consente di studiare la mobilità dei microrganismi.

Metodi di Conta Batterica Diretta

• Camere di conta: Strumenti con quadrati di area nota per contare direttamente le cellule. (Thoma, Burker, Neubauer)
• Coloranti fluorescenti: Consentono di discriminare le cellule vive dalle morte.
• FISH (Fluorescence in situ hybridization): Utilizza sonde oligonucleotidiche per identificare gruppi batterici.

Morfologia Cellulare Batterica

• Le cellule batteriche presentano forme diverse (cocchi, bacilli, vibrioni, spirochete).

Dati di Esempio di Calcolo (Camere di Conta)

• Si calcola il numero medio di cellule per ogni quadrante della camera di conta, moltiplicando questo risultato per la costante opportuna, e per il fattore di diluizione del campione analizzato.

Vantaggi e Svantaggi delle Camere di Conta

• Vantaggi: Rapido e poco costoso.
• Svantaggi: Limitato potere di rivelazione, difficile discriminare cellule vive o morte, non visualizzabile elementi mobili o molto piccoli, l'affaticamento degli operatori.