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Questions and Answers
Qual das seguintes características não é uma vantagem do DIC em comparação com a microscopia de fase de contraste?
Qual das seguintes características não é uma vantagem do DIC em comparação com a microscopia de fase de contraste?
A microscopia eletrónica utiliza cores vibrantes nas suas imagens.
A microscopia eletrónica utiliza cores vibrantes nas suas imagens.
False
Quais são os dois tipos de microscopia eletrónica?
Quais são os dois tipos de microscopia eletrónica?
SEM e TEM
A microscopia eletrónica requer uma voltagem maior para o tipo ______, que atravessa a amostra.
A microscopia eletrónica requer uma voltagem maior para o tipo ______, que atravessa a amostra.
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Associe os métodos de microscopia aos seus respectivos tipos:
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Qual o ajuste utilizado para melhorar a definição da imagem em DIC?
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Qual a relação entre comprimento de onda e voltagem na microscopia eletrónica?
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Na microscopia de campo claro, a iluminação não homogênea requer o ajuste da iluminação ______.
Na microscopia de campo claro, a iluminação não homogênea requer o ajuste da iluminação ______.
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Qual é a origem etimológica da palavra "microscópio"?
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Os microscópios e telescópios possuem o mesmo número de lentes.
Os microscópios e telescópios possuem o mesmo número de lentes.
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Quem foi considerado o pai da embriologia e histologia, conhecido por observar capilares?
Quem foi considerado o pai da embriologia e histologia, conhecido por observar capilares?
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A primeira lente criada pelo homem foi uma ______ datada de 721 AC.
A primeira lente criada pelo homem foi uma ______ datada de 721 AC.
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Associe os nomes aos seus respectivos feitos na história da microscopia:
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Qual é a principal função das lentes dos microscópios?
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Os primeiros microscópios foram fabricados por fabricantes de óculos.
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Em que ano a palavra microscópio se tornou oficial na academia Lincei?
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Qual é o material utilizado para fazer cortes ultrafinos no TEM?
Qual é o material utilizado para fazer cortes ultrafinos no TEM?
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O formaldeído é utilizado na preparação para TEM, pois não influencia o diagnóstico.
O formaldeído é utilizado na preparação para TEM, pois não influencia o diagnóstico.
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Quais os dois métodos de fixação mencionados para preparar uma amostra para TEM?
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A amostra para o microscópio eletrônico deve ser ______ e colada.
A amostra para o microscópio eletrônico deve ser ______ e colada.
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Associe os componentes do microscópio eletrônico com suas funções:
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Qual é a resolução obtida normalmente no SEM?
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As amostras para o TEM podem exceder os 100 nm de espessura.
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O que pode ser utilizado para vitrificar a amostra antes da análise no microscópio?
O que pode ser utilizado para vitrificar a amostra antes da análise no microscópio?
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Qual é o tempo recomendado para a fixação de tecidos em fixador a 4ºC?
Qual é o tempo recomendado para a fixação de tecidos em fixador a 4ºC?
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O formaldeído é um fixador recomendado para tecidos vegetais.
O formaldeído é um fixador recomendado para tecidos vegetais.
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Quais são os principais agentes coagulantes utilizados na fixação de tecidos?
Quais são os principais agentes coagulantes utilizados na fixação de tecidos?
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A __________ é uma etapa importante para diminuir a percentagem de água na amostra durante o processamento.
A __________ é uma etapa importante para diminuir a percentagem de água na amostra durante o processamento.
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Associe cada tipo de fixador ao seu componente principal:
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Qual dos seguintes fixadores é usado apenas para tecidos vegetais?
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A fixação em micro-ondas não requer o uso de agentes fixadores.
A fixação em micro-ondas não requer o uso de agentes fixadores.
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Quais são os dois passos principais na desidratação de amostras?
Quais são os dois passos principais na desidratação de amostras?
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Qual dos seguintes métodos é o principal para coloração em imunofluorescência?
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DAPI é um corante fluorescente usado para detectar organelos.
DAPI é um corante fluorescente usado para detectar organelos.
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Cite um exemplo de um fluorocromo sintético utilizado em microscopias.
Cite um exemplo de um fluorocromo sintético utilizado em microscopias.
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O corante __________ é utilizado para marcar a actina em estudos de citoesqueleto.
O corante __________ é utilizado para marcar a actina em estudos de citoesqueleto.
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Relacione os seguintes órgãos celulares com os corpos fluorescentes correspondentes:
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Qual dos seguintes corantes é usado para a identificação de iões Ca2+?
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O corante Iodeto de Propídio (PI) é específico para detectar ácidos nucleicos vivos.
O corante Iodeto de Propídio (PI) é específico para detectar ácidos nucleicos vivos.
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Os corantes __________ são utilizados para indicar o pH em meios celulares.
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Qual é a coloração mais comum usada em amostras histológicas?
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A eosina é um corante que colora predominantemente os núcleos das células.
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Qual é a função da diafanização no processo de montagem de amostras?
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O processo de _______ envolve passar as amostras por concentrações crescentes de álcool para remover a água.
O processo de _______ envolve passar as amostras por concentrações crescentes de álcool para remover a água.
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Associe os corantes com seus respectivos tipos:
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Qual é o primeiro passo na remoção da resina/parafina de uma amostra?
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A técnica de microarray permite análises histológicas em múltiplas amostras simultaneamente.
A técnica de microarray permite análises histológicas em múltiplas amostras simultaneamente.
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As resinas de montagem podem ser _______ naturais ou sintéticas.
As resinas de montagem podem ser _______ naturais ou sintéticas.
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Study Notes
Métodos de Investigação em Microscopia
- O microscópio, inventado em 1624, é um instrumento que permite observar objetos e células, entre outros, que são invisíveis a olho nu.
- Através da sua utilização, a teoria da geração espontânea foi refutada.
- Já em 1000 a.C. existia a pedra de leitura, um cristal de rocha que era considerado uma lente.
- Microscópios primordiais foram criados por Zacharias Janssen e seu filho, no séc. XVI, permitindo aumento de 3x e 10x.
- Os microscópios compostos funcionam de forma convergente, assemelhando-se a lentes dos olhos.
- Microscópios e telescópios diferem na direção das lentes em relação ao olho e na distância focal.
Enquadramento Histórico
- O microscópio tornou-se importante para tornar visíveis pequenos detalhes, sendo essencial para o estudo da biologia, química e medicina.
- Marcello Malpighi (1628-1694), um anatomista, foi considerado o precursor da embriologia e histologia.
- Robert Hooke (1653-1703), publicou "Micrografia" em 1665, onde descreveu e nomeou as células através da observação de cortes de cortiça.
- Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723), um mercador holandês, criou microscópios simples que permitiram aumento de 275 vezes e a observação de microorganismos.
Século XVII
- O termo microscópio tornou-se oficial pelos membros da academia Lincei, na Itália.
- O microscópio com tripé, inventado em 1683, garantiu estabilidade ao instrumento.
Século XIX
- Foram desenvolvidas novas técnicas de fabricação de lentes, que levaram a um aumento da resolução dos microscópios.
- Jackson Lister, matematicamente, corrigiu o problema da aberração esférica nas lentes.
- Charles Sédillot (1878) usou a palavra "micróbio", originária do grego, que significava "vida curta".
Século XX
- Surgimento de novas técnicas de observação, como o microscópio de fase de contraste, microscópio de contraste de interferência diferencial e microscópio de epifluorescência.
- August Kohler definiu as regras de iluminação para um melhor uso do microscópio.
- Ernest Abbe e Carl Zeiss descobriram as leis da física e a distância para melhor resolução.
Microscópio Eletrônico
- Ernest Ruska inventou o microscópio eletrônico nos anos 30.
- Este microscópio eletrônico permitiu ampliações inimagináveis, observando a nível atômico.
Microscopia Crio-eletrônica
- Técnica desenvolvida em 2017 que determinou a estrutura de biomoléculas em solução com alto nível de resolução.
- A técnica congela a amostra em nitrogênio líquido, permitindo estudos a nível atômico, evitando distorções.
Processamento de amostras para microscopia ótica
- Coleta de amostras (tissues) para análise, marcando e descrevendo, por exemplo, parte esquerda, direita, etc.
- Fixação (tecidos animais: formol, bouin; tecidos vegetais: FAA, carnoy).
- Lavagem.
- Desidratação (etanol 50%, 75%, 90%, 95% e álcool absoluto).
- Impregnação e inclusão (parafina).
- Corte no micrótomo.
Corte no criostato
- Congelamento e corte para obter cortes finos, sem perda de estruturas delicadas.
- Adequado para diferentes tipos de materiais, e principalmente, os mais delicados e/ou amostras frescas .
Remoção da resina/parafina
- Dissolução da parafina em xilol.
- Reidratação com etanol, em ordem decrescente de concentração, até a água.
Coloração
- H&E (hematoxilina e eosina) - técnicas comuns para corar células e tecidos.
Microscopia Ótica
- Uso de luz para a observação em microscopia ótica.
- Observação em campo claro, campo escuro, contraste de fase e contraste diferencial de interferência.
Microscopia de Fluorescência
- Uso de fluorocromos (substâncias fluorescentes) para visualização.
- Existem vários tipos de fluorocromos, cada um com comprimento de onda de excitação/emissão específicos.
- Autofluorescência, fotobleaching (desbotamento) e fototoxicidade são fatores a considerar.
Componentes do Microscópio de Fluorescência
- Fonte de luz, cubo ou conjunto de filtros fluorescentes, lentes objetivas e câmeras. As fontes de luz mais comuns são LED, xénon, haleto metálico, mercúrio, ou ILE (Integrated Laser Engine)..
Conjunto de Filtros Fluorescentes
- Filtro de excitação, espelho dicroico e filtro de emissão.
Qualidade da Imagem
- Fatores que afetam a qualidade da imagem: fluoróforo, intensidade de excitação, alinhamento da lâmpada, filtros e objetivo.
Limitações da Microscopia de Fluorescência
- Autofluorescência, bleed-through, fotobleaching e fototoxicidade.
Fototoxicidade na célula viva
- Usar luz de energia mais baixa ou filtro UV para minimizar os danos nas amostras.
FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)
- Serve para ver a difusão de moléculas através de imagens.
Outras Técnicas
- Métodos de coloração (imunohistoquímica, corantes fluorescentes, etc.).
- Técnicas específicas como TUNEL para analisar danos em DNA.
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Description
Este questionário explora a história e os métodos de investigação associados ao uso do microscópio. Desde a invenção do microscópio até suas aplicações na biologia, química e medicina, você testará seu conhecimento sobre essas importantes ferramentas de análise. Descubra como a utilização do microscópio transformou a nossa compreensão do mundo microscópico.
