Métodos de Investigação em Microscopia
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Questions and Answers

Qual das seguintes características não é uma vantagem do DIC em comparação com a microscopia de fase de contraste?

  • Bom contraste
  • Imagens com elevada resolução
  • Uso com espécimes espessos
  • Presença de halo distrativo (correct)

A microscopia eletrónica utiliza cores vibrantes nas suas imagens.

False (B)

Quais são os dois tipos de microscopia eletrónica?

SEM e TEM

A microscopia eletrónica requer uma voltagem maior para o tipo ______, que atravessa a amostra.

<p>TEM</p> Signup and view all the answers

Associe os métodos de microscopia aos seus respectivos tipos:

<p>DIC = Contraste de interferência diferencial SEM = Superfície da amostra TEM = Atravessa a amostra Microscopia de fase = Imagens com halo distrativo</p> Signup and view all the answers

Qual o ajuste utilizado para melhorar a definição da imagem em DIC?

<p>Ajuste de Wollaston (C)</p> Signup and view all the answers

Qual a relação entre comprimento de onda e voltagem na microscopia eletrónica?

<p>Um aumento de voltagem diminui o comprimento de onda.</p> Signup and view all the answers

Na microscopia de campo claro, a iluminação não homogênea requer o ajuste da iluminação ______.

<p>koller</p> Signup and view all the answers

Qual é a origem etimológica da palavra "microscópio"?

<p>Vem dos termos gregos &quot;mikros&quot; e &quot;skopein&quot; (B)</p> Signup and view all the answers

Os microscópios e telescópios possuem o mesmo número de lentes.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Quem foi considerado o pai da embriologia e histologia, conhecido por observar capilares?

<p>Marcello Malpighi</p> Signup and view all the answers

A primeira lente criada pelo homem foi uma ______ datada de 721 AC.

<p>pedra de leitura</p> Signup and view all the answers

Associe os nomes aos seus respectivos feitos na história da microscopia:

<p>Johann Giovanni Faber = Denominação do microscópio Zacharias Janssen = Primeiros microscópios com aumento Robert Hooke = Publicação de &quot;Micrografia&quot; John Yarwell = Modelo de microscópio com tripé</p> Signup and view all the answers

Qual é a principal função das lentes dos microscópios?

<p>Convergir os raios de luz (A)</p> Signup and view all the answers

Os primeiros microscópios foram fabricados por fabricantes de óculos.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

Em que ano a palavra microscópio se tornou oficial na academia Lincei?

<p>Século XVII</p> Signup and view all the answers

Qual é o material utilizado para fazer cortes ultrafinos no TEM?

<p>Faca de diamante (D)</p> Signup and view all the answers

O formaldeído é utilizado na preparação para TEM, pois não influencia o diagnóstico.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Quais os dois métodos de fixação mencionados para preparar uma amostra para TEM?

<p>Glutaraldeído e tetróxido de ósmio</p> Signup and view all the answers

A amostra para o microscópio eletrônico deve ser ______ e colada.

<p>desidratada</p> Signup and view all the answers

Associe os componentes do microscópio eletrônico com suas funções:

<p>Lentes eletromagnéticas = Criam um campo elétrico Filamento de tungsténio = Emissão de eletrões Condensadores = Focalizam o feixe de eletrões Placa fluorescente = Emissão de fotões</p> Signup and view all the answers

Qual é a resolução obtida normalmente no SEM?

<p>3D (A)</p> Signup and view all the answers

As amostras para o TEM podem exceder os 100 nm de espessura.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

O que pode ser utilizado para vitrificar a amostra antes da análise no microscópio?

<p>Nitrogênio líquido</p> Signup and view all the answers

Qual é o tempo recomendado para a fixação de tecidos em fixador a 4ºC?

<p>24 horas (A)</p> Signup and view all the answers

O formaldeído é um fixador recomendado para tecidos vegetais.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Quais são os principais agentes coagulantes utilizados na fixação de tecidos?

<p>metanol, etanol, acetona e ácido acético</p> Signup and view all the answers

A __________ é uma etapa importante para diminuir a percentagem de água na amostra durante o processamento.

<p>desidratação</p> Signup and view all the answers

Associe cada tipo de fixador ao seu componente principal:

<p>Formaldeído = Aldeídos Acido pícrico = Agente coagulante Tetróxido de ósmio = Agente oxidante Parafina = Impregnação</p> Signup and view all the answers

Qual dos seguintes fixadores é usado apenas para tecidos vegetais?

<p>FAA (B)</p> Signup and view all the answers

A fixação em micro-ondas não requer o uso de agentes fixadores.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

Quais são os dois passos principais na desidratação de amostras?

<p>Passar por etanol e xilol</p> Signup and view all the answers

Qual dos seguintes métodos é o principal para coloração em imunofluorescência?

<p>Uso de anticorpos primários e secundários (C)</p> Signup and view all the answers

DAPI é um corante fluorescente usado para detectar organelos.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Cite um exemplo de um fluorocromo sintético utilizado em microscopias.

<p>Rhodamine ou qualquer outro fluorocromo sintético mencionado.</p> Signup and view all the answers

O corante __________ é utilizado para marcar a actina em estudos de citoesqueleto.

<p>Alexa fluor faloidina</p> Signup and view all the answers

Relacione os seguintes órgãos celulares com os corpos fluorescentes correspondentes:

<p>Mitocôndria = MitoTracker Lisossomas = LysoTracker Golgi = BODIPY FL C5-ceramida Retículo endoplasmático = ER-TRACKER</p> Signup and view all the answers

Qual dos seguintes corantes é usado para a identificação de iões Ca2+?

<p>Fura-2 (D)</p> Signup and view all the answers

O corante Iodeto de Propídio (PI) é específico para detectar ácidos nucleicos vivos.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Os corantes __________ são utilizados para indicar o pH em meios celulares.

<p>indicadores de pH SNARF</p> Signup and view all the answers

Qual é a coloração mais comum usada em amostras histológicas?

<p>Hemalumen-eosina (H&amp;E) (A)</p> Signup and view all the answers

A eosina é um corante que colora predominantemente os núcleos das células.

<p>False (B)</p> Signup and view all the answers

Qual é a função da diafanização no processo de montagem de amostras?

<p>A diafanização prepara a amostra para compatibilidade com as resinas de montagem.</p> Signup and view all the answers

O processo de _______ envolve passar as amostras por concentrações crescentes de álcool para remover a água.

<p>desidratação</p> Signup and view all the answers

Associe os corantes com seus respectivos tipos:

<p>Hemalumen = Corante básico que colore núcleos Eosina = Corante ácido que colore proteínas</p> Signup and view all the answers

Qual é o primeiro passo na remoção da resina/parafina de uma amostra?

<p>Dissolução da parafina em xilol (C)</p> Signup and view all the answers

A técnica de microarray permite análises histológicas em múltiplas amostras simultaneamente.

<p>True (A)</p> Signup and view all the answers

As resinas de montagem podem ser _______ naturais ou sintéticas.

<p>naturais</p> Signup and view all the answers

Flashcards

Imunofluorescência em células fixadas

Método de coloração que usa anticorpos primários para marcar o alvo e anticorpos secundários conjugados com fluorescência para detectar o primário.

Corantes fluorescentes com propriedades de ligação intrínseca

Corantes que se ligam a moléculas específicas, como ácidos nucleicos, organelos ou membranas.

DAPI

Um corante azul que se liga ao DNA.

SYTOX Green

Um corante verde que se liga ao DNA.

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Iodeto de Propridio

Um corante vermelho que se liga ao DNA.

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Alexa Fluor Faloidina

Um corante verde que se liga à actina do citoesqueleto.

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ER-TRACKER

Um corante que se liga ao retículo endoplasmático (RE).

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Calcium Green

Um corante verde que se liga a íons cálcio (Ca2+).

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Microscopia de Contraste de Interferência Diferencial (DIC)

O DIC funciona separando uma fonte de luz polarizada em duas partes mutuamente coerentes ortólogas polarizadas que estão distribuídas espacialmente no mesmo plano e recombinadas antes da observação. A interferência das duas partes na recombinação é sensível à diferença do seu percurso ótico (produtos de índice de refração e comprimento geométrico do percurso).

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Ajuste do prisma de Wollaston em DIC

Ajuste do prisma de Wollaston que é colocado antes do segundo filtro de polarização, após o primeiro filtro de polarização. Isso resulta em uma melhor definição da imagem.

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Microscopia Eletrónica

Microscopia que usa luz de alta energia (elétrons) para gerar imagens. As imagens não têm cor, e o comprimento de onda dos elétrons é muito menor do que a luz visível.

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Microscopia Eletrónica de Varredura (SEM)

Tipo de microscopia eletrónica que observa a superfície da amostra. Requer menor voltagem (30kV).

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Microscopia Eletrónica de Transmissão (TEM)

Tipo de microscopia eletrónica que atravessa a amostra. Requer maior voltagem (50-60 kV).

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Remoção da parafina

Processo de remoção da parafina da amostra, utilizando xilol, antes da coloração.

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Reidratação

Processo de reidratação da amostra, usando álcool em concentrações decrescentes, antes da coloração.

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Coloração

Processo de aplicação de corantes à amostra, geralmente HE (Hemalum-Eosina), para realçar as estruturas.

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Hemalum

O corante básico da coloração HE, que cora o núcleo (ácidos nucleicos) e é chamado acidófilo.

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Eosina

O corante ácido da coloração HE, que cora o citoplasma (proteínas) e é chamado basofílico.

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Desidratação

Processo de desidratação da amostra, usando álcool em concentrações crescentes, após a coloração.

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Diafanização

Processo de tornar a amostra transparente, usando xilol, antes da montagem.

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Montagem

Processo de fixação da amostra a uma lâmina, utilizando uma resina, para preservar a amostra.

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Recolha de amostras para microscopia

O processo de retirar o material biológico para análise, garantindo que a área afetada e a área circundante sejam incluídas. Também inclui a identificação da localização e orientação do material (por exemplo, esquerdo/direito, orientação no corpo).

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Fixação de amostras

O passo para preservar a estrutura celular e os componentes do tecido, geralmente realizado em soluções químicas que fixam o material, evitando decomposição. Pode ser feita a temperatura ambiente ou em refrigeração.

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Fixação com formol

Um método comum de fixação que utiliza formol ou formaldeído, ideal para tecidos animais.

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Fixação FAA

Um método de fixação específico para tecidos vegetais, feito com uma solução de etanol, ácido acético e formol.

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Desidratação de amostras

O processo de remoção da água das amostras para permitir a penetração da parafina, que dará suporte à amostra durante o corte.

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Impregnação e inclusão em parafina

O passo onde a amostra é impregnada em parafina, um material sólido que permite o corte fino, tornando a amostra rígida e estável para análise microscópica.

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Fixação por micro-ondas

Um tipo de fixação que usa calor e pressão para preservar a estrutura dos tecidos.

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Fixação por vapor

Um tipo de fixação rápida que utiliza vapor para preservar a estrutura do tecido.

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Microscopia

Microscopia é a ciência que utiliza o microscópio para observar objetos e células, entre outros, com dimensões invisíveis a olho nu. Estuda e realiza aplicações com esta ferramenta.

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Microscópio

O microscópio é um instrumento que torna pequenos detalhes visíveis. É uma ferramenta fundamental para a microscopia.

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Invenção do Microscópio

O microscópio foi inventado no século XVII, sendo um termo grego que significa "ver o pequeno".

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Lente de Lanyard

A história do microscópio tem raízes na lente de Lanyard, um cristal de rocha utilizado como pedra de leitura no século VIII a.C.

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Microscópios Primordiais

Zacharias Janssen e o seu filho foram produtores de óculos que construíram os primeiros microscópios compostos no século XVI.

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Princípio dos Microscópios Compostos

Os microscópios compostos utilizam lentes convergentes, como os olhos humanos, para ampliar a imagem.

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Diferença entre Microscópios e Telescópios

A principal diferença entre microscópios e telescópios está na disposição das lentes e na focagem, que permite a observação de objetos muito pequenos.

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A Adoção da Palavra "Microscópio"

A palavra "microscópio" tornou-se oficial no século XVII, e no século XVIII, surgiu o primeiro microscópio com um tripé para maior estabilidade.

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Fixação em Microscopia eletrónica de transmissão (TEM)

Um processo que envolve o tratamento da amostra com glutaraldeído, seguido de tetróxido de ósmio. O glutaraldeído penetra a amostra radialmente, fixando proteínas e preservando a estrutura celular. O tetróxido de ósmio fixa a membrana celular, tornando-a mais visível.

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Citocromo C

Uma proteína que serve para transportar eletrões dentro da cadeia respiratória mitocondrial.

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Mitocôndria

Uma organela celular responsável pela produção de energia (ATP) através da respiração celular.

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Fertilidade

Um termo que se refere à função reprodutiva, relacionando-se com a capacidade de produzir descendentes.

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Microscopia eletrónica de varrimento (SEM)

Um tipo de microscopia eletrónica que permite visualizar a superfície de células e tecidos. Utiliza um feixe de eletrões que é direcionado para a amostra e os eletrões secundários emitidos pela amostra são captados e usados para formar uma imagem.

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Fixação

Um processo que envolve o tratamento da amostra com um agente de fixação, como glutaraldeído ou formaldeído, seguido de tetróxido de ósmio. Este processo preserva a estrutura celular para visualização em microscopia eletrónica.

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Study Notes

Métodos de Investigação em Microscopia

  • O microscópio, inventado em 1624, é um instrumento que permite observar objetos e células, entre outros, que são invisíveis a olho nu.
  • Através da sua utilização, a teoria da geração espontânea foi refutada.
  • Já em 1000 a.C. existia a pedra de leitura, um cristal de rocha que era considerado uma lente.
  • Microscópios primordiais foram criados por Zacharias Janssen e seu filho, no séc. XVI, permitindo aumento de 3x e 10x.
  • Os microscópios compostos funcionam de forma convergente, assemelhando-se a lentes dos olhos.
  • Microscópios e telescópios diferem na direção das lentes em relação ao olho e na distância focal.

Enquadramento Histórico

  • O microscópio tornou-se importante para tornar visíveis pequenos detalhes, sendo essencial para o estudo da biologia, química e medicina.
  • Marcello Malpighi (1628-1694), um anatomista, foi considerado o precursor da embriologia e histologia.
  • Robert Hooke (1653-1703), publicou "Micrografia" em 1665, onde descreveu e nomeou as células através da observação de cortes de cortiça.
  • Antoni van Leeuwenhoek (1632-1723), um mercador holandês, criou microscópios simples que permitiram aumento de 275 vezes e a observação de microorganismos.

Século XVII

  • O termo microscópio tornou-se oficial pelos membros da academia Lincei, na Itália.
  • O microscópio com tripé, inventado em 1683, garantiu estabilidade ao instrumento.

Século XIX

  • Foram desenvolvidas novas técnicas de fabricação de lentes, que levaram a um aumento da resolução dos microscópios.
  • Jackson Lister, matematicamente, corrigiu o problema da aberração esférica nas lentes.
  • Charles Sédillot (1878) usou a palavra "micróbio", originária do grego, que significava "vida curta".

Século XX

  • Surgimento de novas técnicas de observação, como o microscópio de fase de contraste, microscópio de contraste de interferência diferencial e microscópio de epifluorescência.
  • August Kohler definiu as regras de iluminação para um melhor uso do microscópio.
  • Ernest Abbe e Carl Zeiss descobriram as leis da física e a distância para melhor resolução.

Microscópio Eletrônico

  • Ernest Ruska inventou o microscópio eletrônico nos anos 30.
  • Este microscópio eletrônico permitiu ampliações inimagináveis, observando a nível atômico.

Microscopia Crio-eletrônica

  • Técnica desenvolvida em 2017 que determinou a estrutura de biomoléculas em solução com alto nível de resolução.
  • A técnica congela a amostra em nitrogênio líquido, permitindo estudos a nível atômico, evitando distorções.

Processamento de amostras para microscopia ótica

  • Coleta de amostras (tissues) para análise, marcando e descrevendo, por exemplo, parte esquerda, direita, etc.
  • Fixação (tecidos animais: formol, bouin; tecidos vegetais: FAA, carnoy).
  • Lavagem.
  • Desidratação (etanol 50%, 75%, 90%, 95% e álcool absoluto).
  • Impregnação e inclusão (parafina).
  • Corte no micrótomo.

Corte no criostato

  • Congelamento e corte para obter cortes finos, sem perda de estruturas delicadas.
  • Adequado para diferentes tipos de materiais, e principalmente, os mais delicados e/ou amostras frescas .

Remoção da resina/parafina

  • Dissolução da parafina em xilol.
  • Reidratação com etanol, em ordem decrescente de concentração, até a água.

Coloração

  • H&E (hematoxilina e eosina) - técnicas comuns para corar células e tecidos.

Microscopia Ótica

  • Uso de luz para a observação em microscopia ótica.
  • Observação em campo claro, campo escuro, contraste de fase e contraste diferencial de interferência.

Microscopia de Fluorescência

  • Uso de fluorocromos (substâncias fluorescentes) para visualização.
  • Existem vários tipos de fluorocromos, cada um com comprimento de onda de excitação/emissão específicos.
  • Autofluorescência, fotobleaching (desbotamento) e fototoxicidade são fatores a considerar.

Componentes do Microscópio de Fluorescência

  • Fonte de luz, cubo ou conjunto de filtros fluorescentes, lentes objetivas e câmeras. As fontes de luz mais comuns são LED, xénon, haleto metálico, mercúrio, ou ILE (Integrated Laser Engine)..

Conjunto de Filtros Fluorescentes

  • Filtro de excitação, espelho dicroico e filtro de emissão.

Qualidade da Imagem

  • Fatores que afetam a qualidade da imagem: fluoróforo, intensidade de excitação, alinhamento da lâmpada, filtros e objetivo.

Limitações da Microscopia de Fluorescência

  • Autofluorescência, bleed-through, fotobleaching e fototoxicidade.

Fototoxicidade na célula viva

  • Usar luz de energia mais baixa ou filtro UV para minimizar os danos nas amostras.

FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)

  • Serve para ver a difusão de moléculas através de imagens.

Outras Técnicas

  • Métodos de coloração (imunohistoquímica, corantes fluorescentes, etc.).
  • Técnicas específicas como TUNEL para analisar danos em DNA.

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Este questionário explora a história e os métodos de investigação associados ao uso do microscópio. Desde a invenção do microscópio até suas aplicações na biologia, química e medicina, você testará seu conhecimento sobre essas importantes ferramentas de análise. Descubra como a utilização do microscópio transformou a nossa compreensão do mundo microscópico.

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