Méthodes Analytiques - Module 1

Module 1 : Méthodes Analytiques

• Le module porte sur les différentes méthodes analytiques utilisées pour le contrôle qualité des produits biologiques dans le département Biosciences de Sanofi Pasteur.

Objectifs du Module

• Fournir une vue d'ensemble des méthodes analytiques utilisées pour contrôler la qualité des produits.
• Présenter les principes scientifiques et technologiques de quelques méthodes clés.
• Construire le profil de contrôle d'un produit.

Programme

• Introduction (Chapitre 1)
• Tests d'identité (Chapitre 2)
• Tests d'efficacité (Chapitre 3)
• Tests d'innocuité (Chapitre 4)
• Cas concret (Chapitre 5)
• Questions ? (Chapitre 6)

Le Contrôle Qualité

• Le contrôle qualité englobe l'échantillonnage, l'établissement de spécifications et d'analyses ainsi que l'organisation, l'établissement de documents et de procédures de libération pour garantir des essais appropriés avant la distribution ou la vente des produits.

Cycle de vie d'un nouveau produit

• Différentes étapes, de la recherche à la commercialisation, prenant entre 2 à 8 ans.
• Les étapes clés incluent : comprendre/imaginer, créer, sélectionner, tester/développer, enregistrer et produire.

Les nombreux tests au contrôle qualité

• Les tests au contrôle qualité représentent 70% du temps de production.
• Ces tests sont répétés par différentes autorités.

Mission de l'entité « Contrôle Qualité »

• Ce département assure la qualité des produits pharmaceutiques/biotechnologiques en réalisant des tests analytiques.
• Les attributs de qualité critique (CQA) sont des caractéristiques physiques, chimiques, biologiques ou microbiologiques requis pour la qualité du produit.

Introduction

• Un seul produit, mais 2 types de vies distinctes (fabrication et contrôle de qualité)
• Des tests sont effectués tout au long du processus de fabrication.
• Plusieurs types de tests selon l'étape de production.

Tests analytiques

• Trois catégories de tests analytiques selon leurs objectifs : identité, efficacité et innocuité/sécurité.

Composition d'un produit biologique

• Un produit biologique est composé d'antigènes, de principe actif (quantité, identité, activité) et d'excipients (milieu, pureté, stérilité, aspect, quantité).

Plusieurs disciplines scientifiques

• Les tests analytiques incluent des disciplines comme la biologie moléculaire, la physico-chimie, l'immunologie et la biologie animale, en fonction du type de méthode utilisée.

Tests d'identité

• Assurer l'identité du principe actif en utilisant des méthodes immunologiques.
• Utilisation de différentes technologies comme le test d'Ouchterlony, la chromatographie d'exclusion stérique, la technologie Luminex, la galerie API et le Western Blot.

Test d'Ouchterlony

• Identification de molécules anticorps ou antigènes basée sur la diffusion dans un milieu gélosé.
• Formation d'un complexe immun sous forme d'arc, à égale distance des puits.

Chromatographie d'Exclusion Stérique

• Séparation des composants en fonction de leur taille moléculaire à travers un gel poreux.
• Les composants sont détectés en fonction de leur temps de rétention.

Technologie Luminex

• Méthode basée sur la reconnaissance spécifique antigène/anticorps.
• Utilisation de billes marquées par des fluorochromes pour identifier les antigènes spécifiques dans un échantillon.

Galerie API

• Tests biochimiques colorimétriques pour identifier les genres bactériens.
• Utilisation d'une plaque avec plusieurs tubules pour effectuer différents tests.

Test de Neutralisation

• Mesure de l'inhibition de l'effet pathogène, particulièrement pour le virus Polio, en utilisant des anticorps spécifiques.

Western Blot

• Séparation des protéines par électrophorèse SDS-PAGE.
• Transfert des protéines sur une membrane.
• Détection des protéines spécifiques par anticorps.

Tests d'efficacité

• Évaluer l'efficacité du produit biologique (comme un vaccin) pour quantifier le niveau de protection.
• Plusieurs méthodes possibles, incluant tests sur animaux (dose efficace médiane - DE50), dosages par ELISA, tests d'immunodiffusion radiale, titrage infectieux.

Test d'activité sur animaux (DE50)

• Déterminer la dose de vaccin qui protège 50% des animaux de l'infection.
• Comparer la dose efficace à la dose d'un vaccin standard.

Dosage par ELISA

• Quantification du principe actif en utilisant la reconnaissance spécifique entre antigène et anticorps.
• Méthode immuno-enzymatique avec anticorps de capture, anticorps primaires et secondaires conjugués à des enzymes pour visualiser le résultat.

Test RFFIT (Rapid Fluorescent Foci Inhibition Test)

• Dosage des immunoglobulines antirabiques en utilisant des cellules sensibles et un conjugué fluorescent.

Test d'immunodiffusion radiale (SRID)

• Déterminer la quantité d'antigène (ex: glycoprotéine G du virus rabique) en observant la formation de cercles de précipitation dans un gel d'agarose contenant les anticorps.

Test d'immunogénicité

• Évaluer la production d'anticorps en réponse à une vaccination chez l'animal.
• Quantifier la concentration d'anticorps induits dans le sérum.

Titrage infectieux

• Détermination de la dose infectieuse 50% (DICC50) pour un vaccin en culture cellulaire.
• L'étape d'incubation, contenant le mélange de virus et les cellules, est importante pour l’observation d’un éventuel effet cytopathique ou par immunofluorescence.

Tests d'innocuité

• Assurer que le produit est sans danger pour les patients.
• Vérifier l'absence de pathogénicité, de contaminants et d'impuretés.
• (liste de tests d'innocuité)
• Contrôle d'inactivation, test d'endotoxines (LAL), test de mycoplasme, test de stérilité, dosage d'ADN résiduel, tests de pH et d'osmolalité.

Les différents types de vaccins

• Différents types de vaccins (viraux, bactériens, recombinants) qui incluent différents types d'administration (vivante, inactivé, atténuée, sous-unité, recombinante).

Test d'inactivation

• Vérifier l'absence de virus infectieux résiduels après le processus d'inactivation.
• Utilisez une méthode de détection adaptée à la biologie du virus, par exemple immunofluorescence ou détection ECP, pour vérifier l'inactivation du virus.

Test d'endotoxines

• Dosage des endotoxines bactériennes utilisant des méthodes colorimétriques avec des réactifs spéciaux comme le lysat d’amoebocytes de limule (LAL)..
• La concentration en endotoxines est calculée à partir du temps de réaction.

Test de Mycoplasme

• Détecter les mycoplasmes par une culture microbiologique.
• Trois phases : inoculation, enrichissement, subculture.

Test de Stérilité

• Vérifier l'absence de microorganismes en filtrant ou en inoculant le produit dans des milieux de culture.

Test de détoxification

• Vérifier l'absence de toxines.
• L'échantillon est analysé et testé avec une dose d'anticorps anti-toxine spécifique et une suspension cellulaire.

Dosage ADN résiduel

• Utiliser la PCR quantitative pour quantifier l'ADN résiduel et autres ADN contaminant.

pH et Osmolalité

• Vérifier que les conditions physico-chimiques du produit correspondent aux conditions physiologiques humaines (pH proche de 7.35 Osmolalité proche de 290 mosm/kg).

Profil de contrôle de vaccin Polio

• Description des étapes clés dans la production d'un vaccin polio inactivé.
• Énumération des tests effectués afin de contrôler la qualité du produit.

Conclusion

• Beaucoup d'autres méthodes analytiques existent et les informations complémentaires sont disponibles.

Ce quiz explore les différentes méthodes analytiques pour le contrôle qualité des produits biologiques, conformes aux standards de Sanofi Pasteur. Vous découvrirez des principes scientifiques clés et les tests essentiels y compris d'identité, d'efficacité et d'innocuité. Préparez-vous à évaluer vos connaissances et à construire un profil de contrôle produit.