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Questions and Answers
Pourquoi utiliser la collagénase IV en TP lipolyse et la P en TP pancréas ?
Quel est le rôle de la collagénase ?
Pourquoi faut-il fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagenase ?
Pourquoi l'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est-elle recommandée ?
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Quel est le type de tissu où l'on peut trouver le TA blanc ?
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Qu'est-ce qui différencie les collagénases de différents fournisseurs ?
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Pourquoi ajoute-t-on 400 μL d'eau au mélange réactionnel contenant les adipocytes avant de réaliser le dosage ?
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Quel est le rôle de la BSA dans le lavage de la phase adipocytaire ?
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Pourquoi les adipocytes flottent-ils lors de la seringue ?
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Quel est le but de la décantation ?
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Pourquoi ne met-on pas directement le réactif de dosage dans la première série de tubes ?
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Qu'est-ce que l'activité lipolytique du tube des adipocytes et sans drogue correspond ?
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Study Notes
La MEC et les Protéases
- La MEC est différente selon les tissus et utilise des protéases différentes (collagénase, peptidase, gélatinase, polysaccharidase, lipase) pour isoler les cellules.
- Le mélange de protéases est choisi en fonction du type de cellule ou de tissu à isoler, en jouant sur le ratio des activités protéolytiques.
La Collagénase
- La collagénase est un mélange de protéases, notamment la collagénase de type IV pour isoler les cellules des tissus adipeux et la collagénase de type P pour isoler les tissus des îlots pancréatiques.
- La collagénase est utilisée pour la dégradation de la MEC.
Isolation des Cellules Adipeuses
- Les adipocytes flottent lors de la séparation en raison de leur teneur en lipides.
- Il est important de laver la phase adipocytaire avec la solution HBSS 1x + 2 % BSA pour diluer la collagénase et nettoyer la suspension.
- La BSA agit comme une protéine carrier.
Isolement des Cellules
- Il est important de fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagénase pour augmenter la surface de contact de la collagénase.
- L'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est nécessaire pour l'activité enzymatique optimale.
Dosage du Glycérol
- Avant de réaliser le dosage, il est nécessaire d'ajouter 400 μL d'eau au mélange réactionnel pour lyser les adipocytes.
- La gamme étalon est nécessaire pour doser le glycérol.
Activité Lipolytique
- L'activité lipolytique peut être calculée après la réaction enzymatique.
- La concentration finale des agents pharmaceutiques utilisés est [A] = 16.7 μM, [PP] = 66.7 μM et [P2] = 66.7 μM.
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Description
Découvrez les différents types de protéases utilisés dans la MEC, comme la collagénase, la peptidase et la gélatinase, et leur rôle dans l'isolement des cellules et tissus.
