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Questions and Answers
Pourquoi utiliser la collagénase IV en TP lipolyse et la P en TP pancréas ?
Pourquoi utiliser la collagénase IV en TP lipolyse et la P en TP pancréas ?
- Parce que la lipolyse est impossible sans collagénase IV
- Parce que la collagénase IV est plus efficace que la collagénase P
- Parce que la collagénase P est trop chère
- Parce que les collagénases sont spécifiques du tissu (correct)
Quel est le rôle de la collagénase ?
Quel est le rôle de la collagénase ?
- Augmentation de la production de protéines
- Inhibition de l'isolement des cellules
- Stimulation de la croissance des cellules
- Dégradation de la MEC (correct)
Pourquoi faut-il fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagenase ?
Pourquoi faut-il fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagenase ?
- Pour diminuer la quantité de collagénase nécessaire
- Pour améliorer la qualité des cellules isolées
- Pour réduire le temps d'incubation
- Pour augmenter la surface de contact de la collagénase (correct)
Pourquoi l'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est-elle recommandée ?
Pourquoi l'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est-elle recommandée ?
Quel est le type de tissu où l'on peut trouver le TA blanc ?
Quel est le type de tissu où l'on peut trouver le TA blanc ?
Qu'est-ce qui différencie les collagénases de différents fournisseurs ?
Qu'est-ce qui différencie les collagénases de différents fournisseurs ?
Pourquoi ajoute-t-on 400 μL d'eau au mélange réactionnel contenant les adipocytes avant de réaliser le dosage ?
Pourquoi ajoute-t-on 400 μL d'eau au mélange réactionnel contenant les adipocytes avant de réaliser le dosage ?
Quel est le rôle de la BSA dans le lavage de la phase adipocytaire ?
Quel est le rôle de la BSA dans le lavage de la phase adipocytaire ?
Pourquoi les adipocytes flottent-ils lors de la seringue ?
Pourquoi les adipocytes flottent-ils lors de la seringue ?
Quel est le but de la décantation ?
Quel est le but de la décantation ?
Pourquoi ne met-on pas directement le réactif de dosage dans la première série de tubes ?
Pourquoi ne met-on pas directement le réactif de dosage dans la première série de tubes ?
Qu'est-ce que l'activité lipolytique du tube des adipocytes et sans drogue correspond ?
Qu'est-ce que l'activité lipolytique du tube des adipocytes et sans drogue correspond ?
Flashcards
Why use Collagénase IV and P?
Why use Collagénase IV and P?
Enzymes specific to different tissue types. Collagénase IV for lipolysis, P for pancreas.
Role of collagénase?
Role of collagénase?
Breaks down the extracellular matrix (ECM).
Why fractionate adipose tissue?
Why fractionate adipose tissue?
Increases the surface area for collagénase to act on the tissue.
Why incubate at 37°C for 30 min?
Why incubate at 37°C for 30 min?
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Where is white adipose tissue found?
Where is white adipose tissue found?
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What differentiates collagénases?
What differentiates collagénases?
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Why add water before dosage?
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Role of BSA in washing?
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Why adipocytes float?
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Purpose of decantation?
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Why not add reagent directly?
Why not add reagent directly?
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What is baseline lipolytic activity?
What is baseline lipolytic activity?
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Study Notes
La MEC et les Protéases
- La MEC est différente selon les tissus et utilise des protéases différentes (collagénase, peptidase, gélatinase, polysaccharidase, lipase) pour isoler les cellules.
- Le mélange de protéases est choisi en fonction du type de cellule ou de tissu à isoler, en jouant sur le ratio des activités protéolytiques.
La Collagénase
- La collagénase est un mélange de protéases, notamment la collagénase de type IV pour isoler les cellules des tissus adipeux et la collagénase de type P pour isoler les tissus des îlots pancréatiques.
- La collagénase est utilisée pour la dégradation de la MEC.
Isolation des Cellules Adipeuses
- Les adipocytes flottent lors de la séparation en raison de leur teneur en lipides.
- Il est important de laver la phase adipocytaire avec la solution HBSS 1x + 2 % BSA pour diluer la collagénase et nettoyer la suspension.
- La BSA agit comme une protéine carrier.
Isolement des Cellules
- Il est important de fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagénase pour augmenter la surface de contact de la collagénase.
- L'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est nécessaire pour l'activité enzymatique optimale.
Dosage du Glycérol
- Avant de réaliser le dosage, il est nécessaire d'ajouter 400 μL d'eau au mélange réactionnel pour lyser les adipocytes.
- La gamme étalon est nécessaire pour doser le glycérol.
Activité Lipolytique
- L'activité lipolytique peut être calculée après la réaction enzymatique.
- La concentration finale des agents pharmaceutiques utilisés est [A] = 16.7 μM, [PP] = 66.7 μM et [P2] = 66.7 μM.
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