La MEC et les protéases

12 Questions

Pourquoi utiliser la collagénase IV en TP lipolyse et la P en TP pancréas ?

Parce que les collagénases sont spécifiques du tissu

Quel est le rôle de la collagénase ?

Dégradation de la MEC

Pourquoi faut-il fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagenase ?

Pour augmenter la surface de contact de la collagénase

Pourquoi l'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est-elle recommandée ?

Pour permettre l'activité enzymatique optimale

Quel est le type de tissu où l'on peut trouver le TA blanc ?

Rétropéritonéal et gonadique et intestinal

Qu'est-ce qui différencie les collagénases de différents fournisseurs ?

Leur pureté et leur stabilité

Pourquoi ajoute-t-on 400 μL d'eau au mélange réactionnel contenant les adipocytes avant de réaliser le dosage ?

Pour lyser les adipocytes

Quel est le rôle de la BSA dans le lavage de la phase adipocytaire ?

Éliminer les contaminants de la suspension

Pourquoi les adipocytes flottent-ils lors de la seringue ?

Ils sont plein de lipides

Quel est le but de la décantation ?

Éliminer la troisième phase

Pourquoi ne met-on pas directement le réactif de dosage dans la première série de tubes ?

Pour obtenir un bon ratio réactif/échantillon

Qu'est-ce que l'activité lipolytique du tube des adipocytes et sans drogue correspond ?

À l'activité de base

Study Notes

La MEC et les Protéases

La MEC est différente selon les tissus et utilise des protéases différentes (collagénase, peptidase, gélatinase, polysaccharidase, lipase) pour isoler les cellules.
Le mélange de protéases est choisi en fonction du type de cellule ou de tissu à isoler, en jouant sur le ratio des activités protéolytiques.

La Collagénase

La collagénase est un mélange de protéases, notamment la collagénase de type IV pour isoler les cellules des tissus adipeux et la collagénase de type P pour isoler les tissus des îlots pancréatiques.
La collagénase est utilisée pour la dégradation de la MEC.

Isolation des Cellules Adipeuses

Les adipocytes flottent lors de la séparation en raison de leur teneur en lipides.
Il est important de laver la phase adipocytaire avec la solution HBSS 1x + 2 % BSA pour diluer la collagénase et nettoyer la suspension.
La BSA agit comme une protéine carrier.

Isolement des Cellules

Il est important de fractionner le tissu adipeux en petits morceaux avant l'ajout de collagénase pour augmenter la surface de contact de la collagénase.
L'incubation à 37°C pendant 30 minutes maximum est nécessaire pour l'activité enzymatique optimale.

Dosage du Glycérol

Avant de réaliser le dosage, il est nécessaire d'ajouter 400 μL d'eau au mélange réactionnel pour lyser les adipocytes.
La gamme étalon est nécessaire pour doser le glycérol.

Activité Lipolytique

L'activité lipolytique peut être calculée après la réaction enzymatique.
La concentration finale des agents pharmaceutiques utilisés est [A] = 16.7 μM, [PP] = 66.7 μM et [P2] = 66.7 μM.