Introducción a la Histología y Técnicas

Introducción a la Histología y Técnicas Histológicas

• La histología es el estudio de los tejidos orgánicos, incluyendo su estructura microscópica, desarrollo y funciones

Historia de la Histología

• Culturas antiguas inventaron una lupa rudimentaria alrededor del 3000 a.e.
• Zacharias Janssen creó el primer microscopio compuesto con dos lentes en 1590.
• Galileo Galilei elabora un microscopio compuesto en 1610.
• Robert Hooke examinó laminas delgadas de corcho y llamó células a las celdillas en 1665.
• Anton Van Leeuwenhoek dió a conocer sus observaciones acerca de los glóbulos rojos, espermatozoides y microorganismos en agua en 1673.
• Matthias Schleiden concluyó que los vegetales estaban constituidos por células en 1838.
• Theodor Schwann realizó observaciones animales y concluyó que estaban contituidos por células en 1839.
• Rudolf Virchow estableció que toda célula procede de otra célula en 1850.
• Rudolf Virchow agregó un tercer postulado en 1858.
• Louis Pasteur demuestra la existencia de la vida microbiana en 1878.
• Ernest Ruska y Max Knoli construyeron el microscopio electrónico en 1925.
• Los estudios histológicos fueron posibles a partir del año 1600, cuando se incorporó el microscopio.
• Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histología.
• Anton Van Leeuwenhoek nació en Delft, Países Bajos en 1632.
• Las primeras investigaciones histológicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invención del microscopio óptico por Antonio Van Leeuwenhoek.

Microscopios

• El microscopio óptico utiliza luz común para la visualización.
• El microscopio electrónico de transmisión usa un haz de electrones (filamento de tungsteno) y bobinas electromagnéticas.
• El microscopio electrónico de barrido también usa haz de electrones y bobinas electromagnéticas, ofreciendo imágenes tridimensionales
• El poder de resolución del microscopio óptico es de 1 mm (1000 nm).
• El poder de resolución del microscopio electrónico de transmisión es de 0,2 nm (2 Å).
• El poder de resolución del microscopio electrónico de barrido es de 3-5 nm (30-50 Å).
• El microscopio óptico se usa directamente y con fotografía.
• El microscopio electrónico de transmisión usa una pantalla fluorescente y fotografía.
• El microscopio electrónico de barrido usa una pantalla de televisión y fotográfica.
• Microscopio óptico permite ver la estructura de células y tejidos, hongos y bacterias.
• Un microscopio electrónico de transmisión permite ver la ultraestructura de células, organelas, viroides e inclusiones virales.
• Un microscopio electrónico de barrido se usa para el estudio morfológico de la superficie dando imágenes tridimensionales.

Tipos de Microscopios

• Microscopio óptico: Microscopio Óptico Simple y Microscopio Óptico Compuesto.
• Microscopio electrónico: Transmisión, Barrido, Digital y Efecto túnel o cuántico.

Técnica Histológica

• Pasos: Obtención de material, fijación, inclusión, obtención del corte, coloración y montaje final
• Los pasos de la técnica histológica incluyen la fijación, inclusión y tinción
• La fijación conserva la estructura de la célula y componentes extracelulares.
• Se usa formalina, una solución acuosa de formaldehido al 37%.
• Los pasos de la técnica histológica incluyen el lavado y la deshidratación en disoluciones de alcohol.
• Aclaramiento se realiza con disolventes como xileno o tolueno miscibles en la parafina.
• El corte se realiza con un microtomo y un medio de montaje de 5-15 micrones, y permite su observación bajo microscopio
• En las estructuras de membrana se utiliza permanganato y osmio.
• En los lípidos neutros se usa formalina y colorantes que se disuelven en grasa.

Generalidades y Aplicación de la Ténica Hisotógica y de la Microscopía

• La histología se ha desarrollado con el uso de la microscopía electrónica e histoquímica, entre otras técnicas.

Técnicas de Tinción

• Eosina es un colorante ácido (rosado) con carga negativa para grupos catiónicos.
• Hematocilina es un colorante básico (azul) con carga positiva para grupos fosfatos ionizados.
• Ácido peryódico de Schiff (PAS): tiñe hidratos de carbono (púrpura)
• Tricrómica de Gonori: tiñe fibras musculares (rojo).
• Tricrómica de Masson: tiñe cartílago azul/verde, y fibras musculares de rojo.
• Tricrómica de Mallory: tiñe a la queratina (anaranjado, cartílago (azul), matriz ósea (azul intenso), fibras musculares (rojo).
• Weigert para elastina: tiñe fibras elásticas (azul/negro).

Tipos de Coloraciones

• Vitales: Se practican sobre células vivas, introduciendo el colorante en la circulación. Un ejemplo es el verde Jano y el azul de metileno.
• Supravitales: Se realizan en células o tejidos vivos aislados del organismo.
• No vitales: Se realizan en células muertas.

Técnicas de Coloración

• Los colorantes pueden clasificarse en básicos, ácidos, neutros e indiferentes.
• La coloración más común es Hematoxilina-Eosina, que colorea los núcleos celulares y ARN de color índigo, y el citoplasma de color rosado a rojo.
• Los estudios de sangre usan la coloración de Romanowsky.
• El Azul de Metileno fue el primer colorante usado.
• La Fucsina-Resorcina es un colorante usado para fibras elásticas.
• La afinidad por la Plata de las fibras reticulares, han hecho de la coloración Argéntica la más usada para este fin.
• La Tricrómica de Mallory, tiñe los epitelios de rojo y el tejido conectivo de azul.
• La Hematoxilina Férrica resalta las estrías del músculo esquelético.

Clasificación de los Colorantes

• Naturales: Animal y Vegetal (Carmin, Hematoxilina o Arceina).
• Artificiales: Derivados de la anilina. El colorante artificial más usado es la eosina

Fijación de la Muestra

• Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas con varios fines.
• Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
• Aumentar la dureza del tejido para facilitar la elaboración de las películas del tejido.
• Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
• Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.

Deshidratación Aclaramiento Inclusión

• Después de la fijación, se elimina el fijador y se deshidrata.
• Se aplica gradualmente una solución de un agente deshidratante como Alcohol Etílico o Acetona (50% hasta 100%).
• El aclaramiento transforma el tejido en transparente en el xileno.
• La inclusión logra infiltrar la parafina líquida al tejido para que disuelva el medio de aclaramiento y penetre el tejido
• El calor evapora el xilol.

Obtención del Material

• Es el primer paso de la técnica histológica, El material puede ser obtenido quirúrgicamente mediante los métodos de incisión o excisión y es importante aplicar el método correcto.
• Mediate citología exfoliativa también se pueden obtener muestras.
• El tejido también puede obtenerse después de la disección de un animal o de una necropsia.
• Los especímenes se pueden analizar "in vitro" o "in vivo".
• Biopsias se realizan por ejemplo con los métodos de sacarocado o Tru-cut.
• Citología se encarga del estudio de las células en cuanto a las propiedades, estructura y funciones.

La histología es el estudio de los tejidos orgánicos, incluyendo su estructura microscópica, desarrollo y funciones. Este tema también cubre la historia de la histología, desde los primeros microscopios hasta los descubrimientos de Rudolf Virchow y Louis Pasteur.