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Questions and Answers
Quel est le principe de base de la chromatographie?
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Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie?
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Quels sont les types de chromatographie classés selon le support de la phase stationnaire?
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Quel est le rôle de la phase mobile dans la chromatographie?
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Quel est le mécanisme permettant la séparation des composés dans la chromatographie?
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Quel est le but de la chromatographie?
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Quel est le rôle des forces de Van der Waals et des liaisons hydrogène dans la chromatographie?
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Quelle est la caractéristique de la vitesse de séparation des composés dans la chromatographie?
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Quel est le facteur qui détermine le pouvoir de séparation dans la chromatographie d'exclusion stérique?
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Pourquoi est-il important que le gel soit inerte chimiquement?
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Quel est l'intervalle de taille des particules du gel en chromatographie classique?
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Quels sont les types de gels qui ne gardent pas leur forme initiale après élimination de la phase dispersante?
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Quel est le facteur qui influence la consistance du gel?
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Quel est le critère principal pour le choix du gel en chromatographie d'exclusion stérique?
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Quelle est la condition pour la phase mobile en chromatographie d'exclusion stérique?
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Quel est le type de gel qui est intéressant lorsqu'on travaille avec des débits élevés ou sous forte pression?
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Quel est le type de chromatographie qui permet d'identifier, de séparer et de purifier les composés d'une réaction?
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Quel est le facteur qui dépend de l'affinité à la phase stationnaire et de la solubilité dans la phase mobile?
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Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie?
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Quel est le type de chromatographie qui permet de quantifier un produit grâce à un témoin?
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Quel est le rôle de la pompe dans la chromatographie?
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Quel est le type de chromatographie qui utilise un gel constitué de granules?
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Quel est le rôle de l'échantillon dans la chromatographie?
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Combien de phases sont utilisées dans la chromatographie sur colonne?
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Quel est l'effet du pH sur la charge nette d'une protéine?
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Quelle est la conséquence d'un pH supérieur au point isoélectrique de la protéine?
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Quel est le principe de la chromatographie d'affinité?
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Quel est le rôle du ligand dans la chromatographie d'affinité?
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Quel est l'objectif de la chromatographie d'affinité?
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Quel est le résultat de l'interaction entre le ligand et la protéine en chromatographie d'affinité?
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Quel est le rôle de la phase mobile dans la chromatographie?
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Quel est le rôle de la pompe dans la chromatographie?
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Quel est le rôle du détecteur dans la chromatographie?
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Quel est le rôle de la colonne dans la chromatographie?
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Quel est le principe de la chromatographie d’exclusion stérique?
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Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie d’exclusion stérique?
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Quel est le rôle de l’enregistreur dans la chromatographie?
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Quel est le rôle du collecteur de fractions dans la chromatographie?
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Study Notes
Définition de la chromatographie
- La chromatographie est une méthode de séparation des constituants présents dans des mélanges variés.
- Elle sert en analyse pour purifier, identifier et quantifier des composés au sein d'échantillons divers.
- Le principe de base repose sur les équilibres de concentration qui apparaissent lorsqu'un composé est mis en présence de deux phases non miscibles.
Principe de la chromatographie
- La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les différentes affinités d'un(des) composé(s) à l'égard de deux phases (stationnaire et mobile).
- Le principe de cette technique est basé sur la migration différentielle des divers solutés contenus dans un échantillon analysé.
- La phase stationnaire a tendance à retenir plus ou moins les composés de l'échantillon à l'aide d'interactions comme les forces de Van der Waals ou les liaisons hydrogène.
Types de chromatographie
- La chromatographie peut être classée selon le support de la phase stationnaire :
- Chromatographie sur colonne (HPLC, CPG, et les colonnes de silice)
- Chromatographie sur surface (chromatographie sur couches minces ou CCM, chromatographie sur papier)
- La chromatographie peut être classée selon la nature de la phase mobile :
- Chromatographie en phase gazeuse (CPG)
- Chromatographie en phase liquide (CPL)
- Chromatographie sur couche mince (CCM)
- Chromatographie de partage centrifuge (CPC)
- Chromatographie liquide haute pression (ou performance) (HPLC)
Chromatographie sur colonne
- La chromatographie sur colonne est une méthode de séparation des constituants d'un mélange par migration dans un dispositif constitué de deux phases :
- La phase stationnaire : support solide
- La phase mobile : le solvant
- La vitesse de déplacement des composés dans la colonne dépend de :
- L'affinité à la phase stationnaire
- La solubilité dans la phase mobile
Eléments chromatographiques
- Les éléments de la chromatographie sont :
- L'échantillon : la solution qui contient les composés à analyser
- La phase stationnaire : un gel constitué de granules qui se trouve dans une colonne
- La phase mobile : un liquide qui se déplace à travers la phase stationnaire
- La colonne : le support de la phase stationnaire
- La pompe : permet de régler le débit de la phase mobile à travers la colonne
- Le détecteur : évalue la quantité de chacun des composés séparés
- L'enregistreur : dessine les pics en fonction de leur intensité
- Le collecteur de fractions : permet de collecter les fractions de l'échantillon
Chromatographie d'exclusion stérique
- La chromatographie d'exclusion stérique est une méthode chromatographique qui permet de séparer des molécules en fonction de leur poids moléculaire et de leur forme
- La phase stationnaire est un solide poreux dont la dimension des pores est voisine de celle de certaines molécules à séparer
- Les grosses molécules sont exclues et donc éluées en premier, tandis que les petites molécules et les molécules de taille moyenne sont éluées plus tardivement
Chromatographie d'affinité
- La chromatographie d'affinité est basée sur des interactions spécifiques et réversibles entre des composés spécifiques (ligands) lié par covalence à un support inerte qui constitue la phase fixe et son partenaire d'affinité en solution
- Le ligand est fixé sur une matrice (résine) directement ou indirectement à l'aide d'un bras fixateur (espaceur)
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Description
Le pH du milieu affecte la charge nette d'une protéine, influant ainsi sur son comportement. Découvrez comment le pH interagit avec les protéines et comment cela affecte leur éluution.