38 Questions
Quel est le principe de base de la chromatographie?
Les équilibres de concentration qui apparaissent lorsqu’un composé est mis en présence de deux phases non miscibles
Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie?
Elle retient les composés de l’échantillon à l’aide d’interactions comme les forces de Van der Waals ou les liaisons hydrogène
Quels sont les types de chromatographie classés selon le support de la phase stationnaire?
Chromatographie sur colonne, HPLC, CPG et les colonnes de silice
Quel est le rôle de la phase mobile dans la chromatographie?
Elle entraîne l’échantillon au travers de la phase stationnaire
Quel est le mécanisme permettant la séparation des composés dans la chromatographie?
La migration différentielle des divers solutés contenus dans un échantillon analysé
Quel est le but de la chromatographie?
Purifier, identifier et quantifier des composés au sein d’échantillons divers
Quel est le rôle des forces de Van der Waals et des liaisons hydrogène dans la chromatographie?
Ils relient les composés à la phase stationnaire
Quelle est la caractéristique de la vitesse de séparation des composés dans la chromatographie?
Elle est indépendante de la nature des phases mobile et stationnaire
Quel est le facteur qui détermine le pouvoir de séparation dans la chromatographie d'exclusion stérique?
Le diamètre des pores du gel
Pourquoi est-il important que le gel soit inerte chimiquement?
Pour empêcher la réaction avec la phase dispersante
Quel est l'intervalle de taille des particules du gel en chromatographie classique?
40 à 300 μm
Quels sont les types de gels qui ne gardent pas leur forme initiale après élimination de la phase dispersante?
Xérogels
Quel est le facteur qui influence la consistance du gel?
Le degré de réticulation du gel
Quel est le critère principal pour le choix du gel en chromatographie d'exclusion stérique?
Le poids moléculaire des composés à séparer
Quelle est la condition pour la phase mobile en chromatographie d'exclusion stérique?
Elle ne doit pas interagir avec la phase stationnaire
Quel est le type de gel qui est intéressant lorsqu'on travaille avec des débits élevés ou sous forte pression?
Aerogels
Quel est le type de chromatographie qui permet d'identifier, de séparer et de purifier les composés d'une réaction?
Chromatographie sur colonne
Quel est le facteur qui dépend de l'affinité à la phase stationnaire et de la solubilité dans la phase mobile?
La vitesse de déplacement des composés dans la colonne
Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie?
De supporter les composés
Quel est le type de chromatographie qui permet de quantifier un produit grâce à un témoin?
Chromatographie liquide haute pression
Quel est le rôle de la pompe dans la chromatographie?
De pomper la phase mobile
Quel est le type de chromatographie qui utilise un gel constitué de granules?
Chromatographie sur colonne
Quel est le rôle de l'échantillon dans la chromatographie?
De contenir les composés à analyser
Combien de phases sont utilisées dans la chromatographie sur colonne?
Deux phases distinctes
Quel est l'effet du pH sur la charge nette d'une protéine?
Le pH influe sur la charge nette de la protéine en la rendant soit négative soit positive
Quelle est la conséquence d'un pH supérieur au point isoélectrique de la protéine?
La protéine devient chargée négativement
Quel est le principe de la chromatographie d'affinité?
Des interactions spécifiques et réversibles entre des composés
Quel est le rôle du ligand dans la chromatographie d'affinité?
Il forme un complexe avec la protéine
Quel est l'objectif de la chromatographie d'affinité?
Séparer les molécules en fonction de leurs propriétés spécifiques
Quel est le résultat de l'interaction entre le ligand et la protéine en chromatographie d'affinité?
La protéine forme un complexe avec le ligand
Quel est le rôle de la phase mobile dans la chromatographie?
De se déplacer à travers la phase stationnaire et d’entraîner les composés de l’échantillon
Quel est le rôle de la pompe dans la chromatographie?
De régler le débit de la phase mobile à travers la colonne
Quel est le rôle du détecteur dans la chromatographie?
D’évaluer la quantité de chacun des composés séparés et d’envoyer un signal électronique
Quel est le rôle de la colonne dans la chromatographie?
De supporter la phase stationnaire
Quel est le principe de la chromatographie d’exclusion stérique?
De séparer les molécules en fonction de leur poids moléculaire et de leur forme
Quel est le rôle de la phase stationnaire dans la chromatographie d’exclusion stérique?
De être un solide poreux dont la dimension des pores est voisine de celle de certaines molécules à séparer
Quel est le rôle de l’enregistreur dans la chromatographie?
De dessiner les pics en fonction de leur intensité
Quel est le rôle du collecteur de fractions dans la chromatographie?
De collecter les fractions de l’échantillon
Study Notes
Définition de la chromatographie
- La chromatographie est une méthode de séparation des constituants présents dans des mélanges variés.
- Elle sert en analyse pour purifier, identifier et quantifier des composés au sein d'échantillons divers.
- Le principe de base repose sur les équilibres de concentration qui apparaissent lorsqu'un composé est mis en présence de deux phases non miscibles.
Principe de la chromatographie
- La chromatographie est une méthode physique de séparation basée sur les différentes affinités d'un(des) composé(s) à l'égard de deux phases (stationnaire et mobile).
- Le principe de cette technique est basé sur la migration différentielle des divers solutés contenus dans un échantillon analysé.
- La phase stationnaire a tendance à retenir plus ou moins les composés de l'échantillon à l'aide d'interactions comme les forces de Van der Waals ou les liaisons hydrogène.
Types de chromatographie
- La chromatographie peut être classée selon le support de la phase stationnaire :
- Chromatographie sur colonne (HPLC, CPG, et les colonnes de silice)
- Chromatographie sur surface (chromatographie sur couches minces ou CCM, chromatographie sur papier)
- La chromatographie peut être classée selon la nature de la phase mobile :
- Chromatographie en phase gazeuse (CPG)
- Chromatographie en phase liquide (CPL)
- Chromatographie sur couche mince (CCM)
- Chromatographie de partage centrifuge (CPC)
- Chromatographie liquide haute pression (ou performance) (HPLC)
Chromatographie sur colonne
- La chromatographie sur colonne est une méthode de séparation des constituants d'un mélange par migration dans un dispositif constitué de deux phases :
- La phase stationnaire : support solide
- La phase mobile : le solvant
- La vitesse de déplacement des composés dans la colonne dépend de :
- L'affinité à la phase stationnaire
- La solubilité dans la phase mobile
Eléments chromatographiques
- Les éléments de la chromatographie sont :
- L'échantillon : la solution qui contient les composés à analyser
- La phase stationnaire : un gel constitué de granules qui se trouve dans une colonne
- La phase mobile : un liquide qui se déplace à travers la phase stationnaire
- La colonne : le support de la phase stationnaire
- La pompe : permet de régler le débit de la phase mobile à travers la colonne
- Le détecteur : évalue la quantité de chacun des composés séparés
- L'enregistreur : dessine les pics en fonction de leur intensité
- Le collecteur de fractions : permet de collecter les fractions de l'échantillon
Chromatographie d'exclusion stérique
- La chromatographie d'exclusion stérique est une méthode chromatographique qui permet de séparer des molécules en fonction de leur poids moléculaire et de leur forme
- La phase stationnaire est un solide poreux dont la dimension des pores est voisine de celle de certaines molécules à séparer
- Les grosses molécules sont exclues et donc éluées en premier, tandis que les petites molécules et les molécules de taille moyenne sont éluées plus tardivement
Chromatographie d'affinité
- La chromatographie d'affinité est basée sur des interactions spécifiques et réversibles entre des composés spécifiques (ligands) lié par covalence à un support inerte qui constitue la phase fixe et son partenaire d'affinité en solution
- Le ligand est fixé sur une matrice (résine) directement ou indirectement à l'aide d'un bras fixateur (espaceur)
Le pH du milieu affecte la charge nette d'une protéine, influant ainsi sur son comportement. Découvrez comment le pH interagit avec les protéines et comment cela affecte leur éluution.
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