HPLC-scheidingstechniek

HPLC en Buffers: Inleiding

• HPLC is de meest gebruikte analytische scheidingstechniek.
• Het maakt gebruik van een vloeibare mobiele fase en een gepakte kolom om de componenten in een mengsel te scheiden.
• Er wordt hoge druk gebruikt om het oplosmiddel door een kolom te duwen.
• Het is populair vanwege zijn gevoeligheid en aanpasbaarheid voor nauwkeurige kwantitatieve bepaling.
• Het is geschikt voor het scheiden van niet-vluchtige stoffen en thermisch gevoelige stoffen.

RP-HPLC Methode

• Een ervaren analist zou een "application" zoeken die aansluit bij de beschikbare apparatuur op zijn laboratorium.
• Een student FLO zoekt meerdere betrouwbare en degelijk geschreven, recente wetenschappelijke artikelen over dit onderwerp en analyseert deze grondig.

Sibutramine

• Sibutramine, verkocht onder de namen Meridia in de VS en Reductil in Europa, is meestal beschikbaar als sibutramine hydrochloride monohydraat.
• Het wordt gebruikt voor de behandeling van obesitas.
• Sibutramine werkt via het centrale zenuwstelsel.
• Er zijn aanwijzingen dat het geneesmiddel het risico op het krijgen van een hartaanval vergroot.
• Het geneesmiddel is geclassificeerd als "Schedule IV controlled substance".
• De chemische formule is C17H26ClN en het molecuulgewicht is 279.84804 g/mol.

Sibutramine Detectie

• Er is een SPE-methode (Solid Phase Extraction) voor sibutramine detectie in menselijk plasma
• Meng 0.1 mL menselijk plasma met 2.0 mL 1% AcOH.
• Conditioneer met 3 mL MeOH en 3 mL H₂O
• Verdun plasma door de cartridge
• Was met 3 mL H₂O en 3 mL MeOH op manifold bij 5" Hg vacuum
• Elueer met 3 mL of 5% NH4OH in MeOH door zwaartekracht
• Laat onder stikstof verdampen (15 min op 50°C) en reconstitueer met 300 µL mobiele fase

European Medicines Agency

• Het European Medicines Agency (EMA) adviseert de schorsing van vergunningen voor het in de handel brengen van sibutramine.
• Het geneesmiddel voor gewichtsverlies wordt in verband gebracht met een verhoogd risico op cardiovasculaire gebeurtenissen.
• Het geneesmiddel moet van alle markten in de Europese Unie worden verwijderd.

Reverse-Phase HPLC Methode

• Een omgekeerde fase HPLC methode is ontwikkeld en gevalideerd voor de schatting van sibutramine hydrochloride monohydraat in capsule doseringsvormen.
• Een Phenyl Hypersil BDS C-18, 5 μm kolom wordt gebruikt met afmetingen 250 x 4.6 mm i.d. in isocratische modus.
• De mobiele fase bevat Acetonitrile: 50 mM Ammonium dihydrogen fosfaat (65:35, v/v; pH 6).
• De flow rate is 1.0 mL/min en het effluent wordt gemonitord op 225 nm.
• De retentie tijd van sibutramine hydrochloride monohydraat is 6.18 min.
• De ontwikkelde methode is gevalideerd volgens de ICH guideline Q2B, de detectielimiet is 0.09 μg/mL en kwantificatielimiet is 0.26 μg/mL.

Validering

• Herstel van sibutramine hydrochloride monohydraat in de capsule preparaten vallen onder 99.87-100.45%.
• Voorgestelde methode kan worden toegepast voor de kwantitatieve bepaling van sibutramine hydrochloride monohydraat in capsule doseringsvormen.
• Het kan gebruikt worden om samples te analyseren tijdens stabiliteitstesten.
• Sleutelwoorden: Sibutramine hydrochloride monohydraat, RP-HPLC, Validatie, Stabiliteit testen.

Monoamine Re-uptake Inhibitor

• Sibutramine is een monoamine re-uptake inhibitor die wordt gebruikt voor de behandeling van obesitas.
• Een snelle, gevoelige en economische HPLC-methode is ontwikkeld en gevalideerd voor de analyse van sibutramine HCl in farmaceutische capsules.
• HPLC analyses worden uitgevoerd met met natriumfosfaatbuffer (pH 2.5) en methanol (30:70, v/v), flow rate op 1.0 mL/min en kolom temperatuur op 40 C.
• UV detectie golflengte is 225 nm en injectievolume is 20 μL.
• De valideringsparameters zijn overeenkomstig met FDA en ICH specificaties.
• De detectie en kwantificering limieten zijn 0.666 en 2.018 mg/L respectievelijk.