Extendido Sanguíneo: Técnicas y Consideraciones

Extensión Sanguínea

• La muestra debe ser capilar o venosa, pero se prefiere sangre venosa sin aditivo o con EDTA.
• La tinción debe realizarse dentro de las 3 horas del procedimiento.
• La gota de sangre debe ser de 10-12 μL y se utiliza un ángulo de 45º.
• El ángulo y la velocidad del extendido pueden afectar la apariencia del frotis.

Artefactos

• Vacuolización excesiva del citoplasma en monocitos.
• Alteración de la segmentación nuclear.
• Crenación de eritrocitos.
• Microburbujas.

Recuento Reticulocitario

• Un reticulocito es un estadio previo a la maduración total del eritrocito.
• Se utilizan fluorocromos como naranja de tiazol y auramina en el método automatizado.
• La policromatofilia se informa sobre un 4%.
• El intervalo de referencia reticulocitario es del 0.5 a 1.5% en adultos.

Método de Reticulocitos

• Método manual: tinción supravital, con 20% de variación en lectores experimentados.
• Método automatizado: fluorocromo, con 8% de variación y se cuentan entre 30.000 a 50.000 células.

Velocidad de Hemosedimentación (VHS)

• La VHS se ve afectada por factores como VCM, diferencia de densidad, viscosidad plasmática y temperatura.
• La etapa de hemoaglutinación depende de los tres primeros factores.
• La VHS se ve afectada por condiciones fisiológicas como embarazo, envejecimiento y crecimiento.
• La VHS se ve afectada por factores laboratoriales como la verticalidad de la pipeta, temperatura y dilución.

Fragilidad Osmótica Eritrocitaria (FOE)

• La FOE se mide mediante una solución stock de pH 7.4 y concentración del 10% de NaCl.
• La prueba se realiza con la muestra recién obtenida y se lee en espectrofotómetro a 540nm.

Hemoglobina Fetal

• El método de Singer se basa en la desnaturalización proteica de la hemoglobina a través de la mezcla con KOH.
• La muestra debe ser sangre venosa anticoagulada con EDTA-K2.
• La Hb fetal se calcula mediante la dilución de la Hb total y la Hb fetal.
• La Hb fetal en recién nacido es del 55-88%.

Preparación de la muestra de sangre

• La muestra de sangre debe ser obtenida dentro de las 3 horas del procedimiento
• La muestra ideal es sangre venosa sin aditivo, pero si no es posible, puede ser sangre venosa anticoagulada con EDTA
• La heparina no es adecuada para frotis porque favorece la agregación plaquetaria y aumenta la basofilia del frotis

Extensión de la sangre

• La gota de sangre debe ser de 10 a 12 uL
• Se utiliza un ángulo de 45º para la extensión
• La extensión debe cubrir 2/4 del portaobjeto
• Un ángulo mayor a 45º produce un frotis grueso y corto, mientras que un ángulo menor a 45º produce un frotis largo y delgado
• Si se utiliza muy alta velocidad, el frotis queda grueso y corto, mientras que si se utiliza muy baja velocidad, el frotis queda largo y delgado
• Para muestras anémicas o con HTO bajo, se debe aumentar el ángulo o subir la velocidad
• Para muestras con poliglobulia, se debe disminuir el ángulo o velocidad

Artefactos y soluciones

• Si el frotis es delgado, hay una sobreestimación de monocitos y neutrófilos, mientras que si es muy grueso, hay una sobreestimación de linfocitos
• Lipemia se soluciona centrifugando la muestra, eliminando la grasa y reemplazándola por un diluyente isotónico
• Rouleaux se produce cuando la VHS está muy alta, lo que corresponde a la formación de pilas de moneda de eritrocitos
• Crioaglutininas se producen cuando hay anticuerpos que aglutinan a baja temperatura, haciendo que los GR se "coagulen" en ciertas partes de la muestra

Tinción de MGG

• La primera etapa es con May Grunwald para precipitar y fijar la muestra
• La segunda etapa utiliza un buffer de pH 7.2 a 7.4 para disolver las células y teñir el May Grunwald
• La tercera etapa utiliza Giemsa diluido, que tiñe la cromatina del núcleo y sustancias azurófilas

Etapas finales

• La solución buffer debe tener un pH de 6.8 a 7.2 para evitar precipitados
• Se agrega glicerina al reactivo Giemsa para evitar precipitados
• El secado del extendido debe ser de al menos 2 horas
• La limpieza de los portaobjetos se realiza con eter y alcohol 1:1