Enzimas de Dedo de Zinco Nucleases

As enzimas de dedo de zinco nucleases foram desenvolvidas a partir da compreensão de como as enzimas de restrição cortam sequências específicas de DNA.
As enzimas de restrição tipo 2, como a enzima FokI, têm domínios de reconhecimento de DNA separados dos domínios de clivagem, permitindo que o domínio de clivagem seja utilizado com diferentes domínios de reconhecimento de DNA.
Os domínios de dedo de zinco são comuns em genes de mamíferos, com cerca de 1500 genes humanos que contêm motivos de dedo de zinco.
Os domínios de dedo de zinco têm uma estrutura de Beta-Beta-Alpha e seguem um padrão comum de aminoácidos, o que permite prever quais bases de DNA eles irão se ligar.

As enzimas de dedo de zinco nucleases são compostas por um array de 3-4 dedos de zinco, cada um se ligando a 3 bases de DNA.
O domínio de clivagem é adicionado ao final dos dedos de zinco, formando uma enzima que corta 18 bases de DNA.
A especificidade da enzima é aumentada pela necessidade de dois protéicos, cada um com 12 bases de especificidade, para formar um complexo funcional.

O domínio de clivagem não tem especificidade de sequência, permitindo que a enzima corte qualquer sequência de DNA.
A especificidade da enzima é aumentada pela necessidade de dois protéicos, cada um com 12 bases de especificidade.
Mutantes do domínio de clivagem FokI foram desenvolvidos para reduzir a atividade de corte off-target.

A montagem de arrays de dedo de zinco é um desafio, pois a maioria dos domínios de dedo de zinco não funcionam bem quando montados juntos.
A empresa Sangamo desenvolveu uma plataforma robótica para montar arrays de dedo de zinco funcionais.
As enzimas de dedo de zinco nucleases têm sido utilizadas em diversas aplicações de edição de genoma e são atualmente utilizadas em mais de 20 terapias genéticas em diferentes estágios de ensaios clínicos.

As enzimas de dedo de zinco nucleases foram desenvolvidas com base na compreensão de como as enzimas de restrição cortam sequências específicas de DNA.
As enzimas de restrição tipo 2, como a enzima FokI, têm domínios de reconhecimento de DNA separados dos domínios de clivagem.
Cerca de 1500 genes humanos contêm motivos de dedo de zinco.
Os domínios de dedo de zinco têm uma estrutura de Beta-Beta-Alpha e seguem um padrão comum de aminoácidos.

As enzimas de dedo de zinco nucleases são compostas por um array de 3-4 dedos de zinco, cada um se ligando a 3 bases de DNA.
O domínio de clivagem é adicionado ao final dos dedos de zinco, formando uma enzima que corta 18 bases de DNA.
A especificidade da enzima é aumentada pela necessidade de dois protéicos, cada um com 12 bases de especificidade, para formar um complexo funcional.

O domínio de clivagem não tem especificidade de sequência, permitindo que a enzima corte qualquer sequência de DNA.
A especificidade da enzima é aumentada pela necessidade de dois protéicos, cada um com 12 bases de especificidade.
Mutantes do domínio de clivagem FokI foram desenvolvidos para reduzir a atividade de corte off-target.

A montagem de arrays de dedo de zinco é um desafio, pois a maioria dos domínios de dedo de zinco não funcionam bem quando montados juntos.
A empresa Sangamo desenvolveu uma plataforma robótica para montar arrays de dedo de zinco funcionais.
As enzimas de dedo de zinco nucleases têm sido utilizadas em diversas aplicações de edição de genoma e são atualmente utilizadas em mais de 20 terapias genéticas em diferentes estágios de ensaios clínicos.

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