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Questions and Answers
Qual è il ruolo principale della nucleasi nel sistema di editing genetico?
Qual è il ruolo principale della nucleasi nel sistema di editing genetico?
- Generare un taglio a doppio filamento nel DNA (correct)
- Attivare fattori di trascrizione
- Riconoscere sequenze specifiche nel DNA
- Riparare il DNA danneggiato
Quale delle seguenti affermazioni riguardo i Fattori di Trascrizione e le Zinc Finger è corretta?
Quale delle seguenti affermazioni riguardo i Fattori di Trascrizione e le Zinc Finger è corretta?
- Possono legarsi solo a base singola nel DNA
- Richiedono due moduli per funzionare come dimeri (correct)
- Riconoscono sequenze a caso nel genoma
- Non possono essere progettati per sequenze specifiche
Qual è il requisito fondamentale affinché l'RNA guida possa funzionare con Cas9?
Qual è il requisito fondamentale affinché l'RNA guida possa funzionare con Cas9?
- Deve essere lungo almeno 50 nucleotidi
- Deve legarsi a una sequenza PAM (correct)
- Deve riconoscere sequenze a due vie
- Deve trovarsi dopo il sito di taglio
Quale tecnologia di editing genetico è considerata la più semplice secondo il contenuto?
Quale tecnologia di editing genetico è considerata la più semplice secondo il contenuto?
Quale metodo di riparazione del DNA può essere attivato come risposta al DSB generato dalla nucleasi?
Quale metodo di riparazione del DNA può essere attivato come risposta al DSB generato dalla nucleasi?
Quale di queste affermazioni sui TALEN è vera?
Quale di queste affermazioni sui TALEN è vera?
Cosa succede quando si utilizza dCas9 nel sistema CRISPR?
Cosa succede quando si utilizza dCas9 nel sistema CRISPR?
Che tipo di mutazione può essere indotta dal sistema utilizzando la citidina deaminasi associata a dCas9?
Che tipo di mutazione può essere indotta dal sistema utilizzando la citidina deaminasi associata a dCas9?
Qual è la funzione principale della regione di nucleazione nei miRNA?
Qual è la funzione principale della regione di nucleazione nei miRNA?
Cosa implica la difficoltà di identificare i bersagli dei miRNA dal punto di vista bioinformatico?
Cosa implica la difficoltà di identificare i bersagli dei miRNA dal punto di vista bioinformatico?
Cosa viene prodotto quando l'introne di un gene viene tagliato dallo spliceosoma?
Cosa viene prodotto quando l'introne di un gene viene tagliato dallo spliceosoma?
Qual è una delle caratteristiche dei mirtron?
Qual è una delle caratteristiche dei mirtron?
Qual è una conseguenza di un appaiamento non perfetto tra miRNA e bersaglio?
Qual è una conseguenza di un appaiamento non perfetto tra miRNA e bersaglio?
Quanti nucleotidi di appaiamento quasi perfetto ci sono nella regione di nucleazione?
Quanti nucleotidi di appaiamento quasi perfetto ci sono nella regione di nucleazione?
Cosa caratterizza la variabilità dei miRNA nelle diverse cellule?
Cosa caratterizza la variabilità dei miRNA nelle diverse cellule?
Perché è difficile per i miRNA trovare siti bersaglio nel genoma?
Perché è difficile per i miRNA trovare siti bersaglio nel genoma?
Quale affermazione sui miRNA è corretta?
Quale affermazione sui miRNA è corretta?
Cosa rappresenta un'appaiamento non perfetto tra miRNA e bersaglio?
Cosa rappresenta un'appaiamento non perfetto tra miRNA e bersaglio?
Qual è la principale differenza tra polimorfismi e mutazioni nel contesto del DNA?
Qual è la principale differenza tra polimorfismi e mutazioni nel contesto del DNA?
Che tipo di sequenze rappresentano i microsatelliti?
Che tipo di sequenze rappresentano i microsatelliti?
Qual è un potenziale motivo per cui i minisatelliti sono considerati 'punti caldi' nella ricombinazione omologa?
Qual è un potenziale motivo per cui i minisatelliti sono considerati 'punti caldi' nella ricombinazione omologa?
Come possono apparire le ripetizioni durante il crossing over ineguale nei gameti?
Come possono apparire le ripetizioni durante il crossing over ineguale nei gameti?
Quale affermazione riguardo ai polimorfismi di singoli nucleotidi è vera?
Quale affermazione riguardo ai polimorfismi di singoli nucleotidi è vera?
Qual è la principale caratteristica di una genoteca genomica?
Qual è la principale caratteristica di una genoteca genomica?
Quale procedimento è necessario per generare una genoteca di cDNA?
Quale procedimento è necessario per generare una genoteca di cDNA?
Qual è il ruolo dei plasmidi nella creazione di una genoteca genomica?
Qual è il ruolo dei plasmidi nella creazione di una genoteca genomica?
Qual è uno degli scopi principali di una genoteca di espressione?
Qual è uno degli scopi principali di una genoteca di espressione?
Cosa rappresenta il termine 'trasferimenti funzionali' in riferimento alle genoteche?
Cosa rappresenta il termine 'trasferimenti funzionali' in riferimento alle genoteche?
Qual è la dimensione massima di DNA che possono portare i BAC?
Qual è la dimensione massima di DNA che possono portare i BAC?
Qual è la causa principale della varietà di plasmidi nei batteri quando si crea una genoteca?
Qual è la causa principale della varietà di plasmidi nei batteri quando si crea una genoteca?
Qual è la funzione principale dei batteriofagi nei BAC?
Qual è la funzione principale dei batteriofagi nei BAC?
Quale tecnologia è fondamentale per l'analisi delle sequenze nella genoteca?
Quale tecnologia è fondamentale per l'analisi delle sequenze nella genoteca?
Quale vettore permette di accettare inserti di circa 45 kbp?
Quale vettore permette di accettare inserti di circa 45 kbp?
In che modo l'ampicillina è utilizzata durante la selezione delle genoteche?
In che modo l'ampicillina è utilizzata durante la selezione delle genoteche?
Qual è uno dei problemi principali nella progettazione dei primers per la PCR multiplex?
Qual è uno dei problemi principali nella progettazione dei primers per la PCR multiplex?
Qual è la principale differenza tra le genoteche di cDNA e quelle genomiche?
Qual è la principale differenza tra le genoteche di cDNA e quelle genomiche?
Qual è la dimensione massima di DNA che un HAC può accettare?
Qual è la dimensione massima di DNA che un HAC può accettare?
Quale tipo di genoteca è più adatta per studiare l'espressione genica?
Quale tipo di genoteca è più adatta per studiare l'espressione genica?
Cosa è necessario per distinguere i diversi batteri patogeni durante la PCR?
Cosa è necessario per distinguere i diversi batteri patogeni durante la PCR?
Quale dei seguenti vettori ha un basso numero di copie ed è facile da maneggiare?
Quale dei seguenti vettori ha un basso numero di copie ed è facile da maneggiare?
Quale delle seguenti affermazioni sui plasmidi è vera?
Quale delle seguenti affermazioni sui plasmidi è vera?
Quale delle seguenti opzioni è uno dei principali vantaggi dei BAC?
Quale delle seguenti opzioni è uno dei principali vantaggi dei BAC?
Quale delle seguenti non è una strategia comunemente utilizzata nella PCR multiplex?
Quale delle seguenti non è una strategia comunemente utilizzata nella PCR multiplex?
Study Notes
Genomica e Editazione Genetica
- Creazione di un unico RNA guida per semplificare la modifica genica, associato all'enzima CAS9.
- Sistemi CRISPR non sono unici; esistono precedenti metodi di editing e riparazione.
- Necessità fondamentale di sequenza di riconoscimento e nucleasi che generi un taglio a doppio filamento (DSB) nel DNA.
- Attivazione di sistemi di riparazione del DNA (NHEJ o HDR) dopo il taglio.
Fattori di Trascrizione
- ZINC FINGER: moduli proteici con eliche alfa e beta per riconoscere sequenze specifiche; utilizzano enzimi di restrizione come Fok1.
- TALEN: derivati vegetali, riconoscono il DNA base per base, richiamando Fok1.
- CRISPR: più semplice, utilizza RNA guida che deve essere posizionato prima della sequenza PAM, caratteristica di taglio di CAS9.
Meccanismo di Taglio e Riparazione
- Riconoscimento PAM essenziale per la specificità del taglio.
- RNA guida non associato a tutte le sequenze, ma solo a quelle precedenti la PAM.
- Possibilità modifiche di singole basi nel genoma usando dCas9 e citidina deaminasi.
miRNA e Identificazione dei Siti Bersaglio
- miRNA spesso non si appaiano perfettamente; nucleazione possibile grazie alla seed region.
- Difficoltà nell'identificazione bioinformatica dei bersagli dei miRNA a causa della variabilità nella complementarità .
- I mirtron sono miRNA derivati da introni, generati tramite taglio dello spliceosoma.
Genoteca e Tipi di Genoteche
- Genoteca: collezione disordinata di cloni di microorganismi con segmenti di genome o trascrittoma.
- Tipologie includono genoteche genomiche, di cDNA, di espressione e di clonaggi funzionali.
- Creazione di genoteche di trascrittomi tramite la generazione di cDNA e clonazione.
Utilizzo dei Vettori
- Vari tipi di vettori per clonaggio: plasmidi, fagi lambda, cosmidi, BACs e YACs.
- Bacillus artificial chromosomes (BAC) possono contenere frammenti fino a 300 kb e sono utilizzati per grandi inserti nei progetti genomici.
- YACs e HACs consentono l'inserimento di frammenti ancor più grandi, sebbene più complicati da maneggiare.
Tecniche di PCR e Polimorfismi
- PCR multiplex: amplificazione di frammenti da diversi patogeni simultaneamente usando primers specifici.
- Progetto di primers con temperature di melting simili per garantire un’amplificazione efficace.
- Polimorfismi del DNA: variazioni di sequenza frequenti nella popolazione, distinte dalle mutazioni, raramente implicate in patologie.
DNA Ripetuto: Minisatelliti e Microsatelliti
- Minisatelliti: segmenti di DNA ripetuti in tandem, lunghezza fino a 20 kb; ruolo nella ricombinazione omologa.
- Microsatelliti: sequenze corte ripetute, da 2 a 4 nucleotidi ripetuti molte volte, importanti nei test di paternità e varianti patologiche.
- Variabilità delle ripetizioni nei gameti, causata da crossing over irregolari nel processo di meiosi.
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Description
Questo quiz esplora il sistema di editing genomico CRISPR e il ruolo delle nucleasi nella modifica del DNA. Saranno trattati i principi fondamentali della modifica del genoma, incluso il riconoscimento del locus e i sistemi di riparazione del DNA. Testa le tue conoscenze su questo argomento innovativo!
