Dosagem de Amilase

Dosagem de Amilase

• A amilase, principalmente de origem pancreática e salivar, está normalmente presente no sangue e na urina em pequenas quantidades.
• Eleva-se rapidamente no plasma após o início dos sintomas de pancreatite aguda, com um aumento da amilase urinária.
• Valores aumentados também podem ser observados no infarto mesentérico, úlcera gástrica perfurada, carcinoma da cabeça do pâncreas, caxumba, insuficiência renal e acidose diabética.
• Níveis plasmáticos diminuídos podem ser observados na hepatite, cirrose hepática, toxemia de gravidez, eclampsia e carcinoma pancreático.
• O soro obtido deve estar livre de hemólise, e o plasma, colhido com heparina.
• Outros anticoagulantes como EDTA, citrato e oxalato inibem a atividade da amilase.
• O soro e o plasma podem ser armazenados por até 7 dias entre 15 e 30°C, 2 meses entre 2 e 8°C, ou 1 ano a -20°C.
• A urina pode ser armazenada por até 2 dias entre 15 e 30°C, 10 dias entre 2 e 8°C, ou 3 semanas a -20°C.
• A coleta deve ocorrer em um intervalo de 2 a 24 horas.
• A metodologia de Caraway Modificado - Cinética de tempo fixo é utilizada.
• A amostra é incubada com um substrato de amido, e a adição de iodo ao amido não hidrolisado resulta em uma coloração azul que diminui proporcionalmente à atividade enzimática.
• Para realizar o teste, marque dois tubos de ensaio: um para o controle (C) e outro para a amostra (A).
• Adicione 0,5 mL de reagente N° 1 a ambos os tubos e coloque-os em banho-maria a 37°C por 2 minutos.
• Adicione 10 µL da amostra ao tubo da amostra (A).
• Homogeneíze e incube a 37°C por 7 minutos e 30 segundos (cronometrados).
• Adicione 0,5 mL de reagente de trabalho e 4,0 mL de água destilada ou deionizada a ambos os tubos.
• Homogeneíze bem e determine as absorbâncias do controle e da amostra em 660 nm (620 a 700 nm), zerando o aparelho com água destilada ou deionizada.
• A cor é estável por 30 minutos.
• Uma unidade de enzima é a quantidade que hidrolisa totalmente 10 mg de amido em 30 minutos a 37°C.
• A reação é linear até 400 U/dL; para valores maiores, a amostra deve ser diluída com cloreto de sódio 0,85% e o resultado multiplicado pelo fator de diluição.
• Os valores de referência para o método são 60 a 160 U/dL para o soro e 50 a 140 U/h para a urina.
• É importante controlar o tempo e a temperatura de incubação, pois uma diferença de 1 minuto no tempo de incubação pode acarretar um erro de 13% nos resultados.
• Amostras com hemólise podem produzir resultados falsamente diminuídos.
• Anticoagulantes como EDTA, citrato e oxalato inibem a atividade da amilase.
• Valores de bilirrubina de até 20 mg/dL e hiperlipemia (triglicerídeos de até 1500 mg/dL) não interferem no teste.

Dosagem de Lipase

• A lipase pancreática é uma enzima digestiva produzida principalmente pelas células acinares do pâncreas exócrino.
• Tem o papel fisiológico de hidrolisar triglicerídeos com ácidos graxos de cadeias longas no intestino delgado (lipólise).
• Sua avaliação é essencial no diagnóstico das patologias pancreáticas.
• A lipase se eleva nas primeiras 8 horas após o início da agressão pancreática, atingindo valores mais altos em 24 horas e mantendo-se elevada em torno de 7 a 14 dias.
• Níveis elevados por mais de duas semanas podem sugerir complicações como abscessos e pseudocistos.
• Níveis séricos de lipase não se alteram em parotidites agudas, auxiliando no diagnóstico diferencial.
• A lipase é um marcador mais específico de doença pancreática aguda do que a amilase.
• Seus níveis estão aumentados em pacientes com pancreatite aguda e recorrente, abscesso ou pseudocisto pancreático, trauma, carcinoma de pâncreas, obstrução dos ductos pancreáticos e no uso de fármacos (opiáceos).
• Também está aumentada na maior parte das condições inflamatórias da cavidade abdominal, doenças do trato biliar, abscessos abdominais e insuficiência renal aguda e crônica (com menor frequência do que a amilase).
• A lipase é filtrada pelos glomérulos devido ao seu baixo peso molecular e, em condições normais, é totalmente reabsorvida pelos túbulos proximais, estando ausente na urina de pacientes normais.
• Em distúrbios renais que cursam com alteração da capacidade de reabsorção tubular, a lipase pode ser detectada na urina, numa relação inversa com o clearance da creatinina.
• Para a amostra, usar soro ou plasma (heparina), pois amostras com EDTA, citrato ou fluoreto podem produzir resultados diminuídos devido à inibição da atividade da lipase.
• A atividade da lipase na amostra é estável por 7 dias entre 2-25°C e 1 ano a -20°C.
• O material deve ser congelado em recipiente hermeticamente fechado ("criotubos") para evitar evaporação, evitando congelamentos e descongelamentos repetidos.
• Amostras descongeladas devem ser bem homogeneizadas antes da utilização, sem usar vórtex ou similar, e não devem apresentar sinais de contaminação microbiana.
• O substrato cromogênico 1-2-o-dilauril-rac-glicero-3-ácido glutárico (6-metilresorufina)-éster é clivado em meio alcalino pela lipase, formando ácido glutárico e metilresorufina (cor vermelha).
• A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à atividade da lipase na amostra.
• Ajustar a temperatura do fotômetro para 37°C e o comprimento de onda em 570 nm (550-600).
• Acertar o zero com água deionizada.
• Em um tubo rotulado Teste ou Calibrador, pipetar 0,70 mL do Reagente 1.
• Adicionar 0,010 mL de amostra ou calibrador.
• Adicionar 0,40 mL do Reagente 2, homogeneizar, transferir imediatamente para a cubeta termostatizada e disparar simultaneamente o cronômetro.
• Medir as absorbâncias aos 90 e 180 segundos.
• Concentrações de bilirrubina total até 60 mg/dL, hemoglobina até 500 mg/dL e triglicerídeos até 2000 mg/dL não interferem significativamente na reação.
• Amostras com bilirrubina, hemoglobina e triglicerídeos em concentrações maiores devem ser diluídas em NaCl 150 mmol/L (0,85%). e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.
• A reação é linear entre 3,0 e 300 U/L. Para valores maiores que 300 U/L, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%) e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluição.
• Os valores de referência variam conforme a idade:
  • Menores de 1 ano: 0-29 U/L
  • 1 a 12 anos: 10-37 U/L
  • 13 a 18 anos: 11-46 U/L
  • Maiores de 18 anos: 13-60 U/L
• Conversão: Unidades convencionais (U/L) x 0,0167 = Unidades SI (µkat/L)

Caso Clínico

• Paciente: M.O.C., sexo feminino, 40 anos.
• Queixa principal: Dor abdominal há 8 horas.
• Histórico: A paciente relata desconforto abdominal de 48 horas, que se intensificou nas últimas 8 horas.
• Sintomas associados: Vômitos (2 episódios), náuseas e sudorese.
• Alívio: Utilizou dipirona sem melhora.
• Hábitos: Alimentação rica em alimentos gordurosos e de baixo valor nutricional, sedentarismo.
• Histórico negativo: Nega febre, perda de peso, tabagismo e outras patologias.
• Leucograma: 17.000 (VR: 5.000 – 11.000).
• Neutrófilos: 5% de bastões (VR: 3-5%) / Segmentados: 45% (VR: 45-70%).
• Plaquetas: 450.000/mm³ (VR: 150.000 – 400.000/mm³).
• Amilase: 250 U/L (VR: até 100 U/L).
• Lipase: 100 U/L (VR: abaixo de 35 U/L).
• Glicemia: 380 mg/dL (VR 70 a 99 mg/dL).
• Na: 130 mEq/L (135 a 1145 mEq/L).
• K: 3,2 mEq/L (3,5 a 4,3 mEq/L).