DNA Sequencing Techniques

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29 Questions

Perché le reazioni di sequenza e di incorporazione del nucleotide terminatore avvengono in vitro?

Perché richiedono la presenza di enzimi e reazioni chimiche specifiche

Cosa rappresenta l'ione sphere particle?

Un biglia ricoperta da tante copie del frammento di interesse

Quale è il resultado della separazione dei frammenti da sequenziare?

La separazione dei frammenti da sequenziare

Perché non si forma l'ione sphere particle se non c'è la biglia?

Perché la biglia non è ricoperta da frammenti di DNA

Cosa avviene dopo la rilevazione del segnale?

Il blocco e il fluorocromo vengono allontanati

Cosa si ottiene dopo la fase successiva?

L'arricchimento di particelle ricoperte dallo stesso frammento o da due frammenti diversi di DNA

Come vengono fissate le molecole circolari SMRT BELL?

Sul fondo del pozzetto del chip

Che tipo di sequenze vengono definite HiFi?

Sequenze ad alta fedeltà

Qual è il vantaggio delle molecole circolari?

Permettono alla polimerasi di girare più volte

Che cosa succede alle sequenze adattatrici durante il metodo bioinformatico?

Vengono completamente eliminate

Cosa accade quando il gruppo OH del nucleotide già attaccato reagisce col gruppo fosfato?

Il legame fosfodiesterico si forma e il pirofosfato si allontana

Che cosa rappresentano le sequenze HiFi?

Sequenze ad alta fedeltà

Cosa porta con sé il pirofosfato quando si allontana?

Il fluorocromo

Quale è la differenza principale tra le piattaforme di nuova generazione?

La capacità di dati che possono generare

Quale è il limite principale delle prime piattaforme di sequenziamento?

Lunghezza delle sequenze limitata

Cosa può essere sequenziato con questa piattaforma?

Il genoma, l'RNA, sequenze mirate o sequenze di microrganismi

Cosa si può fare con le sequenze ottenute con questa piattaforma?

Fare la metagenomica o analizzare sequenze mirate

Cos'è un microarray a oligonucleotidi ad alta densità?

Un tipo di microarray in cui vengono sintetizzati direttamente oligonucleotidi sul supporto solido

Come funziona la sintesi fotolitografica?

Attraverso l'uso di raggi UV per rimuovere i blocchi fotolabili

Cosa sono i linker sulla superficie solida dell'array?

I gruppi che legano il blocchi fotolabili ai nucleotidi

Quale è il vantaggio dell'uso di oligonucleotidi ad alta densità?

Permette di studiare più geni contemporaneamente

Cosa rappresenta la maschera fotolitografica?

La strumentazione utilizzata per indirizzare la luce sulla superficie solida dell'array

Quanti geni possono essere studiati contemporaneamente con gli oligonucleotidi ad alta densità?

Centinaia di geni

Perché può rimanere una contaminazione delle sequenze intergeniche?

Perché non si può rimuovere completamente il genomico con il trattamento con la DNasi

Cosa accade arricchendo in poly-A?

Si perde il genomico e si concentra sui geni espressi

Qual è il principio della cattura a cDNA?

Utilizzare delle sonde specifiche per i geni d'interesse

Quale è il limite della cattura a cDNA?

Non riuscire a sequenziare tutto quello che c'è nella cellula

Qual è il primo passo nella procedura di arricchimento?

Estrae l'RNA dalle cellule

Che cosa si utilizza per la cattura a cDNA?

Sonde specifiche per i geni d'interesse

Learn about the advanced techniques used in DNA sequencing, including the differences between third and fourth generation sequencing platforms. Understand how sequencing reactions and nucleotide incorporation occur in vitro and how fragments are loaded into capillaries.

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