Clonaggio molecolare: Vettori, PCR e RNAi

<p>Utilizzo di Taq polimerasi per qualche ciclo per aggiungere adenine al terminale 3’ del frammento amplificato con proofreading polimerasi. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>La sua tendenza ad aggiungere una adenina al 3' dei prodotti di PCR. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Permette la clonazione senza la necessità di primer con sequenze specifiche di 25 bp, semplificando il processo di inserimento genico. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Utilizza piccoli RNA a doppio filamento per indurre la degradazione dell'mRNA o bloccarne la traduzione. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Per introdurre siti di restrizione compatibili con il vettore di clonaggio. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Il clonaggio tramite vettore T è più rapido e non richiede l'uso di enzimi di restrizione. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>La regione del gene di interesse che, una volta trascritta in RNA a doppio filamento, innesca l'RNA interference. (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Serve come vettore intermedio per la clonazione iniziale del frammento del gene che si vuole silenziare. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Che l'inserto viene inserito nel vettore in un orientamento predefinito e controllato. (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Viene trascritto da un unico promotore che trascrive il frammento del gene sia in senso sia in antisenso. (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Agisce come gene killer nel donor vector, interferendo con l'attività della DNA girasi e prevenendo la crescita di cellule non ricombinanti. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Generazione di un expression clone contenente il gene di interesse e un by-product, con successiva formazione dei siti attB1 e attP1. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Consentendo l'amplificazione dell'intera regione clonata mediante PCR. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Per neutralizzare l'effetto tossico del gene ccdB, permettendo l'amplificazione del plasmide. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Le colonie batteriche perdono la resistenza al cloramfenicolo (CmR). (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Prevengono la trascrizione di geni indesiderati a valle del gene di interesse. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>La numerazione specifica dei siti att, che limita le combinazioni possibili (es. attL1 con attR1). (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Permette di effettuare una selezione più precisa delle cellule trasformate con il plasmide corretto. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Sfrutta l'attività ligasica della topoisomerasi I, eliminando la necessità di ligasi esterne. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>La sua capacità di aggiungere una 'A' extra alle estremità 3' dei prodotti PCR. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>L'alta frequenza di errori introdotti dalla DNA polimerasi utilizzata durante la PCR. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Lo Zero Blunt TOPO vector è progettato per clonare frammenti con estremità piatte, prodotti da PCR proofreading. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Non permettono il clonaggio direzionale dell'inserto. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Un vettore che consente un clonaggio direzionale veloce di prodotti PCR blunt-end in vettori di espressione. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Incorporando sequenze specifiche nel primer utilizzato per la PCR, complementari a regioni definite del vettore. (A)</p> Signup and view all the answers

<p>5 minuti a temperatura ambiente. (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Le cellule ricombinanti appaiono bianche perché il gene lacZ è interrotto e non producono 𝛃-galattosidasi (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Induce l'espressione del gene lacZ, assicurando che, se presente, venga trascritto e tradotto (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Il clonaggio blunt end ha un'efficienza inferiore perché il frammento può inserirsi con orientamento errato (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Il frammento inserito ha un orientamento errato (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Per prevenire la ricircolarizzazione del vettore (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Il plasmide si è richiuso su se stesso, impedendo l'inserimento del gene (A)</p> Signup and view all the answers

<p>Colonia 1 (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Il clonaggio blunt end è più versatile ma meno efficiente del clonaggio sticky end. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Suddivisione in due filamenti → Degradazione di un filamento di DNA → Appaiamento del filamento non degradato con la sequenza complementare → Blocco della trascrizione (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Per studiare gli effetti della mutazione sulla funzione della proteina codificata dal gene. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Studio della funzione del frammento di DNA clonato. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Vettori per l’espressione di proteine che massimizzano la sintesi proteica. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Analizzare l’interazione tra DNA e proteine utilizzando il DNA clonato. (D)</p> Signup and view all the answers

<p>Vettori che favoriscono la solubilizzazione delle proteine espresse. (B)</p> Signup and view all the answers

<p>Costruire una libreria genomica e selezionare il clone desiderato. (C)</p> Signup and view all the answers

<p>Un vettore che promuove l’esportazione della proteina per indirizzarla al periplasma o al mezzo di coltura. (A)</p> Signup and view all the answers

Il gene responsabile della produzione della β-galattosidasi.

Substrato analogo al lattosio usato per lo screening.

Cellule in cui il gene laZ è stato interrotto.

Metodo di clonaggio senza limitazioni di sequenza, usando frammenti blunt.

Tecnica per amplificare un frammento di DNA desiderato.

Rimozione del gruppo fosfato per prevenire la ricircolarizzazione del vettore.

Frammento amplificato della dimensione prevista tramite PCR.

Riunificazione del vettore che può verificarsi dopo il taglio.

Segmenti di DNA che iniziano con nucleotidi extra ai lati 5’ per i siti di restrizione compatibili.

Tecnica per moltiplicare un frammento di DNA mediante cicli di denaturazione e annealing.

Processo per tagliare il prodotto di PCR usando enzimi di restrizione.

Tecnica di clonaggio che utilizza un vettore con T sporgente per legare un frammento PCR con A terminale.

Enzima che amplifica DNA e aggiunge un’adenina all'estremità 3’ dei filamenti.

Processo indesiderato in cui un vettore si richiude su sé stesso.

Enzimi che correggono errori durante l'amplificazione del DNA.

Aggiunta di adenine ai terminali 3’ di un frammento amplificato per facilitare il clonaggio.

Fenomeno in cui l'siRNA spegne l'espressione genica.

Enzima che taglia l'RNA a doppio filamento in small RNA.

Vettore in cui viene clonato il frammento per RNAi.

Vettore finale dove il frammento viene inserito dopo pENTRY.

Sequenze che avviano l'interferenza dell'RNA.

Processo di duplicazione di sequenze specifiche di DNA per studi ulteriori.

Studiare gli effetti e le interazioni di un frammento DNA nell'organismo.

Strumenti utilizzati per trasportare e replicare DNA.

Sequenze di nucleotidi usate per identificare specifiche molecole di DNA o RNA.

Processo in cui il DNA viene copiato in RNA.

Vettori specializzati per funzioni specifiche, come purificazione proteica.

Creazione di alta quantità di RNA o proteine da un gene.

Studio di come le proteine interagiscono con il DNA.

Vettore basato sulla creazione di T per legarsi ad A in un frammento di DNA.

Enzima che aggiunge un'A extra al terminale 3‘ dell'inserto durante la PCR.

La topoisomerasi I agisce anche come ligasi, unendo frammenti di DNA senza necessità di ligasi.

Non è un clonaggio direzionale e Taq non ha proofreading, causando potenziali errori.

Vettore che termina con estremità flat senza A, permette l'uso di PCR proofreading.

Vettore direzionale che consente clonaggio unidirezionale con ligazione veloce.

Metodo di clonaggio che utilizza estremità coesive per legarsi a frammenti di DNA.

Metodo di clonaggio che usa estremità piatte senza coesività.

Ricombinazione tra i siti attB e attP per creare un entry clone.

Vettore contenente estremità attP e gene ccdB per la ricombinazione.

Gene killer che blocca la DNA girasi causando morte cellulare.

Clone generato dopo ricombinazione BP, contiene il gene di interesse.

Ricombinazione tra i siti attL e attR per creare un expression clone.

Siti di ricombinazione annotati, limitano le combinazioni.

Utilizzo di antibiotici come Kanamicina e Zeocin per selezionare cellule trasformate.

Processo di replicazione di plasmidi in ceppi di E.coli resistenti a ccdB.