Instrumentele DEEL 4

Het scheiden van mengsels in hun verschillende componenten, gevolgd door een kwalitatieve of kwantitatieve bepaling.

Een vaste stof of vloeistof die vastzit in een kolom, plaat of papier.

Een gas of vloeistof die zich over de stationaire fase beweegt.

De verschillende componenten hebben verschillende affiniteiten voor zowel de stationaire als de mobiele fase, waardoor ze gescheiden worden.

• Sneller, scheiden van complexe mengsels, - Vluchtige stoffen: staal moet omgezet worden naar gasfase.

Analytische chromatografie wordt gebruikt voor minimale hoeveelheden staal, terwijl preparatieve chromatografie wordt gebruikt voor grotere hoeveelheden en opzuivering.

Het principe van TLC is vloeistof-vast chromatografie, waarbij de vloeibare mobiele fase migreert doorheen een kolom gepakt met een vast dragermateriaal.

Conventionele LSC maakt gebruik van vloeistof kolom chromatografie, terwijl HPLC een hoge druk oplegt om redelijke stroomsnelheid te garanderen en dunne kolommen gebruikt voor snelle scheiding in enkele minuten.

HPLC wordt gebruikt voor toepassingen zoals serum en urine-analyse, alsook voor het onderzoeken van geneesmiddelen, drugs, vitamines, hormonen, en metabolieten in lage concentraties.

Gaschromatografie maakt gebruik van een gas als mobiele fase en een kolom waar een gas doorheen stroomt, terwijl vloeistofchromatografie vloeistoffen gebruikt als mobiele fase die door een kolom met een vast dragermateriaal migreren.

Het solventenreservoir zorgt ervoor dat de mobiele fase continu op de kolom wordt aangebracht.

DHPLC wordt gebruikt voor het opsporen van mutaties in DNA.

De kolom bij DHPLC bestaat uit een apolaire stationaire fase (reversed phase) en een polaire mobiele fase. Het staal zelf bevat DNA (polair) en TEAA (tris-ethyleenaminon), wat apolair is.

Gradiëntelutie, of solventprogrammatie, wordt gebruikt voor complexe scheidingen met verschillende oplosmiddelen.

Hoge druk wordt toegepast bij HPLC om een redelijke stroomsnelheid te garanderen.

Bij gaschromatografie kunnen verschillende gassen gebruikt worden als mobiele fase. Deze gassen moeten voldoen aan strenge eisen op het gebied van zuiverheid om storende nevenreacties te beperken.

Het injectiesysteem bij gaschromatografie is de zwakste schakel in het systeem, waarbij de reproduceerbaarheid afhankelijk is van de analist. Vaak wordt een autosampler gebruikt om de injectie te standaardiseren.

De vloeistofinjector bij HPLC kan vloeistoffen rechtstreeks injecteren, terwijl vaste stoffen eerst moeten worden opgelost en gefilterd/centrifugeerd voordat ze geïnjecteerd kunnen worden.

Adsorptiechromatografie is gebaseerd op adsorptie, waarbij stoffen aan een vast oppervlak binden.

Bij normal phase chromatografie is de stationaire fase polair en de mobiele fase apolair, terwijl bij reversed phase chromatografie de stationaire fase apolair is en de mobiele fase polair.

Ionenuitwisselingschromatografie is gebaseerd op de affiniteit van ionen in oplossing voor positief/negatief geladen ionen op de stationaire fase.

Een kation-uitwisselaar heeft negatief geladen functionele groepen op de stationaire fase en houdt positief geladen kationen het beste vast, terwijl een anion-uitwisselaar positief geladen functionele groepen heeft en negatief geladen anionen het beste vasthoudt.

Gel filtratie is gebaseerd op de afmeting van het molecuul, waarbij de stationaire fase een macromoleculaire gel met poriën van bepaalde afmeting is.

Bepalen van moleculaire gewichten, scheiden van grote en kleine moleculen, ontzouten van eiwitoplossingen.

De meeste stalen moeten worden geëxtraheerd om doelwitcomponenten te isoleren, concentreren en interfererende componenten (eiwitten, vetten, conjugaten) te verwijderen.

Selectie van de kolom, conditionering van de kolom.

Klinische chemie, minikolommen voor zuivering van DNA, RNA, GM, standaardisatie.

Eiwitten, vetten, conjugaten.

Lading van het staal, wasstap, elutiestap, droogdampen, eventueel derivatisatie.

Isoleren en zuiveren van doelwitcomponenten, concentreren, verwijderen van interfererende componenten.

Stationaire fase en mobiele fase

Vloeistofchromatografie (LC) en gaschromatografie (GC)

Scheiden van mengsels in hun verschillende componenten, gevolgd door kwalitatieve of kwantitatieve bepaling

Preparatieve chromatografie is voor grotere hoeveelheden en opzuivering, terwijl analytische chromatografie minimale hoeveelheden betreft

• Sneller, scheiden van complexe mengsels, - Vluchtige stoffen vereisen omzetting naar gasfase

Vloeistof (GLC) en vast (GSC)

Normal phase chromatografie heeft een polaire stationaire fase en een apolaire mobiele fase, terwijl reversed phase chromatografie een apolaire stationaire fase en een polaire mobiele fase heeft.

Het principe van ionenuitwisselingschromatografie is gebaseerd op de affiniteit van ionen in de mobiele fase voor positief/negatief geladen ionen op de stationaire fase.

Enkele toepassingen van gel filtratie zijn het bepalen van moleculaire gewichten, het scheiden van grote en kleine moleculen, en het ontzouten van eiwitoplossingen.

De rol van stalen voorbereiding in chromatografie is om de doelwitcomponenten te isoleren, concentreren en interfererende componenten (eiwitten, vetten, conjugaten) te verwijderen.

De stappen in het proces van chromatografie zijn selectie van de kolom, conditionering van de kolom, laden van het staal, wasstap, elutiestap, droogdampen, en eventueel derivatisatie.

De toepassingen van normal phase, reversed phase, en ionenuitwisselingschromatografie zijn respectievelijk klinische chemie, standaardisatie, en zuivering van DNA, RNA en GM.

Het verschil tussen conventionele LSC en HPLC is dat HPLC een verbeterde versie is van LSC met hogere druk en snellere analyse.

Het doel van de gradiëntelutie bij HPLC is om een geleidelijke verandering in samenstelling van de mobiele fase te creëren, waardoor een betere scheiding van componenten mogelijk is.

Analytische chromatografie wordt gebruikt om de samenstelling van een monster te bepalen, terwijl preparatieve chromatografie wordt gebruikt om de componenten van een monster te isoleren en zuiveren.

Gaschromatografie gebruikt een gasvormige mobiele fase en is geschikt voor vluchtige verbindingen, terwijl vloeistofchromatografie een vloeibare mobiele fase gebruikt en geschikt is voor niet-vluchtige verbindingen.

Het principe van TLC is gebaseerd op de scheiding van componenten van een mengsel door hun verschillende affiniteit voor de stationaire en mobiele fase op een dunne laag adsorberend materiaal.

Scheiding van mengsel in verschillende componenten, kwantitatieve én kwalitatieve bepaling, deskundige scheidingstechniek voor een zeer grote verscheidenheid aan uitwisselingprincipes

De mobiele fase migreert doorheen een kolom gepakt met een vast dragermateriaal onder hoge druk om een redelijke stroomsnelheid te garanderen.

Oplossen en scheiden van verschillende componenten in een gasstroom, waarbij bestanddelen één voor één uit de kolom komen langs de detector.

TLC is een snelle screening om een mengsel te scheiden en semikwantitatief, terwijl HPLC een scheidingstechniek is waarbij een vloeibare mobiele fase migreert doorheen een kolom gepakt met een vast dragermateriaal onder hoge druk.

DHPLC maakt gebruik van een apolaire stationaire fase (reversed phase) en een polaire mobiele fase, waarbij het staal zelf DNA(polair) + TEAA → apolair is.

De gradiëntelutie wordt gebruikt voor complexe scheidingen met verschillende oplosmiddelen.

De vloeistofinjector bij HPLC kan stalen van ng-2mg injecteren, of vloeistof rechtstreeks of via oplossen en filtreren/centrifugeren injecteren.

Het injectiesysteem bij gaschromatografie omvat inlaten van het staal, verdamping van het staal en menging met draaggas.

HPLC wordt gebruikt voor analyse van serum, urine, geneesmiddelen, drugs, vitamines, hormonen, en metabolieten in lage concentraties.

Het solventenreservoir zorgt ervoor dat de mobiele fase continu op de kolom wordt aangebracht.

De kolom bij DHPLC maakt gebruik van een apolaire stationaire fase (reversed phase) en een polaire mobiele fase, waarbij het staal zelf DNA(polair) + TEAA → apolair is.

Gaschromatografie wordt gebruikt voor het oplossen en scheiden van verschillende componenten in een gasstroom, waarbij de bestanddelen één voor één uit de kolom komen langs de detector.