Technique d’observation en Biologie Cellulaire (2)
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Questions and Answers

Quels éléments sont retrouvés dans le culot après centrifugation à 80 000 G ?

  • Ribosomes
  • Microsomes et petites vésicules (correct)
  • Macromolécules
  • Virus
  • La séparation discontinue repose sur la vitesse de sédimentation des éléments.

    False

    Quel type de chromatographie est utilisé pour séparer les composants selon leur taille ?

    Chromatographie par filtration sur gel

    Le _____ permet l’étude de l’expression des protéines après fractionnement.

    <p>Western blot</p> Signup and view all the answers

    Associez les types de chromatographie avec leurs critères de séparation :

    <p>Chromatographie par filtration sur gel = Taille Chromatographie par échange d’ions = Charge Chromatographie par affinité = Affinité</p> Signup and view all the answers

    Pourquoi est-il important d'équilibrer les tubes dans une centrifugeuse ?

    <p>Pour éviter de casser le rotor</p> Signup and view all the answers

    La sédimentation rapide des composants fait qu'ils sont plus proches du fond du tube.

    <p>True</p> Signup and view all the answers

    Quel détergent est utilisé pour libérer les protéines des cellules sans les endommager ?

    <p>Un détergent spécifique</p> Signup and view all the answers

    Quel est l'objectif principal des tests de migration cellulaire ?

    <p>Déterminer la capacité des cellules à migrer</p> Signup and view all the answers

    La cytométrie permet de déterminer la phase du cycle cellulaire des cellules.

    <p>True</p> Signup and view all the answers

    Quel type d'antibodies est utilisé dans l'immuno-histochimie ?

    <p>Anticorps couplé à une enzyme</p> Signup and view all the answers

    Le dosage ELISA est un test ________ et ________.

    <p>spectrophotométrique, colorimétrique</p> Signup and view all the answers

    Associez les techniques d'analyse avec leur description :

    <p>Cytométrie = Analyse utilisant un laser pour compter les cellules Immuno-fluorescence = Détection des protéines avec un anticorps couplé à un fluorophore Dosage ELISA = Test colorimétrique simple à réaliser Fractionnement cellulaire = Séparation contrôlée des organites du cytoplasme</p> Signup and view all the answers

    Quel type de dosage ELISA permet de détecter un anticorps ?

    <p>ELISA indirect</p> Signup and view all the answers

    Le test ELISA sandwich est utilisé pour doser un anticorps.

    <p>False</p> Signup and view all the answers

    Quel appareil est utilisé pour mesurer la densité optique dans un dosage ELISA?

    <p>Un spectrophotomètre</p> Signup and view all the answers

    La centrifugation sépare les constituants d'un échantillon en fonction de leur ______.

    <p>taille et densité</p> Signup and view all the answers

    Associez les éléments à leur vitesse de centrifugation correspondante :

    <p>Cellules = 1000 G Mitochondries = 20000 G Noyaux = 1000 G Lysosomes = 20000 G</p> Signup and view all the answers

    Quelle méthode nécessite une ultracentrifugeuse pour le fractionnement cellulaire ?

    <p>Centrifugation à haute vitesse</p> Signup and view all the answers

    Les éléments de faible densité sédimentent plus rapidement lors de la centrifugation.

    <p>False</p> Signup and view all the answers

    Quelle est la principale utilisation d'un anticorps secondaire dans les dosages ELISA ?

    <p>Mettre en évidence la présence de l'anticorps ou de l'antigène</p> Signup and view all the answers

    Le culot après centrifugation contient les éléments de ______ et de taille importante.

    <p>densité</p> Signup and view all the answers

    Quel est le rôle de la gamme étalon dans un dosage ELISA ?

    <p>Définir la concentration de la protéine cible</p> Signup and view all the answers

    Quelle méthode utilise des anticorps spécifiques pour isoler des cellules?

    <p>Cytométrie en flux</p> Signup and view all the answers

    La congélation des lignées cellulaires nécessite une lenteur lors du processus pour minimiser les dommages.

    <p>False</p> Signup and view all the answers

    Quel est le rôle du DMSO lors de la congélation des cellules?

    <p>Cryo-protecteur</p> Signup and view all the answers

    La ______ en cytométrie en flux permet de trier efficacement les cellules.

    <p>sélection morphologique</p> Signup and view all the answers

    Associez chaque méthode avec son utilisation principale:

    <p>Cytométrie en flux = Tri de cellules Immunostaining = Identification de protéines spécifiques ELISA = Détection d'antigènes ou anticorps Cell Fractionation = Séparation de populations cellulaires</p> Signup and view all the answers

    Quel est un inconvénient de l'utilisation des lignées cellulaires?

    <p>Propriétés cellulaires modifiées</p> Signup and view all the answers

    Les cellules vivent en milieu de culture, ce qui simule des conditions physiologiques exactes.

    <p>False</p> Signup and view all the answers

    Quel est l'élément chimique essentiel à la croissance des cellules dans un milieu de culture?

    <p>Carbone</p> Signup and view all the answers

    Quelles sont les étapes de la congélation des lignées cellulaires?

    <p>Comptage, Congélation, Conservation</p> Signup and view all the answers

    Un milieu de culture enrichi contient uniquement des éléments chimiques définis.

    <p>False</p> Signup and view all the answers

    Pour l’étude de mécanismes physiologiques, on utilise les lignées cellulaires pour étudier le ______.

    <p>cycle cellulaire</p> Signup and view all the answers

    Quelles sont les deux conditions physiques à contrôler dans un milieu de culture?

    <p>température et pH</p> Signup and view all the answers

    Dans quel domaine la thérapie génique est-elle principalement appliquée?

    <p>Pharmaceutique</p> Signup and view all the answers

    Le ________ de veau fœtal est un exemple de sérum utilisé dans les milieux de culture.

    <p>sérum</p> Signup and view all the answers

    Associez les termes suivants aux descriptions appropriées:

    <p>Enrichi = Contient des composants indéfinis Spécifique = Adapté à une lignée cellulaire Empirique = Basé sur l'expérience sans spécification Minéraux = Éléments essentiels pour le métabolisme</p> Signup and view all the answers

    Study Notes

    Fractionnement cellulaire

    • Séparation des constituants d'un échantillon en fonction de la taille et de la densité.
    • Plus les éléments sont denses ou de taille importante, plus ils sédimentent rapidement.
    • Plus les composants sont petits et de faible densité, plus il faut centrifuger rapidement et longtemps pour les faire sédimenter.

    Centrifugation

    • Technique utilisée pour le fractionnement cellulaire.
    • La vitesse de centrifugation est exprimée en G (unité de mesure internationale) ou en tours par minute.
    • Il existe deux types de centrifugeuses : à godets fixes et à godets mobiles.

    Centrifugation d'un homogénat cellulaire

    • La centrifugation à 1000 G permet de séparer les cellules, les noyaux et le cytosquelette.
    • La centrifugation à 20 000 G permet de séparer les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes.
    • La centrifugation à 80 000 G permet de séparer les microsomes et les petites vésicules.
    • La centrifugation à 150 000 G permet de séparer les macromolécules, les virus et les ribosomes.

    Fractionnement cellulaire par gradient

    • Dépôt de l'échantillon dans une solution permettant de créer un gradient, par exemple une solution de saccharose.
    • Séparation continue : selon la vitesse de sédimentation, en fonction de la densité, de la taille et de la forme de la structure.
    • Séparation discontinue : selon le point d'équilibre de la structure (sédimentation à l'équilibre).

    Fractionnement cellulaire par chromatographie sur colonne

    • L'échantillon passe dans une colonne, à travers des billes.
    • Séparation en fonction du critère de séparation de la colonne : taille, charge, affinité.

    Milieu de culture

    • Contient les éléments chimiques nécessaires à la croissance des cellules.
    • Le milieu de culture minimum contient : de l'eau, une source de carbone et d'énergie (glucose), du sérum, une source d'azote, des sels minéraux, des sources d'oligo-éléments, un pH constant.
    • Le milieu de culture enrichi est spécifique de la lignée cellulaire et contient des composants indéfinis.
    • Le choix du milieu de culture dépend des besoins des cellules et de l'état de différenciation.

    Etablissement des lignées cellulaires

    • A partir d'une biopsie d'organe ou de tissu.
    • Fragmenté grâce à un cocktail enzymatique pour obtenir une suspension cellulaire.
    • Prolifération des cellules du tissu (plusieurs populations cellulaires).
    • Sélection d'un clone d'intérêt.
    • Séparation des constituants en fonction de la densité par le fractionnement cellulaire.

    Applications des lignées cellulaires

    • Tests de cytotoxicité : permet de déterminer la toxicité de molécules.
    • Tests de migration cellulaire : détermine la capacité des cellules à migrer dans certaines conditions.
    • Tests sur des organites ou des protéines : libération du cytoplasme par rupture des membranes cellulaires.

    Cytométrie

    • Technique d'analyse des cellules.
    • Les cellules passent une à une devant un laser.
    • Reconnaissance de protéines (marqueurs) par fluorescence.
    • Tri cellulaire par reconnaissance de la morphologie cellulaire.
    • Etude du cycle cellulaire.

    Immunomarquage

    • Utilisation d'anticorps couplés à une enzyme (immuno-histochimie) ou à un fluorophore (immuno-fluorescence).
    • Utilisation d'un microscope optique en lumière directe ou à fluorescence.

    Dosage ELISA

    • Dosage spectrophotométrique facile à réaliser, rapide et colorimétrique.
    • Mise en évidence de la présence d'un anticorps ou d'un antigène recherché grâce à l'utilisation d'un anticorps secondaire couplé à une molécule capable de réagir avec un substrat.
    • L'ajout du substrat dans le milieu donne une coloration.
    • L'intensité de la coloration permet de définir la concentration de la protéine cible.

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    Description

    Ce quiz explore les techniques de centrifugation et le fractionnement cellulaire. Apprenez comment la vitesse et la densité influencent la séparation des composants cellulaires. Testez vos connaissances sur les différents types de centrifugeuses et leurs applications dans la recherche biologique.

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