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Questions and Answers
Quels éléments sont retrouvés dans le culot après centrifugation à 80 000 G ?
La séparation discontinue repose sur la vitesse de sédimentation des éléments.
False
Quel type de chromatographie est utilisé pour séparer les composants selon leur taille ?
Chromatographie par filtration sur gel
Le _____ permet l’étude de l’expression des protéines après fractionnement.
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Associez les types de chromatographie avec leurs critères de séparation :
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Pourquoi est-il important d'équilibrer les tubes dans une centrifugeuse ?
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La sédimentation rapide des composants fait qu'ils sont plus proches du fond du tube.
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Quel détergent est utilisé pour libérer les protéines des cellules sans les endommager ?
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Quel est l'objectif principal des tests de migration cellulaire ?
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La cytométrie permet de déterminer la phase du cycle cellulaire des cellules.
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Quel type d'antibodies est utilisé dans l'immuno-histochimie ?
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Le dosage ELISA est un test ________ et ________.
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Associez les techniques d'analyse avec leur description :
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Quel type de dosage ELISA permet de détecter un anticorps ?
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Le test ELISA sandwich est utilisé pour doser un anticorps.
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Quel appareil est utilisé pour mesurer la densité optique dans un dosage ELISA?
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La centrifugation sépare les constituants d'un échantillon en fonction de leur ______.
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Associez les éléments à leur vitesse de centrifugation correspondante :
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Quelle méthode nécessite une ultracentrifugeuse pour le fractionnement cellulaire ?
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Les éléments de faible densité sédimentent plus rapidement lors de la centrifugation.
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Quelle est la principale utilisation d'un anticorps secondaire dans les dosages ELISA ?
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Le culot après centrifugation contient les éléments de ______ et de taille importante.
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Quel est le rôle de la gamme étalon dans un dosage ELISA ?
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Quelle méthode utilise des anticorps spécifiques pour isoler des cellules?
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La congélation des lignées cellulaires nécessite une lenteur lors du processus pour minimiser les dommages.
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Quel est le rôle du DMSO lors de la congélation des cellules?
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La ______ en cytométrie en flux permet de trier efficacement les cellules.
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Associez chaque méthode avec son utilisation principale:
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Quel est un inconvénient de l'utilisation des lignées cellulaires?
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Les cellules vivent en milieu de culture, ce qui simule des conditions physiologiques exactes.
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Quel est l'élément chimique essentiel à la croissance des cellules dans un milieu de culture?
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Quelles sont les étapes de la congélation des lignées cellulaires?
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Un milieu de culture enrichi contient uniquement des éléments chimiques définis.
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Pour l’étude de mécanismes physiologiques, on utilise les lignées cellulaires pour étudier le ______.
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Quelles sont les deux conditions physiques à contrôler dans un milieu de culture?
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Dans quel domaine la thérapie génique est-elle principalement appliquée?
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Le ________ de veau fœtal est un exemple de sérum utilisé dans les milieux de culture.
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Associez les termes suivants aux descriptions appropriées:
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Study Notes
Fractionnement cellulaire
- Séparation des constituants d'un échantillon en fonction de la taille et de la densité.
- Plus les éléments sont denses ou de taille importante, plus ils sédimentent rapidement.
- Plus les composants sont petits et de faible densité, plus il faut centrifuger rapidement et longtemps pour les faire sédimenter.
Centrifugation
- Technique utilisée pour le fractionnement cellulaire.
- La vitesse de centrifugation est exprimée en G (unité de mesure internationale) ou en tours par minute.
- Il existe deux types de centrifugeuses : à godets fixes et à godets mobiles.
Centrifugation d'un homogénat cellulaire
- La centrifugation à 1000 G permet de séparer les cellules, les noyaux et le cytosquelette.
- La centrifugation à 20 000 G permet de séparer les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes.
- La centrifugation à 80 000 G permet de séparer les microsomes et les petites vésicules.
- La centrifugation à 150 000 G permet de séparer les macromolécules, les virus et les ribosomes.
Fractionnement cellulaire par gradient
- Dépôt de l'échantillon dans une solution permettant de créer un gradient, par exemple une solution de saccharose.
- Séparation continue : selon la vitesse de sédimentation, en fonction de la densité, de la taille et de la forme de la structure.
- Séparation discontinue : selon le point d'équilibre de la structure (sédimentation à l'équilibre).
Fractionnement cellulaire par chromatographie sur colonne
- L'échantillon passe dans une colonne, à travers des billes.
- Séparation en fonction du critère de séparation de la colonne : taille, charge, affinité.
Milieu de culture
- Contient les éléments chimiques nécessaires à la croissance des cellules.
- Le milieu de culture minimum contient : de l'eau, une source de carbone et d'énergie (glucose), du sérum, une source d'azote, des sels minéraux, des sources d'oligo-éléments, un pH constant.
- Le milieu de culture enrichi est spécifique de la lignée cellulaire et contient des composants indéfinis.
- Le choix du milieu de culture dépend des besoins des cellules et de l'état de différenciation.
Etablissement des lignées cellulaires
- A partir d'une biopsie d'organe ou de tissu.
- Fragmenté grâce à un cocktail enzymatique pour obtenir une suspension cellulaire.
- Prolifération des cellules du tissu (plusieurs populations cellulaires).
- Sélection d'un clone d'intérêt.
- Séparation des constituants en fonction de la densité par le fractionnement cellulaire.
Applications des lignées cellulaires
- Tests de cytotoxicité : permet de déterminer la toxicité de molécules.
- Tests de migration cellulaire : détermine la capacité des cellules à migrer dans certaines conditions.
- Tests sur des organites ou des protéines : libération du cytoplasme par rupture des membranes cellulaires.
Cytométrie
- Technique d'analyse des cellules.
- Les cellules passent une à une devant un laser.
- Reconnaissance de protéines (marqueurs) par fluorescence.
- Tri cellulaire par reconnaissance de la morphologie cellulaire.
- Etude du cycle cellulaire.
Immunomarquage
- Utilisation d'anticorps couplés à une enzyme (immuno-histochimie) ou à un fluorophore (immuno-fluorescence).
- Utilisation d'un microscope optique en lumière directe ou à fluorescence.
Dosage ELISA
- Dosage spectrophotométrique facile à réaliser, rapide et colorimétrique.
- Mise en évidence de la présence d'un anticorps ou d'un antigène recherché grâce à l'utilisation d'un anticorps secondaire couplé à une molécule capable de réagir avec un substrat.
- L'ajout du substrat dans le milieu donne une coloration.
- L'intensité de la coloration permet de définir la concentration de la protéine cible.
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Description
Ce quiz explore les techniques de centrifugation et le fractionnement cellulaire. Apprenez comment la vitesse et la densité influencent la séparation des composants cellulaires. Testez vos connaissances sur les différents types de centrifugeuses et leurs applications dans la recherche biologique.
