40 Questions
Cosa determina l'ordine di uscita delle molecole nella cromatografia per filtrazione su gel?
Le dimensioni delle molecole
Cosa succede alle molecole più grandi nella cromatografia per filtrazione su gel?
Usccono più velocemente dalla colonna
Qual è il principale limite della cromatografia per filtrazione su gel?
È soggetta ad errori del 10% nella valutazione del peso molecolare
Come è fatta la colonna cromatografica nella cromatografia a scambio ionico?
Carbossimetilcellulosa (cariche negative) o dietilamminocellulosa (cariche positive)
Cosa determina l'ordine di uscita delle proteine nella cromatografia a scambio ionico?
La carica netta delle proteine
Cosa succede alle proteine con carica opposta rispetto alla fase stazionaria nella cromatografia a scambio ionico?
Rimangono più tempo nella colonna
Quale è il risultato dell'interazione tra una proteina e una colonna di carbossimetilcellulosa?
Se ha carica + viene attratta dalla colonna
Cosa si ottiene alla fine della cromatografia per filtrazione su gel?
Un campione separato in base al peso molecolare
Cosa causa la formazione di complessi di proteine idrofobiche mediante l'aggiunta di sale?
La predominanza delle interazioni proteina-proteina rispetto alle interazioni proteina-acqua e proteina-sale
Quale tecnica viene utilizzata per separare componenti estremamente diversi?
Dialisi
Cosa determina il cut-off della membrana utilizata nella dialisi?
Il peso molecolare al di sotto del quale le molecole possono attraversare la membrana
Per cosa può anche essere utile la dialisi?
Per la rimozione di sali dal campione
Cosa è necessario prevedere durante la dialisi per evitare fenomeni di saturazione?
Un refresh dell'ambiente acquoso esterno
Cosa si ottiene dopo la tecnica di dialisi?
Un campione più puro rispetto a quello ottenuto con la centrifugazione differenziale
Perché le proteine idrofobiche tendono a separarsi dalla soluzione e a precipitare?
Perché hanno una natura idrofobica
Cosa succede quando si addiziona sale al campione?
Le interazioni proteina-sale predominano rispetto alle interazioni proteina-proteina e proteina-acqua
In elettroforesi, la velocità di migrazione è influenzata da quali due fattori?
Carica netta e coefficiente frizionale
Qual è il risultato della combinazione di focalizzazione isoelettrica e SDS-PAGE?
Informazioni dettagliate sul numero di catene polipeptidiche e il loro peso molecolare
Qual è il tipo di test utilizzato per quantificare la presenza di proteina?
Test di tipo colorimetrico
Come viene calcolata la concentrazione di proteina?
Attraverso degli specifici test di dosaggio
Qual è il parametro che rappresenta la quantità di proteina presente ad ogni tappa del processo di purificazione?
Proteina totale
Che cosa viene valutato nel test di dosaggio?
La presenza di proteina nel campione
Cosa si ottiene kombinando i risultati delle valutazioni di visualizzazione e di quantificazione?
Diversi parametri per ogni step del processo di purificazione
Cosa rappresenta la proteina totale?
La quantità di proteina presente ad ogni tappa del processo di purificazione
Qual è il principale obiettivo della purificazione di una proteina?
Ottenere una proteina altamente purificata con una resa accettabile
Cosa potrebbe accadere se si ottiene una proteina molto pura, ma in piccole quantità?
Non si potrebbe caratterizzare la proteina successivamente
Perché è importante ottenere una buona purificazione della proteina?
Perché i risultati delle caratterizzazioni successive sarebbero più precisi
Cosa rappresenta la comparsa di un'unica banda di intensità di colore più forte nell'elettroforesi su gel?
La proteina che si voleva isolare
Qual è il problema se si hanno livelli di purezza bassi nella proteina?
I risultati delle caratterizzazioni successive sarebbero 'sporchi'
Cosa si ottiene conducendo l'elettroforesi su gel nei vari step del processo di purificazione?
Un decremento del numero di bande e della loro intensità
Cosa rappresenta il frazionamento salino nel processo di purificazione?
Il metodo di salting out
Cosa rappresenta la tabella associata all'immagine dell'elettroforesi su gel?
Le valutazioni dei parametri elencati nei diversi passaggi del processo di purificazione
Come si ottiene la separazione degli amminoacidi in base al pH?
Cambiando il pH della fase mobile
Quale è l'obiettivo dell'ottimizzazione del protocollo di separazione?
Separare gli amminoacidi in modo che ognuno abbia una posizione specifica
Cosa si ottiene confrontando la posizione dei picchi ignoti con la posizione degli amminoacidi definiti?
L'identificazione di ogni specie
Cosa si utilizza per la calibrazione durante l'analisi?
Amminoacidi liberi
Quale è il risultato della reazione di idrolisi e di rottura di tutti i legami peptidici?
La identificazione quantitativa degli amminoacidi diversi
Cosa rappresenta la scala pH in questo contesto?
La variazione della fase mobile durante l'analisi
Come si possono identificare gli amminoacidi della proteina?
Confrontando la posizione dei picchi ignoti con la posizione degli amminoacidi definiti
Cosa non si può determinare attraverso questo metodo di analisi?
L'ordine degli amminoacidi nella catena peptidica
Study Notes
Técniche di separazione e purificazione delle proteine
- La tecnica di salting out viene utilizzata per fare separazioni grossolane, aggiungendo sale per spostare gli equilibri delle interazioni tra proteine e solvente, portando alla formazione di complessi di proteine che tendono a separarsi dalla soluzione e a precipitare.
- La tecnica della dialisi viene utilizzata per fare separazioni di componenti estremamente diversi tra loro, utilizzando una membrana con un cut-off specifico per rimuovere i sali e ottenere un campione più puro.
Cromatografia per filtrazione su gel
- La cromatografia per filtrazione su gel opera in base alle dimensioni delle molecole, separando le componenti in base al loro peso molecolare.
- Le molecole più grandi escono per prime, mentre le molecole più piccole tendono a entrare nelle porosità e ci mettono più tempo ad uscire.
Cromatografia a scambio ionico
- La cromatografia a scambio ionico fa una separazione che si basa sulla carica netta delle proteine, utilizzando una colonna con cariche positive o negative.
- L'ordine di uscita è determinato dalla interazione delle proteine con la fase stazionaria, con le parti aventi cariche opposte che tendono a rimanere più tempo.
Parametri di purificazione
- La quantità di proteina totale viene calcolata moltiplicando la concentrazione di proteina per il volume totale del campione.
- La concentrazione di proteina si calcola attraverso test di dosaggio colorimetrici.
- La resa accettabile è importante, poiché una proteina purissima ma in quantità scarsa può non essere sufficiente per le caratterizzazioni successive.
Elettroforesi
- La combinazione della focalizzazione isoelettrica con l'SDS-PAGE consente di ottenere informazioni molto più dettagliate sulla proteina, combinando le informazioni sul peso molecolare e sul numero di catene polipeptidiche.
- I risultati dell'elettroforesi sono valutazioni di visualizzazione e di quantificazione, consentendo di caratterizzare i parametri di purificazione.
Separazione in base al pH
- La separazione in base al pH è stata ottimizzata per avere in punti diversi i vari amminoacidi, senza sovrapposizioni.
- La fase mobile cambia durante l'analisi, alterando la carica netta degli amminoacidi e il loro modo di interagire con la fase stazionaria.
Esercizio sulla bioingegneria chimica che tratta delle interazioni proteina-proteina e proteina-acqua in presenza di sale.
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