Bioingegneria chimica: Interazioni proteina-proteina e proteina-acqua

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Questions and Answers

Cosa determina l'ordine di uscita delle molecole nella cromatografia per filtrazione su gel?

La carica netta delle proteine

La forma delle molecole

Le dimensioni delle molecole (correct)

Il peso molecolare delle proteine

Cosa succede alle molecole più grandi nella cromatografia per filtrazione su gel?

Usccono più velocemente dalla colonna (correct)

Entrano nelle porosità della colonna

Rimangono più tempo nella colonna

Non interagiscono con la colonna

Qual è il principale limite della cromatografia per filtrazione su gel?

È soggetta ad errori del 10% nella valutazione del peso molecolare (correct)

Non può separare proteine con dimensioni diverse

Non può separare proteine con cariche diverse

Non può essere utilizzata per ottenere informazioni sul peso molecolare

Come è fatta la colonna cromatografica nella cromatografia a scambio ionico?

Carbossimetilcellulosa (cariche negative) o dietilamminocellulosa (cariche positive) Signup and view all the answers

Cosa determina l'ordine di uscita delle proteine nella cromatografia a scambio ionico?

La carica netta delle proteine Signup and view all the answers

Cosa succede alle proteine con carica opposta rispetto alla fase stazionaria nella cromatografia a scambio ionico?

Rimangono più tempo nella colonna Signup and view all the answers

Quale è il risultato dell'interazione tra una proteina e una colonna di carbossimetilcellulosa?

Se ha carica + viene attratta dalla colonna Signup and view all the answers

Cosa si ottiene alla fine della cromatografia per filtrazione su gel?

Un campione separato in base al peso molecolare Signup and view all the answers

Cosa causa la formazione di complessi di proteine idrofobiche mediante l'aggiunta di sale?

La predominanza delle interazioni proteina-proteina rispetto alle interazioni proteina-acqua e proteina-sale Signup and view all the answers

Quale tecnica viene utilizzata per separare componenti estremamente diversi?

Dialisi Signup and view all the answers

Cosa determina il cut-off della membrana utilizata nella dialisi?

Il peso molecolare al di sotto del quale le molecole possono attraversare la membrana Signup and view all the answers

Per cosa può anche essere utile la dialisi?

Per la rimozione di sali dal campione Signup and view all the answers

Cosa è necessario prevedere durante la dialisi per evitare fenomeni di saturazione?

Un refresh dell'ambiente acquoso esterno Signup and view all the answers

Cosa si ottiene dopo la tecnica di dialisi?

Un campione più puro rispetto a quello ottenuto con la centrifugazione differenziale Signup and view all the answers

Perché le proteine idrofobiche tendono a separarsi dalla soluzione e a precipitare?

Perché hanno una natura idrofobica Signup and view all the answers

Cosa succede quando si addiziona sale al campione?

Le interazioni proteina-sale predominano rispetto alle interazioni proteina-proteina e proteina-acqua Signup and view all the answers

In elettroforesi, la velocità di migrazione è influenzata da quali due fattori?

Carica netta e coefficiente frizionale Signup and view all the answers

Qual è il risultato della combinazione di focalizzazione isoelettrica e SDS-PAGE?

Informazioni dettagliate sul numero di catene polipeptidiche e il loro peso molecolare Signup and view all the answers

Qual è il tipo di test utilizzato per quantificare la presenza di proteina?

Test di tipo colorimetrico Signup and view all the answers

Come viene calcolata la concentrazione di proteina?

Attraverso degli specifici test di dosaggio Signup and view all the answers

Qual è il parametro che rappresenta la quantità di proteina presente ad ogni tappa del processo di purificazione?

Proteina totale Signup and view all the answers

Che cosa viene valutato nel test di dosaggio?

La presenza di proteina nel campione Signup and view all the answers

Cosa si ottiene kombinando i risultati delle valutazioni di visualizzazione e di quantificazione?

Diversi parametri per ogni step del processo di purificazione Signup and view all the answers

Cosa rappresenta la proteina totale?

La quantità di proteina presente ad ogni tappa del processo di purificazione Signup and view all the answers

Qual è il principale obiettivo della purificazione di una proteina?

Ottenere una proteina altamente purificata con una resa accettabile Signup and view all the answers

Cosa potrebbe accadere se si ottiene una proteina molto pura, ma in piccole quantità?

Non si potrebbe caratterizzare la proteina successivamente Signup and view all the answers

Perché è importante ottenere una buona purificazione della proteina?

Perché i risultati delle caratterizzazioni successive sarebbero più precisi Signup and view all the answers

Cosa rappresenta la comparsa di un'unica banda di intensità di colore più forte nell'elettroforesi su gel?

La proteina che si voleva isolare Signup and view all the answers

Qual è il problema se si hanno livelli di purezza bassi nella proteina?

I risultati delle caratterizzazioni successive sarebbero 'sporchi' Signup and view all the answers

Cosa si ottiene conducendo l'elettroforesi su gel nei vari step del processo di purificazione?

Un decremento del numero di bande e della loro intensità Signup and view all the answers

Cosa rappresenta il frazionamento salino nel processo di purificazione?

Il metodo di salting out Signup and view all the answers

Cosa rappresenta la tabella associata all'immagine dell'elettroforesi su gel?

Le valutazioni dei parametri elencati nei diversi passaggi del processo di purificazione Signup and view all the answers

Come si ottiene la separazione degli amminoacidi in base al pH?

Cambiando il pH della fase mobile Signup and view all the answers

Quale è l'obiettivo dell'ottimizzazione del protocollo di separazione?

Separare gli amminoacidi in modo che ognuno abbia una posizione specifica Signup and view all the answers

Cosa si ottiene confrontando la posizione dei picchi ignoti con la posizione degli amminoacidi definiti?

L'identificazione di ogni specie Signup and view all the answers

Cosa si utilizza per la calibrazione durante l'analisi?

Amminoacidi liberi Signup and view all the answers

Quale è il risultato della reazione di idrolisi e di rottura di tutti i legami peptidici?

La identificazione quantitativa degli amminoacidi diversi Signup and view all the answers

Cosa rappresenta la scala pH in questo contesto?

La variazione della fase mobile durante l'analisi Signup and view all the answers

Come si possono identificare gli amminoacidi della proteina?

Confrontando la posizione dei picchi ignoti con la posizione degli amminoacidi definiti Signup and view all the answers

Cosa non si può determinare attraverso questo metodo di analisi?

L'ordine degli amminoacidi nella catena peptidica Signup and view all the answers

Study Notes

Técniche di separazione e purificazione delle proteine

La tecnica di salting out viene utilizzata per fare separazioni grossolane, aggiungendo sale per spostare gli equilibri delle interazioni tra proteine e solvente, portando alla formazione di complessi di proteine che tendono a separarsi dalla soluzione e a precipitare.
La tecnica della dialisi viene utilizzata per fare separazioni di componenti estremamente diversi tra loro, utilizzando una membrana con un cut-off specifico per rimuovere i sali e ottenere un campione più puro.

Cromatografia per filtrazione su gel

La cromatografia per filtrazione su gel opera in base alle dimensioni delle molecole, separando le componenti in base al loro peso molecolare.
Le molecole più grandi escono per prime, mentre le molecole più piccole tendono a entrare nelle porosità e ci mettono più tempo ad uscire.

Cromatografia a scambio ionico

La cromatografia a scambio ionico fa una separazione che si basa sulla carica netta delle proteine, utilizzando una colonna con cariche positive o negative.
L'ordine di uscita è determinato dalla interazione delle proteine con la fase stazionaria, con le parti aventi cariche opposte che tendono a rimanere più tempo.

Parametri di purificazione

La quantità di proteina totale viene calcolata moltiplicando la concentrazione di proteina per il volume totale del campione.
La concentrazione di proteina si calcola attraverso test di dosaggio colorimetrici.
La resa accettabile è importante, poiché una proteina purissima ma in quantità scarsa può non essere sufficiente per le caratterizzazioni successive.

Elettroforesi

La combinazione della focalizzazione isoelettrica con l'SDS-PAGE consente di ottenere informazioni molto più dettagliate sulla proteina, combinando le informazioni sul peso molecolare e sul numero di catene polipeptidiche.
I risultati dell'elettroforesi sono valutazioni di visualizzazione e di quantificazione, consentendo di caratterizzare i parametri di purificazione.

Separazione in base al pH

La separazione in base al pH è stata ottimizzata per avere in punti diversi i vari amminoacidi, senza sovrapposizioni.
La fase mobile cambia durante l'analisi, alterando la carica netta degli amminoacidi e il loro modo di interagire con la fase stazionaria.

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Description

Esercizio sulla bioingegneria chimica che tratta delle interazioni proteina-proteina e proteina-acqua in presenza di sale.