Podcast Beta
Questions and Answers
Jaký je hlavní rozdíl mezi přímou a nepřímou aglutinací?
Který z následujících testů je použitý k průkazu protilátek u salmonelózy?
Jaký typ aglutinace se používá k určování mikrobů pomocí antisér?
Která reakce zahrnuje živé bakterie a jejich lýzu?
Signup and view all the answers
Jaké jsou příklady Ag, které lze detekovat v likvoru nebo moči?
Signup and view all the answers
Který test slouží k průkazu heterofilních protilátek u infekcí?
Signup and view all the answers
Co je charakteristické pro hemaglutinaci?
Signup and view all the answers
Jaký je účel latexfixačního testu?
Signup and view all the answers
Jaký je význam indexu pozitivity (IP) v serologických testech?
Signup and view all the answers
Co způsobuje zvýšení senzitivity testu?
Signup and view all the answers
Jaké fáze se zohledňují v laboratorních charakteristikách testů?
Signup and view all the answers
Jaký je vztah mezi specificitou a senzitivitou testu?
Signup and view all the answers
Jaký faktor může nejvíce ovlivnit laboratorní chyby?
Signup and view all the answers
Co je účelem gelové elektroforézy?
Signup and view all the answers
Jaký je princip přenosu proteinů pomocí blottingu?
Signup and view all the answers
Jaký je nejčastěji používaný materiál pro blotovací membrány?
Signup and view all the answers
Jaká reakce se používá při detekci proteinů v rámci serologické analýzy?
Signup and view all the answers
Která z následujících metod se NEřadí mezi molekulární diagnostické metody?
Signup and view all the answers
Co je hlavním cílem hybridizačních metod?
Signup and view all the answers
Jaké složky zahrnuje master mix pro PCR?
Signup and view all the answers
Jaké je hlavní využití západní blottingové techniky?
Signup and view all the answers
Jaké použití má zesílení nukleových kyselin pomocí amplifikačních metod?
Signup and view all the answers
Jaké jsou charakteristické znaky rozdělení proteinů do bandů?
Signup and view all the answers
Co způsobuje terminaci syntézy při sekvenování DNA?
Signup and view all the answers
Jaký je přibližný rozsah délky sekvence, kterou lze určit v jedné sekvenační reakci?
Signup and view all the answers
Jakým způsobem se detekují nukleotidy během sekvenování?
Signup and view all the answers
Jak bereme v úvahu délku produktů při sekvenování?
Signup and view all the answers
Jaký je význam sekvenačních technik mimo mikrobiologii?
Signup and view all the answers
Jaké informace lze získat pomocí molekulárních metod v mikrobiologii?
Signup and view all the answers
Jaké jsou epidemiologické charakteristiky při sekvenování?
Signup and view all the answers
Jaké chyby mohou nastat při interpretaci výsledků nepřímého průkazu?
Signup and view all the answers
Jaký typ vlákna je templátový při sekvenování?
Signup and view all the answers
Jakým způsobem lze měřit délku nedokončených úseků komplementárního vlákna?
Signup and view all the answers
Jaký je obvyklý typ protilátek, které se první objevují po infekci?
Signup and view all the answers
Jaká je dynamika titru protilátek při sérokonverzi?
Signup and view all the answers
Jaký význam má vyšetření párových sér?
Signup and view all the answers
Jaký faktor může negativně ovlivnit výsledky sérologického vyšetření?
Signup and view all the answers
Co zahrnuje ovlivňující faktory při hodnocení protilátek?
Signup and view all the answers
Co signalizuje přítomnost IgM protilátek?
Signup and view all the answers
Jak se mění hladiny protilátek v průběhu onemocnění?
Signup and view all the answers
Jaké laboratorní metody mohou být použity k detekci protilátek?
Signup and view all the answers
Kdy se objevují protilátky v organismu po prodělání onemocnění?
Signup and view all the answers
Jaký vliv má gravidita na imunitní systém pacienta?
Signup and view all the answers
Study Notes
Aglutinace
- Aglutinace je reakce, která probíhá s antigeny (Ag) a protilátkami (Ab).
- Přímá aglutinace: Ag jsou přirozeně součástí povrchu částic, např. antigeny krevních skupin.
- Nepřímá aglutinace: Ag se uměle navazuje na povrch částic, např. latexové částice, erytrocyty.
- Průkaz Ag: Nepřímá aglutinace se využívá k průkazu Ag, jako jsou meningokoky, streptokoky, pneumokoky a rotaviry v likvoru, séru, moči, sputu a stolici.
- Průkaz protilátek: Nepřímá aglutinace se také používá k průkazu protilátek např. latexfixační testy pro revmatoidní faktor.
Sklíčková aglutinace
- Sklíčková aglutinace se používá k průkazu Ag (určování mikrobů pomocí antisér), například salmonely, shigely a enteropatogenní E.coli.
- Průkaz protilátek: Sklíčková aglutinace se také používá k průkazu protilátek.
- Widalova reakce: Používá se k průkazu protilátek u salmonelóz. Sérum se ředí a reakce probíhá přes noc. Odcit se provádí otáčením zkumavek a pozorováním víření aglutinátu.
- Další použití: Sklíčková aglutinace se používá i k průkazu protilátek proti yersiniím, listeriím, franciselám, brucelám (Wrightova reakce), ricketsiím (Weil-Felixova reakce) a proti leptospirám. U leptospir se provádí současně i lýza bakterií – „reakce aglutinace-lýzy“.
Hemaglutinace
- Hemaglutinace je reakce, kde Ag jsou erytrocyty.
- Paul-Bunnellova reakce: Používá se k průkazu heterofilních Ab (reagují s erytrocyty jiných živočišných druhů) u infekční mononukleózy.
Western blot
- Western blot je detekční metoda, která se používá k detekci a identifikaci specifických proteinů v biologických vzorcích.
- Krok 1: Příprava Ag: Proteiny se oddělují elektroforézou v polyakrylamidovém gelu a poté se přenesou na membránu (nitrocelulózová nebo PVDF).
- Krok 2: Detekce: Detekce specifických proteinů na membráně probíhá pomocí serologické reakce (jako ELISA v jamce).
- Využití: Western blot se používá k potvrzení HIV infekce, diagnostice borreliózy, hepatitid a dalších onemocnění.
Molekulární metody
- Molekulární metody se využívají k detekci a identifikaci infekčních agens na bázi nukleové kyseliny (DNA a RNA).
- Cíle: Definice principu molekulárních metod, popis principu metod (hybridizační, amplifikační, sekvenační), popis složek master mixu pro PCR.
- Sekvenování: Sekvenování DNA umožňuje určit pořadí nukleotidů (A, T, C, G) v úseku DNA.
- Princip: Při syntéze nového vlákna DNA dochází k ukončení (terminaci) syntézy v místě určitého nukleotidu. Vznikají tak nedokončené úseky komplementárního vlákna, jejichž délka se dá zjistit pomocí elektroforézy v gelu.
- Praktické provedení: Sekvenování probíhá ve čtyřech oddělených zkumavkách, v každé dochází k terminaci reakce v pozici jiného typu nukleotidu (A, T, C nebo G). Délka produktů v dráze odpovídá pozicím určitého typu nukleotidu v templátovém vlákně.
- Detekce: Detekce produktů sekvenování probíhá v kapilární elektroforéze, kde jsou nukleotidy značeny různými fluorescenčními barvami, a detekují se laserem.
- Využití: Sekvenování se používá k popisu genomu mikroorganismů, identifikaci mikroorganismů (porovnáním s databází), hledání mutací (detekce rezistence mikroorganismů), diagnostice vrozených vývojových vad, onemocnění na genetickém podkladě (Leidenská mutace, metabolická onemocnění) a v onkologii.
Molekulární metody v mikrobiologii
- Využití: Cílená detekce infekčního agens ve vzorku, stanovení kvantity infekčního agens, detekce genů pro rezistenci, sekvenace genomu mikroorganismů a epidemiologické charakteristiky (typizace kmenů).
Interpretace mikrobiologického nálezu
- Cíle: Popsat souvislosti interpretace, definovat možné chyby při interpretaci výsledků nepřímého průkazu.
- Dynamika protilátek: Změny hladin protilátek v průběhu onemocnění, vyšetření 2 vzorků séra.
- Anamnestické titry: Protilátky v organismu po prodělání onemocnění.
- Sérologické vyšetření: Slouží k určení, zda člověk prodělává onemocnění. Hodnotí se výše a dynamika titru protilátek (vzestup, pokles).
- Vzestup titru: Vzestup titru protilátek 4x svědčí pro infekci.
- Sérokonverze: První vzorek negativní, po 14 dnech pozitivní, svědčí pro infekci.
- Tvorba protilátek: V počátku onemocnění se většinou objevují IgM protilátky, později IgG protilátky.
- Vyšetření párových sér: Provádí se současně dva vzorky séra, čímž je vyloučena laboratorní chyba.
Faktory ovlivňující interpretaci
- Eetiopatogeneze choroby: Stadium a charakter onemocnění.
- Mikroorganismus: Například neprotilátková imunita (TBC) nebo napadení buněk imunitního systému (CMV, HIV).
- Stav imunitního systému pacienta: Věk, gravidita, imunitní poškození.
- Použité laboratorní metody: Citlivé reakce (ELISA, IF, neutralizace) – pozitivní dříve, méně citlivé reakce (KFR, aglutinace) – pozitivní nález svědčí pro čerstvou infekci.
- Revmatoidní faktor: Přítomnost IgM protilátek proti vlastním IgG. Komplex IgG-IgM může vést k falešně pozitivní reakci na přítomnost IgM.
Dozrávání imunitního systému
- Vývoj produkce imunoglobulinů: Po porodu se rozvíjí produkce imunoglobulinů.
- Dynamika protilátek: Varí se dle infekčního agens a průběhu onemocnění.
- Počáteční fáze: Po prvním kontaktu s antigenem vznikají IgM (i IgA) protilátky.
- Změna titru: První protilátky IgM (event.IgA) se ztratí během týdne až měsíce.
- IgG protilátky: Objevují se později, s pozvolným nástupem, a můžou přetrvávat dlouhou dobu.
Index pozitivity (IP)
- Vyjadřuje výsledky pomocí bezrozměrného čísla, kde se srovnává hodnota vzorku pacienta s hodnotou standardního séra.
- Hodnocení: IP < 0,9 – negativní, IP > 1,1 – pozitivní, IP = 0,9–1,1 – hraniční +/- 10 % kolem hodnoty standardního séra.
Laboratorní charakteristiky
- Senzitivita: Pravděpodobnost, že test bude pozitivní u nemocných. Vyšší senzitivita znamená méně falešně negativních výsledků.
- Specifita: Pravděpodobnost, že test bude negativní u zdravých. Vyšší specificita znamená méně falešně pozitivních výsledků.
- Laboratorní chyba: Chyba měření, která zahrnuje nepřesnosti pomůcek, zařízení, reagencií a lidský faktor.
Interpretace nálezů
- Interpretace musí být vždy spojena s klinickým stavem a s anamnézou pacienta.
- Nikdy se neléčí laboratorní nález, ale vždy nemoc pacienta.
- „Titritida“: Přítomnost protilátek sama o sobě neznamená nemoc.
- Řešení rozporů: Opakování testu, sledování vývoje, použití jiných metod.
Dynamika protilátek
- Příklad: Epstein-Barrové virus (EBV) a Toxoplasma gondii.
- Sérologické markery: Hepatitida A (VHA) a Hepatitida B (VHB).
Studying That Suits You
Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.
Description
Tento kvíz se zaměřuje na koncept aglutinace a její různé typy, včetně přímé a nepřímé aglutinace. Umožní vám otestovat vaše znalosti o reakcích antigenů a protilátek, jakož i o sklíčkové aglutinaci a jejím využití v diagnostice. Prověřte si, jak dobře chápete důležité detaily a aplikace těchto procesů.