Aglutinace a její typy

Podcast

Play an AI-generated podcast conversation about this lesson

Questions and Answers

Jaký je hlavní rozdíl mezi přímou a nepřímou aglutinací?

Přímá aglutinace se používá pro detekci protilátek.

Nepřímá aglutinace zahrnuje přirozeně přítomné Ag na částicích.

Nepřímá aglutinace se odvíjí od navázání Ag nebo Ab na nosiče. (correct)

Přímá aglutinace zahrnuje umělé navázání Ag na částice.

Který z následujících testů je použitý k průkazu protilátek u salmonelózy?

Paul-Bunnellova reakce.

Latexfixační test.

Weil-Felixova reakce.

Widalova reakce. (correct)

Jaký typ aglutinace se používá k určování mikrobů pomocí antisér?

Nepřímá aglutinace.

Koloidní aglutinace.

Hemaglutinace.

Sklíčková aglutinace. (correct)

Která reakce zahrnuje živé bakterie a jejich lýzu?

Reakce aglutinace-lýzy. Signup and view all the answers

Jaké jsou příklady Ag, které lze detekovat v likvoru nebo moči?

Meningokoky a streptokoky. Signup and view all the answers

Který test slouží k průkazu heterofilních protilátek u infekcí?

Paul-Bunnellova reakce. Signup and view all the answers

Co je charakteristické pro hemaglutinaci?

Ag jsou přirozeně součástí povrchových struktur erytrocytů. Signup and view all the answers

Jaký je účel latexfixačního testu?

Průkaz revmatoidního faktoru. Signup and view all the answers

Jaký je význam indexu pozitivity (IP) v serologických testech?

Pomáhá určit, zda je osoba nemocná na základě měření séra. Signup and view all the answers

Co způsobuje zvýšení senzitivity testu?

Možnost, že zdraví jedinci budou označeni za nemocné. Signup and view all the answers

Jaké fáze se zohledňují v laboratorních charakteristikách testů?

Preanalytická fáze, specificita a senzitivita metod. Signup and view all the answers

Jaký je vztah mezi specificitou a senzitivitou testu?

Vysoká senzitivita obvykle snižuje specificitu. Signup and view all the answers

Jaký faktor může nejvíce ovlivnit laboratorní chyby?

Nepřesnost pomůcek, zařízení a lidský faktor. Signup and view all the answers

Co je účelem gelové elektroforézy?

Separace proteinů podle jejich velikosti v polyakrylamidovém gelu Signup and view all the answers

Jaký je princip přenosu proteinů pomocí blottingu?

Přenos proteinů na membránu pomocí elektroproudu Signup and view all the answers

Jaký je nejčastěji používaný materiál pro blotovací membrány?

Nitrocelulóza nebo PVDF Signup and view all the answers

Jaká reakce se používá při detekci proteinů v rámci serologické analýzy?

Enzymatická reakce jako je ELISA Signup and view all the answers

Která z následujících metod se NEřadí mezi molekulární diagnostické metody?

Přímá mikroskopie Signup and view all the answers

Co je hlavním cílem hybridizačních metod?

Identifikace specifických nukleotidových sekvencí Signup and view all the answers

Jaké složky zahrnuje master mix pro PCR?

DNA polymerázu, primery a dNTPs Signup and view all the answers

Jaké je hlavní využití západní blottingové techniky?

Detekce specifických protilátek v séru Signup and view all the answers

Jaké použití má zesílení nukleových kyselin pomocí amplifikačních metod?

Zvýšení množství specifických sekvencí Signup and view all the answers

Jaké jsou charakteristické znaky rozdělení proteinů do bandů?

Proteiny se separují podle molekulové hmotnosti Signup and view all the answers

Co způsobuje terminaci syntézy při sekvenování DNA?

Přítomnost dideoxynukleotidu Signup and view all the answers

Jaký je přibližný rozsah délky sekvence, kterou lze určit v jedné sekvenační reakci?

400-900 nukleotidů Signup and view all the answers

Jakým způsobem se detekují nukleotidy během sekvenování?

Pomocí různých fluorescenčních barviv Signup and view all the answers

Jak bereme v úvahu délku produktů při sekvenování?

Dle pozic určitého typu nukleotidu v templátovém vlákně Signup and view all the answers

Jaký je význam sekvenačních technik mimo mikrobiologii?

Diagnostika vrozených vývojových vad Signup and view all the answers

Jaké informace lze získat pomocí molekulárních metod v mikrobiologii?

Identifikace infekčního agens Signup and view all the answers

Jaké jsou epidemiologické charakteristiky při sekvenování?

Typizace kmenů Signup and view all the answers

Jaké chyby mohou nastat při interpretaci výsledků nepřímého průkazu?

Chybné přítomnosti genů rezistence Signup and view all the answers

Jaký typ vlákna je templátový při sekvenování?

DNA vlákno Signup and view all the answers

Jakým způsobem lze měřit délku nedokončených úseků komplementárního vlákna?

Pomocí elektroforetické separace Signup and view all the answers

Jaký je obvyklý typ protilátek, které se první objevují po infekci?

IgM Signup and view all the answers

Jaká je dynamika titru protilátek při sérokonverzi?

Titry rostou o 4x v průběhu 14 dnů. Signup and view all the answers

Jaký význam má vyšetření párových sér?

Vyloučení laboratorních chyb. Signup and view all the answers

Jaký faktor může negativně ovlivnit výsledky sérologického vyšetření?

Přítomnost revmatoidního faktoru. Signup and view all the answers

Co zahrnuje ovlivňující faktory při hodnocení protilátek?

Všechny aspektí jako etiopatogeneze choroby, mikroorganismy a stav imunitního systému. Signup and view all the answers

Co signalizuje přítomnost IgM protilátek?

Aktuální infekci. Signup and view all the answers

Jak se mění hladiny protilátek v průběhu onemocnění?

Zahajují vzestup během prvních deseti dnů. Signup and view all the answers

Jaké laboratorní metody mohou být použity k detekci protilátek?

ELISA a KFR. Signup and view all the answers

Kdy se objevují protilátky v organismu po prodělání onemocnění?

Po 10 až 14 dnech. Signup and view all the answers

Jaký vliv má gravidita na imunitní systém pacienta?

Zeslabuje imunitní odpověď. Signup and view all the answers

Study Notes

Aglutinace

Aglutinace je reakce, která probíhá s antigeny (Ag) a protilátkami (Ab).
Přímá aglutinace: Ag jsou přirozeně součástí povrchu částic, např. antigeny krevních skupin.
Nepřímá aglutinace: Ag se uměle navazuje na povrch částic, např. latexové částice, erytrocyty.
Průkaz Ag: Nepřímá aglutinace se využívá k průkazu Ag, jako jsou meningokoky, streptokoky, pneumokoky a rotaviry v likvoru, séru, moči, sputu a stolici.
Průkaz protilátek: Nepřímá aglutinace se také používá k průkazu protilátek např. latexfixační testy pro revmatoidní faktor.

Sklíčková aglutinace

Sklíčková aglutinace se používá k průkazu Ag (určování mikrobů pomocí antisér), například salmonely, shigely a enteropatogenní E.coli.
Průkaz protilátek: Sklíčková aglutinace se také používá k průkazu protilátek.
Widalova reakce: Používá se k průkazu protilátek u salmonelóz. Sérum se ředí a reakce probíhá přes noc. Odcit se provádí otáčením zkumavek a pozorováním víření aglutinátu.
Další použití: Sklíčková aglutinace se používá i k průkazu protilátek proti yersiniím, listeriím, franciselám, brucelám (Wrightova reakce), ricketsiím (Weil-Felixova reakce) a proti leptospirám. U leptospir se provádí současně i lýza bakterií – „reakce aglutinace-lýzy“.

Hemaglutinace

Hemaglutinace je reakce, kde Ag jsou erytrocyty.
Paul-Bunnellova reakce: Používá se k průkazu heterofilních Ab (reagují s erytrocyty jiných živočišných druhů) u infekční mononukleózy.

Western blot

Western blot je detekční metoda, která se používá k detekci a identifikaci specifických proteinů v biologických vzorcích.
Krok 1: Příprava Ag: Proteiny se oddělují elektroforézou v polyakrylamidovém gelu a poté se přenesou na membránu (nitrocelulózová nebo PVDF).
Krok 2: Detekce: Detekce specifických proteinů na membráně probíhá pomocí serologické reakce (jako ELISA v jamce).
Využití: Western blot se používá k potvrzení HIV infekce, diagnostice borreliózy, hepatitid a dalších onemocnění.

Molekulární metody

Molekulární metody se využívají k detekci a identifikaci infekčních agens na bázi nukleové kyseliny (DNA a RNA).
Cíle: Definice principu molekulárních metod, popis principu metod (hybridizační, amplifikační, sekvenační), popis složek master mixu pro PCR.
Sekvenování: Sekvenování DNA umožňuje určit pořadí nukleotidů (A, T, C, G) v úseku DNA.
Princip: Při syntéze nového vlákna DNA dochází k ukončení (terminaci) syntézy v místě určitého nukleotidu. Vznikají tak nedokončené úseky komplementárního vlákna, jejichž délka se dá zjistit pomocí elektroforézy v gelu.
Praktické provedení: Sekvenování probíhá ve čtyřech oddělených zkumavkách, v každé dochází k terminaci reakce v pozici jiného typu nukleotidu (A, T, C nebo G). Délka produktů v dráze odpovídá pozicím určitého typu nukleotidu v templátovém vlákně.
Detekce: Detekce produktů sekvenování probíhá v kapilární elektroforéze, kde jsou nukleotidy značeny různými fluorescenčními barvami, a detekují se laserem.
Využití: Sekvenování se používá k popisu genomu mikroorganismů, identifikaci mikroorganismů (porovnáním s databází), hledání mutací (detekce rezistence mikroorganismů), diagnostice vrozených vývojových vad, onemocnění na genetickém podkladě (Leidenská mutace, metabolická onemocnění) a v onkologii.

Molekulární metody v mikrobiologii

Využití: Cílená detekce infekčního agens ve vzorku, stanovení kvantity infekčního agens, detekce genů pro rezistenci, sekvenace genomu mikroorganismů a epidemiologické charakteristiky (typizace kmenů).

Interpretace mikrobiologického nálezu

Cíle: Popsat souvislosti interpretace, definovat možné chyby při interpretaci výsledků nepřímého průkazu.
Dynamika protilátek: Změny hladin protilátek v průběhu onemocnění, vyšetření 2 vzorků séra.
Anamnestické titry: Protilátky v organismu po prodělání onemocnění.
Sérologické vyšetření: Slouží k určení, zda člověk prodělává onemocnění. Hodnotí se výše a dynamika titru protilátek (vzestup, pokles).
Vzestup titru: Vzestup titru protilátek 4x svědčí pro infekci.
Sérokonverze: První vzorek negativní, po 14 dnech pozitivní, svědčí pro infekci.
Tvorba protilátek: V počátku onemocnění se většinou objevují IgM protilátky, později IgG protilátky.
Vyšetření párových sér: Provádí se současně dva vzorky séra, čímž je vyloučena laboratorní chyba.

Faktory ovlivňující interpretaci

Eetiopatogeneze choroby: Stadium a charakter onemocnění.
Mikroorganismus: Například neprotilátková imunita (TBC) nebo napadení buněk imunitního systému (CMV, HIV).
Stav imunitního systému pacienta: Věk, gravidita, imunitní poškození.
Použité laboratorní metody: Citlivé reakce (ELISA, IF, neutralizace) – pozitivní dříve, méně citlivé reakce (KFR, aglutinace) – pozitivní nález svědčí pro čerstvou infekci.
Revmatoidní faktor: Přítomnost IgM protilátek proti vlastním IgG. Komplex IgG-IgM může vést k falešně pozitivní reakci na přítomnost IgM.

Dozrávání imunitního systému

Vývoj produkce imunoglobulinů: Po porodu se rozvíjí produkce imunoglobulinů.
Dynamika protilátek: Varí se dle infekčního agens a průběhu onemocnění.
Počáteční fáze: Po prvním kontaktu s antigenem vznikají IgM (i IgA) protilátky.
Změna titru: První protilátky IgM (event.IgA) se ztratí během týdne až měsíce.
IgG protilátky: Objevují se později, s pozvolným nástupem, a můžou přetrvávat dlouhou dobu.

Index pozitivity (IP)

Vyjadřuje výsledky pomocí bezrozměrného čísla, kde se srovnává hodnota vzorku pacienta s hodnotou standardního séra.
Hodnocení: IP < 0,9 – negativní, IP > 1,1 – pozitivní, IP = 0,9–1,1 – hraniční +/- 10 % kolem hodnoty standardního séra.

Laboratorní charakteristiky

Senzitivita: Pravděpodobnost, že test bude pozitivní u nemocných. Vyšší senzitivita znamená méně falešně negativních výsledků.
Specifita: Pravděpodobnost, že test bude negativní u zdravých. Vyšší specificita znamená méně falešně pozitivních výsledků.
Laboratorní chyba: Chyba měření, která zahrnuje nepřesnosti pomůcek, zařízení, reagencií a lidský faktor.

Interpretace nálezů

Interpretace musí být vždy spojena s klinickým stavem a s anamnézou pacienta.
Nikdy se neléčí laboratorní nález, ale vždy nemoc pacienta.
„Titritida“: Přítomnost protilátek sama o sobě neznamená nemoc.
Řešení rozporů: Opakování testu, sledování vývoje, použití jiných metod.

Dynamika protilátek

Příklad: Epstein-Barrové virus (EBV) a Toxoplasma gondii.
Sérologické markery: Hepatitida A (VHA) a Hepatitida B (VHB).

Studying That Suits You

Use AI to generate personalized quizzes and flashcards to suit your learning preferences.

Description

Tento kvíz se zaměřuje na koncept aglutinace a její různé typy, včetně přímé a nepřímé aglutinace. Umožní vám otestovat vaše znalosti o reakcích antigenů a protilátek, jakož i o sklíčkové aglutinaci a jejím využití v diagnostice. Prověřte si, jak dobře chápete důležité detaily a aplikace těchto procesů.