ADN Recombinante y sus Aplicaciones

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Questions and Answers

Cuál es el primer paso en el proceso de generación de ADN recombinante?

  • Aislamiento del gen de interés (correct)
  • Uso de enzimas de restricción
  • Inserción en un vector
  • Introducción en la célula huésped

Cuál de las siguientes afirmaciones sobre métodos químicos de transfección es correcta?

  • Se pueden utilizar con cualquier tipo celular
  • Tienen un rendimiento normalmente alto
  • No requieren la formación de precipitados
  • Utilizan fosfato cálcico y CaCl2 para facilitar la entrada de ADN (correct)

Cuál es una de las aplicaciones de los cultivos celulares derivados de tejidos animales?

  • Desarrollo de microorganismos resistentes a antibióticos
  • Biorremediación de ambientes contaminados
  • Fabricación de alimentos transgénicos
  • Transfección de células madre adultas para terapia génica ex vivo (correct)

Qué característica tienen los liposomas en el contexto de la transfección?

<p>Se fusionan con la membrana celular de células cargadas negativamente (D)</p> Signup and view all the answers

Cuál de las siguientes alternativas describe mejor el propósito del ADN recombinante?

<p>Introducir nuevas características o estudiar la función de genes específicos (C)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de las siguientes características se asocia con la microinyección en la transferencia de ADN recombinante?

<p>Requiere personal altamente cualificado. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es una de las limitaciones de la transferencia génica mediante virus?

<p>El tamaño del inserto que se puede encapsidar es reducido. (A)</p> Signup and view all the answers

¿Qué tipo de transfección se caracteriza porque el ADN exógeno se pierde gradualmente con la división celular?

<p>Transfección transitoria. (B)</p> Signup and view all the answers

En la biolística, ¿qué se utiliza para disparar las partículas de material genético?

<p>Presión de helio o descarga eléctrica de alto voltaje. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes métodos es menos invasivo en la transfección de células vegetales en comparación con la biolística?

<p>Transfección con Agrobacterium tumefaciens. (C)</p> Signup and view all the answers

¿Qué característica define a los organismos auxótrofos?

<p>Requieren compuestos específicos para sobrevivir. (D)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál es la función principal de la timidina quinasa (TK) en el contexto del uso de fármacos como ganciclovir?

<p>Convertir fármacos en formas tóxicas. (B)</p> Signup and view all the answers

Si un gen de interés se inserta en un sitio que interfiere con la lectura del gen lacZ, ¿cuál será el resultado en las colonias?

<p>Las colonias no producirán β-galactosidasa. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Cuál de los siguientes no es un componente del procedimiento para la generación de animales transgénicos?

<p>Crianza de especies salvajes. (B)</p> Signup and view all the answers

¿Qué enzima codifica el gen GUS y cuál es su función principal?

<p>β-glucuronidasa, para la escisión de β-glucurónidos. (A)</p> Signup and view all the answers

Flashcards

ADN Recombinante

Una molécula de ADN que ha sido creada artificialmente al combinar fragmentos de ADN de diferentes orígenes. Permite introducir nuevas características o estudiar la función de genes específicos en un organismo diferente.

Generación de ADN Recombinante

Proceso que implica aislar el gen de interés, insertarlo en un vector, usar enzimas para formar el ADN recombinante y luego introducirlo en una célula huésped.

Células Hospedadoras

Organismos como bacterias, levaduras y plantas superiores, incluyendo células, tejidos o individuos completos, que pueden ser utilizados para albergar ADN exógeno.

Sistemas de Transfección

Métodos que se usan para introducir el ADN exógeno en células en cultivo, como el fosfato cálcico, policationes o polímeros catiónicos, y liposomas. Cada método funciona de manera diferente, con ventajas y desventajas.

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Método del Fosfato Cálcico

Método que utiliza fosfato cálcico para transportar el ADN recombinante a las células, pero tiene un rendimiento limitado y no es compatible con todos los tipos celulares.

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Microinyección

Técnica de introducción directa de ADN recombinante en células huésped, utilizando una aguja para inyectar el material genético en el núcleo de la célula.

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Biolística

Método de transfección que utiliza partículas diminutas recubiertas de material genético para introducirlo en las células.

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Transferencia génica mediante virus

Transferencia de genes a través de virus modificados para que no sean patógenos, pero que puedan transportar el gen deseado a la célula huésped.

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Transfección estable

El ADN exógeno se integra en el ADN genómico de la célula huésped, lo que permite que el gen se transmita a la descendencia celular.

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Marcadores de selección

Utilizados para identificar células que han recibido el gen transferido, como antibióticos que solo permiten crecer a las células transformadas o genes que codifican proteínas detectables.

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Organismo auxótrofo

Un organismo que no puede sintetizar ciertos compuestos esenciales para su crecimiento debido a mutaciones en genes específicos. Estos organismos necesitan que el compuesto faltante esté presente en su medio de crecimiento para sobrevivir.

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Organismo protótrofo

Un organismo que puede sintetizar todos los compuestos esenciales necesarios para su crecimiento.

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Complementación de auxotrofías

Una técnica que involucra la introducción de una versión funcional del gen ausente o defectuoso en un organismo auxótrofo, generalmente mediante la inserción de un vector recombinante que contiene la copia correcta del gen.

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Timidina Quinasa (TK)

Una enzima que juega un papel crucial en el metabolismo de ciertos fármacos antivirales. Convertirá estos fármacos en formas tóxicas para los virus.

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Genes reporter

Genes que codifican enzimas que producen un producto de color, fluorescencia o bioluminiscencia, utilizados para detectar y rastrear la expresión de otros genes.

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Study Notes

ADN Recombinante

  • Molécula de ADN creada artificialmente combinando fragmentos de ADN de diferentes orígenes.
  • Permite introducir nuevas características o estudiar la función específica de genes.

Proceso para generar ADN recombinante

  • Aislamiento del gen de interés.
  • Inserción en un vector de clonación o expresión.
  • Uso de enzimas de restricción y ligasa para formar la molécula de ADN recombinante.
  • Introducción en la célula huésped.

Células hospedadoras de ADN exógeno

  • Microorganismos: bacterias y levaduras.
  • Plantas superiores: células o tejidos de cultivo o individuos adultos completos.

Usos del ADN recombinante

  • Desarrollo de alimentos transgénicos.
  • Producción de proteínas terapéuticas.
  • Biorremediación (uso de microorganismos, hongos, o enzimas para restaurar un medio alterado).

Sistemas de transfección (entrega de genes)

  • Métodos químicos:
    • Fosfato cálcico: ADN y cloruro de calcio forman un precipitado que entra en la célula (endocitosis). Bajo rendimiento.
    • Policationes o polímeros catiónicos: Policationes que interactúan con ADN y facilitan la entrada celular por endocitosis. Pueden ser tóxicos.
  • Métodos físicos:
    • Electroporación: Se utilizan campos eléctricos para crear poros en la membrana celular que permiten la entrada de ADN.
    • Nucleofección: variante de electroporación para células difíciles de transfectar.
    • Microinyección: Introducción directa de ADN en el núcleo celular mediante una micropipeta.
    • Biolística: Disparo de partículas cubiertas con ADN a células diana.
  • Métodos biológicos:
    • Transferencia génica mediante virus: El gen se integra en el genoma viral, infectar la célula.

Métodos de selección de células recombinantes (transfectadas)

  • Ciertas células solo sobreviven si contienen el nuevo AND.
  • Marcadores de selección: resistencias a antibióticos o auxotrofía complementación.
    • Antibióticos: crecimiento selectivo.
    • Genes indicadores (reporter): producción de un producto adicional detectable.

Cultivos 3D o organotípicos

  • Estructuras de células crecidas en 3D para replicar tejidos originales.
  • Usado para imitar la función de órganos (piel, cerebro, etc.) con tejidos o embriones.
  • Utilizan materiales biodegradables (p.ej., Ácido poliglicólico (PGA) y Ácido poliláctico (PLA)).

Hibridación somática

  • Fusión de células de diferentes orígenes, conserva parte de los cromosomas.

Co-cultivos

  • Cultivos que tienen más de un tipo de célula o tejido para estudiar la interacción entre las células.
  • Imitan los sistemas complejos del cuerpo.

Ingeniería Tisular Funcional

  • Ingeniería de tejidos que usa células y materiales.
  • Para el trasplante o promoción de la regeneración de tejidos en el paciente por ejemplo, o para tratamientos.

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