ארגון חיים, קיבוע פורמלין ואוטוליזיס

• התא הוא יחידת החיים הקטנה ביותר, וכל היצורים החיים מורכבים מתאים.
• גוף האדם מכיל כ-100 טריליון תאים, המחולקים לכ-200 סוגים.
• רקמה נוצרת מקבוצת תאים הפועלים יחד בתפקיד משותף. קיימות 4 רקמות: אפיתל, שריר, חיבור ועצב.
• איבר נוצר מצבר של רקמות, ובגוף קיימים כ-80 איברים שונים.
• מערכת נוצרת מאוסף של איברים, וכל המערכות יחד יוצרות גוף.
• אנטומיה: עוסקת במבנה האיברים בגוף.
• פיזיולוגיה: עוסקת בתפקוד האיברים בגוף.
• היסטולוגיה (תורת הרקמות): מגשרת בין אנטומיה ופיזיולוגיה.

מיקרוסקופ אור

• מאפשר הגדלה (זום-אין).
• רזולוציה: יכולת הפרדה הנמדדת ביחידות מרחק.
• הרזולוציה קובעת את המרחק המינימלי שבו ניתן להבחין בין שני גופים נפרדים.
• הגדלה מועילה רק כאשר הרזולוציה מספיק טובה כדי להבחין במרכיבי התאים.
• רזולוציה של 0.2 מיקרומטר מאפשרת לראות אברונים גדולים כמו גרעין וגרעינון.
• אברונים קטנים יותר כגון מיטוכונדריה וליזוזום יהיו פחות ברורים, אלא אם כן הם נמצאים בכמות גבוהה.
• גרעין אאוכרומטי: בהיר יותר עקב כרומטין פתוח ונגיש יותר, ולכן פעיל יותר.
• גרעין הטרוכרומטי: כהה יותר, סגור יותר וכנראה פחות פעיל.
• מיקרוסקופ אלקטרונים מאפשר לראות אברונים קטנים יותר.
• ניתן לחקור תתקינים של חיות בקלות יחסית עקב גודלם הזמין.
• תתקינים מחיות מודל זמינים ובריאים יותר מתתקינים של בני אדם.
• התתקין צריך להיות דק כדי שהאור יוכל לעבור דרכו.

שלבי הכנת תתקין

1. פיקסציה (fixation):
   • מניעת אוטוליזיס (פירוק עצמי) על ידי נטרול אנזימים מפרקים.
   • עצירת תהליכים דינמיים ופתולוגיים ברקמה באמצעות הקפאה מיידית.
   • קיבוע באמצעות פורמלין: יצירת קשרים קוולנטיים בין חלבונים בתא.
   • דנ"א ורנ"א מקובעים באמצעות אסוציאציה לחלבונים (כרומטין וריבוזומים).
   • סוכרים ופוספוליפידים לא עוברים קיבוע.
   • הקפאה היא שיטת קיבוע מהירה המתאימה לניתוחים, אך פחות איכותית מקיבוע באמצעות פורמלין.
2. הטמעה (Embedding):
   • הקשיית הרקמה כדי שניתן יהיה לחתוך אותה לפרוסות דקות.
   • הקשייה נפוצה באמצעות פרפין (שעווה) בטמפרטורה נמוכה (50 מעלות) למזעור נזקים.
   • יש לבצע דהידרציה (הוצאת מים) בתהליך הדרגתי עם אלכוהול כדי שהשעווה תוכל לחדור לתאים.
   • קיים חומר נוסף בשם 4JB אך הוא קשה יותר מפרפין ומאפשר חיתוכים מדויקים יותר.
3. חיתוך (microtome sectioning):
   • חיתוך הדגימה לפרוסות דקות באמצעות מכשיר מיוחד.
4. השטחה (flattening):
   • תיקון פני השטח של החיתוך באמצעות חימום באמבט מים חמים ומאפשר לשים את המשטח בעדינות על הזכוכית.
5. צביעה (staining):
   • מאפשרת לקבל תמונה מדויקת באמצעות שימוש בצבעים מתאימים.
   • המטוקסילין (H): צבען כחול בסיסי הצובע חומצות גרעין ורנ"א.
   • אאוזין (E): צבען ורוד חומצי הצובע חלבונים.
   • צביעה משמאל מתארת ריר סוכרים במערכת הנשימה (תאי סיליה מפרישים) כאשר לא רואים סוכרים כלל בצביעה דומה
   • כדי לזהות מאקרופגים (תאים בולעניים), מזריקים צבען גרגירי לווריד העכבר.

ארטיפקט

• דבר מלאכותי או תקלה הנגרמים על ידי אדם במהלך הכנת התתקין.
• לעיתים קרובות ניתן לתקן או לצפות אותם.
• ארטיפקט בשלב הפיקסציה: שינוי נפחי ברקמת עצב
• ארטיפקט בשלב ה-embedding: אובדן של חומרים מסיסים במים ובשומן, מביאים לתאי שומן ריקים

ארטיפקט בשלב החיתוך

• חיתוך אלמנט תלת ממדי לפרוסה דקה מאוד הופכת אותו לדו-ממדי
• ארטיפקט בשלב הצביעה: יש להעריך את סוג הצביעה שבוצעה ואת המידע שאפשר לקבל ממנה.
• ארטיפקטים לא צפויים עלולים להתרחש ברקמת הדם
• אלמנט שכיח בגוף האדם הוא צינורות וכיוון החיתוך שלהם משפיע משמעותית על הבנת מבנה הרקמה
• גם לאחר ההשטחה, עדיין יכולים להישאר קפלים.
• לעיתים רבות עלול להופיע קיפול כפול או יותר.