Clinical Laboratory PDF

Dr. Radhwan Asal Clinical laboratory Introduction: A central function of the chemical pathology or clinical chemistry laboratory is to provide biochemical information for the management of patients. Such information will be of value only if it is accurate and relevant, and if its significance...

Dr. Radhwan Asal Clinical laboratory Introduction: A central function of the chemical pathology or clinical chemistry laboratory is to provide biochemical information for the management of patients. Such information will be of value only if it is accurate and relevant, and if its significance is appreciated by the clinician so that it can be used appropriately to guide clinical decision making. ‫تتمثل إحدى الوظائف األساسية خملتبر علم األمراض الكيميائية أو الكيمياء السريرية ف توفير‬ ‫ وإذا كان الطبيب يقدر أهميتها بحيث ميكن‬,‫ لن تكون هذه املعلومات ذات قيمة إال إذا كانت دقيقة وذات صلة‬.‫املعلومات الكيميائية احليوية إلدارة املرضى‬.‫استخدامها بشكل مناسب لتوجيه عملية اتخاذ القرار السريري‬ Why laboratory tests are ordered?  To screen for disease (screening tests as ESR, CBC) (CBC‫ و‬ESR ‫للكشف عن املرض )اختبارات الفحص مثل‬  To confirm a diagnosis ‫لتأكيد التشخيص‬ ‫الستبعاد املرض احملتمل ولكن غير احملتمل‬  To exclude a disease that is possible but not likely  To aid differential diagnosis, e.g. to distinguish between different forms of jaundice..‫ على سبيل املثال للتمييز بي أشكال مختلفة من اليرقان‬,‫للمساعدة ف التشخيص التفريقي‬  To assess the severity of disease, e.g. plasma [urea] or [creatinine] in renal disease..‫ على سبيل املثال البالزما ]اليوريا[ أو ]الكرياتيني[ ف مرض الكلى‬,‫لتقييم شدة املرض‬  To determine risk factors for disease as lipid profile ‫لتحديد عوامل اخلطر للمرض مثل ملف الدهون‬  To monitor progress of disease, e.g. plasma glucose to follow of patients with diabetes..‫ قياس نسبة اجللوكوز ف البالزما لدى املرضى املصابي مبرض السكري‬,‫ على سبيل املثال‬,‫ملراقبة تقدم املرض‬  To monitor effectiveness of disease treatment as in case of anticoagulant therapy..‫ملراقبة فعالية عالج املرض كما ف حالة العالج مبضادات التخثر‬  To detect complications or side-effects of drugs e.g. aminotransferase measurements in patients being treated with hepatotoxic drugs..‫للكشف عن املضاعفات أو اآلثار اجلانبية لألدوية مثل قياسات أمينوترانسفيراز ف املرضى الذين يتلقون العالج باألدوية السامة للكبد‬ Use of Biochemical Tests: Biochemical tests are used extensively in medicine, both in relation to diseases that have an obvious metabolic basis (e.g. diabetes mellitus, hypothyroidism) and those in which biochemical changes are a consequence of the disease (e.g. renal failure, mal absorption). Biochemical tests are used in diagnosis, prognosis, monitoring and screening. Biochemical tests are used in: 1. Diagnosis ‫ التشخيص‬.1 ‫ سواء فيما يتعلق باألمراض التي لها‬,‫تُستخدم االختبارات الكيميائية احليوية على نطاق واسع ف الطب‬ ‫ وقصور الغدة الدرقية( أو تلك التي تكون فيها التغيرات‬,‫أساس أيضي واضح )مثل داء السكري‬ 2. Prognosis ‫ التشخيص‬.2 ‫ تُستخدم االختبارات‬.(‫ وسوء االمتصاص‬,‫الكيميائية احليوية نتيجة للمرض )مثل الفشل الكلوي‬ 3. Monitoring ‫ املراقبة‬.3 :‫ تُستخدم االختبارات الكيميائية احليوية ف‬.‫الكيميائية احليوية ف التشخيص والتنبؤ واملراقبة والفحص‬ 4. Screening ‫ الفحص‬.4 Page 1 of 13  ‫يعتمد التشخيص الطبي على تاريخ املريض‪ ,‬إن وجد‪ ,‬والعالمات السريرية التي ت اكتشافها أثناء الفحص‪ ,‬ونتائج التحقيقات‪ ,‬وأحيانًا‪ ,‬بأثر رجعي‪ ,‬على االستجابة‬ ‫للعالج‪.‬وف كثير من األحيان‪ ,‬ميكن إجراء تشخيص واثق على أساس التاريخ املرضي جنبًا إلى جنب مع النتائج التي ت التوصل إليها أثناء الفحص‪.‬وف حالة عدم‬ ‫حدوث ذلك‪ ,‬فمن املمكن عادةً صياغة تشخيص تفريقي‪ ,‬ف الواقع قائمة قصيرة من التشخيصات احملتملة‪.‬ومن املمكن بعد ذلك استخدام التحقيقات الكيميائية‬ ‫احليوية وغيرها للتمييز بينها‪.‬وقد يتم اختيار التحقيقات للمساعدة إما ف تأكيد التشخيص أو دحضه‪ ,‬ومن املهم أن يقدر الطبيب مدى فائدة االختبار اخملتار لهذه‬ ‫األغراض‪.‬إن إجراء التشخيص‪ ,‬حتى لو كان غير مكتمل‪ ,‬مثل تشخيص نقص سكر الدم دون معرفة سببه‪ ,‬قد يسمح ببدء العالج‪.‬‬ ‫‪1.‬‬ ‫‪Diagnosis:‬‬ ‫‪Medical diagnosis is based on the patient's history, if available, the clinical signs‬‬ ‫‪found on examination, the results of investigations and sometimes,‬‬ ‫‪retrospectively, on the response to treatment. Frequently, a confident‬‬ ‫‪diagnosis can be made on the basis of the history combined with the findings‬‬ ‫‪on examination. Failing this, it is usually possible to formulate a differential‬‬ ‫‪diagnosis, in effect a short list of possible diagnoses. Biochemical and other‬‬ ‫‪investigations may then be used to distinguish between them. Investigations‬‬ ‫‪may be selected to help either confirm or refute a diagnosis, and it is important‬‬ ‫‪that the clinician appreciates how useful the chosen test is for these purposes.‬‬ ‫‪Making a diagnosis, even if incomplete, such as a diagnosis of hypoglycaemia‬‬ ‫‪without knowing its cause, may allow treatment to be initiated.‬‬ ‫قد توفر االختبارات املستخدمة ف املقام األول للتشخيص أيضًا معلومات تشخيصية‪ ,‬ويستخدم بعضها خصيصًا لهذا الغرض; على سبيل املثال‪ ,‬تُستخدم القياسات املتسلسلة لتركيز الكرياتيني ف البالزما ف مرض‬ ‫الكلى التدريجي لإلشارة إلى متى قد يكون غسيل الكلى ضروريًا‪.‬ميكن لالختبارات أيضًا أن تشير إلى خطر اإلصابة بحالة معينة; على سبيل املثال‪ ,‬يزداد خطر اإلصابة مبرض الشريان التاجي مع زيادة تركيز‬ ‫الكوليسترول ف البالزما‪.‬ومع ذلك‪ ,‬يتم حساب هذه اخملاطر من البيانات الوبائية وال ميكنها تقدي تنبؤ دقيق لفرد معي‪.‬‬ ‫‪2.‬‬ ‫‪Prognosis‬‬ ‫‪Tests used primarily for diagnosis may also provide prognostic information and‬‬ ‫‪some are used specifically for this purpose; for example, serial measurements‬‬ ‫‪of plasma creatinine concentration in progressive renal disease are used to‬‬ ‫‪indicate when dialysis may be required. Tests can also indicate the risk of‬‬ ‫‪developing a particular condition; for example, the risk of coronary artery‬‬ ‫‪disease increases with increasing plasma cholesterol concentration. However,‬‬ ‫‪such risks are calculated from epidemiological data and cannot give a precise‬‬ ‫قد توفر االختبارات املستخدمة ف املقام األول للتشخيص أيضًا معلومات تشخيصية‪ ,‬ويستخدم بعضها ‪prediction for a particular individual.‬‬ ‫خصيصًا لهذا الغرض; على سبيل املثال‪ ,‬تُستخدم القياسات املتسلسلة لتركيز الكرياتيني ف البالزما ف مرض الكلى التدريجي لإلشارة إلى متى قد يكون غسيل الكلى ضروريًا‪.‬ميكن لالختبارات‬ ‫أيضًا أن تشير إلى خطر اإلصابة بحالة معينة; على سبيل املثال‪ ,‬يزداد خطر اإلصابة مبرض الشريان التاجي مع زيادة تركيز الكوليسترول ف البالزما‪.‬ومع ذلك‪ ,‬يتم حساب هذه اخملاطر من البيانات‬ ‫‪3.‬‬ ‫‪Monitoring‬‬ ‫الوبائية وال ميكنها تقدي تنبؤ دقيق لفرد معي‪.‬‬ ‫‪A major use of biochemical tests is to follow the course of an illness and to‬‬ ‫‪monitor the effects of treatment. To do this, there must be a suitable analyte,‬‬ ‫‪for instance glycated haemoglobin in patients with diabetes mellitus.‬‬ ‫‪Biochemical tests can also be used to detect complications of treatment, such‬‬ ‫‪as hypokalaemia during treatment with diuretics, and are extensively used to‬‬ ‫‪screen for possible drug toxicity, particularly in trials, but also in some cases‬‬ ‫إن أحد االستخدامات الرئيسية لالختبارات الكيميائية احليوية هو متابعة مسار املرض ومراقبة آثار العالج‪when a drug is in established use..‬‬ ‫وللقيام بذلك‪ ,‬يجب أن يكون هناك محلل مناسب‪ ,‬على سبيل املثال الهيموجلوبي السكري ف املرضى املصابي بداء السكري‪.‬ميكن أيضًا‬ ‫استخدام االختبارات الكيميائية احليوية للكشف عن مضاعفات العالج‪ ,‬مثل نقص بوتاسيوم الدم أثناء العالج مبدرّات البول‪ ,‬وتُستخدم على نطاق‬ ‫‪4.‬‬ ‫‪Screening‬‬ ‫واسع للكشف عن السمية احملتملة لألدوية‪ ,‬وخاصة ف التجارب‪ ,‬ولكن أيضًا ف بعض احلاالت عندما يكون الدواء قيد االستخدام‪.‬‬ ‫‪Biochemical tests are widely used to determine whether a condition is present‬‬ ‫‪sub clinically. The best-known example is the mass screening of all new-born‬‬ ‫‪babies for phenylketonuria (PKU), which is carried out in many countries,‬‬ ‫تُستخدم االختبارات الكيميائية احليوية على نطاق واسع لتحديد ما إذا كانت احلالة موجودة حتت‬ ‫السريرية‪.‬وأشهر مثال على ذلك هو الفحص الشامل جلميع األطفال حديثي الوالدة للكشف عن بيلة ‪including the UK and the USA.‬‬ ‫الفينيل كيتون )‪ ,(PKU‬والذي يتم إجراؤه ف العديد من البلدان‪ ,‬مبا ف ذلك اململكة املتحدة‬ ‫‪Page 2 of 13‬‬ ‫والواليات املتحدة‪.‬‬ Test request The sample for analysis must be collected and transported to the laboratory according to a specified procedure if the data are to be of clinical value. This procedure begins with the test request form, which should include: Patient’s name, sex and date of birth Hospital number (if appropriate) ward Clinic/address Name of requesting doctor (telephone/page number for urgent requests). Clinical diagnosis/problem Test requested Type of specimen Date and time of sampling Relevant treatment (e.g. drugs). ‫يجب جمع العينة املراد حتليلها ونقلها إلى اخملتبر وفقًا إلجراء محدد إذا كانت البيانات ذات قيمة‬ :‫ والذي يجب أن يتضمن‬,‫ يبدأ هذا اإلجراء بنموذج طلب االختبار‬.‫سريرية‬ ‫ اسم املريض وجنسه وتاريخ ميالده‬ (‫ رقم املستشفى )إذا كان ذلك مناسبًا‬ ‫عنوان القسم‬/‫ عيادة‬.(‫الصفحة للطلبات العاجلة‬/‫ اسم الطبيب الطالب )رقم الهاتف‬ ‫املشكلة‬/‫ التشخيص السريري‬ ‫ االختبار املطلوب‬ ‫ نوع العينة‬ ‫ تاريخ ووقت أخذ العينة‬.(‫ العالج املناسب )مثل األدوية‬ Page 3 of 13  The sample provided must be appropriate for the test requested. Most biochemical analyses are made on serum or plasma, but occasionally whole blood is required (e.g. for 'blood gases'), and analyses of urine, cerebrospinal fluid, pleural fluid, etc. can also be valuable. For most analyses on serum or plasma, either fluid is acceptable but in some instances it is of critical importance which of these is used; for example, serum some analytes are affected by variables such as posture, time of day, etc. and it may be necessary to standardize the conditions under which the sample is obtained. ,("‫ ولكن ف بعض األحيان يكون الدم الكامل مطلوبًا )على سبيل املثال "لغازات الدم‬,‫ جتُرى معظم التحاليل الكيميائية احليوية على املصل أو البالزما‬.‫يجب أن تكون العينة املقدمة مناسبة لالختبار املطلوب‬ ‫ ولكن ف بعض احلاالت‬,ً‫ يكون أي من السائلي مقبوال‬,‫ بالنسبة ملعظم التحاليل على املصل أو البالزما‬.‫ وما إلى ذلك مفيدة أيضًا‬,‫ والسائل اجلنبي‬,‫ والسائل النخاعي‬,‫كما ميكن أن تكون حتاليل البول‬ ,‫ وما إلى ذلك‬,‫ والوقت من اليوم‬,‫ تتأثر بعض املواد احملللة ف املصل مبتغيرات مثل الوضع‬,‫يكون من األهمية مبكان حتديد أيهما يُستخدم; على سبيل املثال‬ Sources of Error.‫وقد يكون من الضروري توحيد الظروف التي يتم احلصول على العينة مبوجبها‬ Errors can occur at various stages in the process: :‫ميكن أن حتدث األخطاء ف مراحل مختلفة من العملية‬ 1. Pre-analytical: occurring outside the laboratory, e.g. the wrong specimen being collected, mislabelling, incorrect preservation, etc. ‫ وما إلى ذلك‬,‫ أو احلفظ غير الصحيح‬,‫ أو وضع العالمات اخلاطئة‬,‫ جمع العينة‬,‫ على سبيل املثال‬,‫ يحدث خارج اخملتبر‬:‫ ما قبل التحليل‬.1 2. Analytical: occurring within the laboratory, e.g. human or instrumental error..‫ مثل اخلطأ البشري أو اخلطأ اآللي‬,‫ يحدث داخل اخملتبر‬:‫ حتليلي‬.2 3. Post-analytical: whereby a correct result is generated but is incorrectly recorded in the patient's record, e.g. because of a transcription error..‫ على سبيل املثال بسبب خطأ ف النسخ‬,‫ حيث يتم إنشاء نتيجة صحيحة ولكن يتم تسجيلها بشكل غير صحيح ف سجل املريض‬:‫ ما بعد التحليل‬.3 Laboratory Procedures Laboratory procedures divided into three stages: ‫اإلجراءات املعملية مقسمة إلى ثالث مراحل‬ 1. Pre-analytical stage: which covers the following:  Reading the request form..‫ قراءة منوذج الطلب‬:‫ والتي تشمل ما يلي‬:‫ مرحلة ما قبل التحليل‬.1 Page 4 of 13   Recording the patient data and medical history..‫تسجيل بيانات املريض والتاريخ الطبي‬  Preparation of the patient..‫حتضير املريض‬  Collection and transport of the specimen..‫جمع ونقل العينة‬ 2. Analytical stage: which covers the following: :‫ والتي تشمل ما يلي‬:‫ املرحلة التحليلية‬.2  Checks the test method, the reagents, standards, and control materials..‫ ومواد التحكم‬,‫ واملعايير‬,‫ والكواشف‬,‫التحقق من طريقة االختبار‬  Checks the equipment and instruments used..‫التحقق من املعدات واألدوات املستخدمة‬  Perform the test and calculate the results..‫إجراء االختبار وحساب النتائج‬ :‫ يجب أن يتضمن تقرير نتيجة االختبار ما يلي‬:‫ مرحلة ما بعد التحليل‬.3 3. Post-analytical stage: Reporting the test result must include:  Test name and type of specimen analysed..‫اسم االختبار ونوع العينة التي ت حتليلها‬  Test results clearly..‫نتائج االختبار بشكل واضح‬  The measurement unit and reference range (Review the range with the age and sex)..(‫وحدة القياس ونطاق املرجع )راجع النطاق مع العمر واجلنس‬  The comment if found Interpretation of test results to follow if the result is seriously abnormal or unexpected..‫التعليق إذا وجد تفسير لنتائج االختبار يجب اتباعه إذا كانت النتيجة غير طبيعية أو غير متوقعة بشكل خطير‬ Specimen Collection Specimens used for biochemical analyses: :‫العينات املستخدمة ف التحليالت الكيميائية احليوية‬  Venous blood, serum or plasma  Arterial blood  Capillary blood  Blood spot on a filter paper (Guthrie Card)  Urine  Faeces  Cerebrospinal fluid (CSF)  Sputum and saliva  Tissue and cells  Aspirates, e.g. pleural fluid, ascites, joint (synovial) fluid, intestinal (duodenal), pancreatic pseudocysts  Calculi (stones) ‫الدم‬ ‫الدم الشرياني‬ ‫الدم الوريدي أو املصل أو البالزما‬ (‫بقعة دم على ورق الترشيح )بطاقة غوثري‬ ‫الشعري‬ ‫البلغم‬ (CSF) ‫السائل النخاعي‬ ‫البراز‬ ‫البول‬ ‫ مثل‬,‫السوائل الطالئية‬ ‫األنسجة واخلاليا‬ ‫واللعاب‬ ,(‫ والسائل املفصلي )الزليلي‬,‫ واالستسقاء‬,‫السائل اجلنبي‬ ‫ واألكياس الكاذبة البنكرياسية احلصوات‬,(‫واألمعاء )االثني عشر‬ Page 5 of 13  ‫ إذا ت جمع الدم ف أنبوب‬.‫ يتم احلصول على عينة مصل بعد الطرد املركزي‬,‫إذا ت جمع الدم ف أنبوب عادي وتركه يتجلط‬.‫ يسمى السائل العلوي بالبالزما‬,‫ عند الطرد املركزي‬.‫يحتوي على مضاد للتخثر مثل الهيبارين‬ Blood specimens If blood is collected into a plain tube and allowed to clot, after centrifugation a serum specimen is obtained. If the blood is collected into a tube containing an anticoagulant such as heparin. When centrifuged, the supernatant is called ‫ سينتج األنبوب‬.(‫حتتوي معظم أنابيب جمع الدم على مادة مضافة تعمل إما على تسريع تخثر الدم )منشط التخثر( أو منع تخثر الدم )مضاد التخثر‬ plasma. ‫ وسينتج األنبوب الذي يحتوي على مضاد للتخثر عينة‬,‫الذي يحتوي على منشط تخثر عينة مصل عندما يتم فصل الدم عن طريق الطرد املركزي‬ ‫ وتتطلب اختبارات أخرى دمًا كامالً مضادًا‬,‫ ويتطلب بعضها البالزما‬,‫ تتطلب بعض االختبارات استخدام املصل‬.‫بالزما بعد الطرد املركزي‬ Specimen Collection Tubes ‫ يسرد اجلدول أدناه أنابيب جمع الدم األكثر استخدامًا‬.‫للتخثر‬ Most blood collection tubes contain an additive that either accelerates clotting of the blood (clot activator) or prevents the blood from clotting (anticoagulant). A tube that contains a clot activator will produce a serum sample when the blood is separated by centrifugation and a tube that contains an anticoagulant will produce a plasma sample after centrifugation. Some tests require the use of serum, some require plasma, and other tests require anticoagulated whole blood. The table below lists the most commonly used blood collection tubes. EDTA (Purple) EDTA prevents clotting by chelating calcium, an essential component of coagulation. This is your basic hematology tube (by which I mean identifying and counting blood cells, blood typing etc). Plasma stored from EDTA blood can also be used to measure most proteins, and genetic material can easily be stored from EDTA buffy coats (the interface between the red cells and the ‫ هذا هو أنبوب علم الدم األساسي اخلاص بك )أعني بذلك حتديد خاليا‬.‫ وهو مكون أساسي للتخثر‬,‫ التجلط عن طريق استخالص الكالسيوم‬EDTA ‫مينع‬ ‫ وميكن تخزين املواد الوراثية بسهولة‬,‫ لقياس معظم البروتينات‬EDTA ‫ ميكن أيضًا استخدام البالزما اخملزنة من دم‬.(‫ وتصنيف الدم وما إلى ذلك‬,‫الدم وحسابها‬ Page 6 of 13.(‫ )الواجهة بي خاليا الدم احلمراء واخلاليا اللمفاوية‬EDTA ‫من أغلفة‬.K3EDTA ‫ أو‬K2EDTA ‫ حتتوي هذه األنابيب إما على‬:‫ مالحظة‬.‫ حتتوي على خاليا بيضاء وصفائح دموية‬,‫البالزما بعد الطرد املركزي‬ plasma after centrifugation, containing white cells and platelets). Note: these tubes contain either K2EDTA or K3EDTA. Sodium Citrate (Light Blue) For coagulation and platelet function tests. Like EDTA, citrate acts by removing calcium from the blood. Unlike EDTA, it’s reversible – so calcium can be added back to study coagulation under controlled conditions. Citrated plasma is also used to measure coagulation-relevant factors. It’s worth noting that a citrate tube should not be the first type of tube filled after venepuncture – the first few mL of blood drawn will be a bit activated. If you only need citrate for your project, then you should collect a discard tube first. Also, note that different concentrations of citrate are available from different companies. ‫ لذلك ميكن‬- ‫ فهو قابل للعكس‬,EDTA ‫ على عكس‬.‫ يعمل السترات عن طريق إزالة الكالسيوم من الدم‬,EDTA ‫ مثل‬.‫الختبارات التخثر ووظائف الصفائح الدموية‬ ‫ جتدر اإلشارة إلى‬.‫ كما تستخدم البالزما احملتوية على السترات لقياس العوامل ذات الصلة بالتخثر‬.‫إضافة الكالسيوم مرة أخرى لدراسة التخثر ف ظل ظروف خاضعة للرقابة‬ ‫ إذا كنت حتتاج فقط إلى‬.ً‫ سيتم تنشيط أول بضعة مل من الدم املسحوب قليال‬- ‫أن أنبوب السترات ال ينبغي أن يكون أول نوع من األنابيب اململوءة بعد بزل الوريد‬.‫ الحظ أيضًا أن تركيزات مختلفة من السترات متوفرة من شركات مختلفة‬.ً‫ فيجب عليك جمع أنبوب التخلص منه أوال‬,‫السترات ملشروعك‬ Lithium/Sodium Heparin (Green) Similar in use to serum clot activator tubes, but suitable for tests in plasma rather than serum. Like the serum tubes, heparin tubes can also come with a separating gel. Heparin acts by inhibiting thrombin formation. Note: if your endgame is PCR, you should know that heparin is particularly known to interfere with PCR reactions..‫ ولكنها مناسبة لالختبارات ف البالزما وليس املصل‬,‫تشبه ف االستخدام أنابيب منشطات تخثر الدم ف املصل‬ ‫ إذا كان هدفك النهائي هو تفاعل البوليميراز‬:‫ مالحظة‬.‫ يعمل الهيبارين عن طريق تثبيط تكوين الثرومبي‬.‫ ميكن أن تأتي أنابيب الهيبارين أيضًا مع هالم فاصل‬,‫مثل أنابيب املصل‬ Sodium Fluoride (Grey).‫ فيجب أن تعلم أن الهيبارين معروف بشكل خاص بالتداخل مع تفاعالت تفاعل البوليميراز املتسلسل‬,‫املتسلسل‬ Sodium fluoride is an anti-glycolytic agent, so these tubes are used for glucose and lactate testing. They also contain an anticoagulant (there are different types available). ‫ كما حتتوي على مادة‬.‫ لذا تُستخدم هذه األنابيب الختبار اجللوكوز والالكتات‬,‫يُعد فلوريد الصوديوم عامالً مضادًا لتحلل اجللوكوز‬.(‫مضادة للتخثر )تتوفر أنواع مختلفة منها‬ Acid Citrate Dextrose – ACD (Yellow) These ones are not common, but they are used for blood and tissue typing and DNA analysis..‫ ولكنها تستخدم ف حتليل الدم واألنسجة وحتليل احلمض النووي‬,‫هذه ليست شائعة‬ For plasma: For plasma samples, blood should be cooled and centrifuged as soon as possible and separated immediately after centrifuging then plasma transferred to a clean tube. For serum: The blood samples are allowed to clot at 37 °C. for about 30 minute blood samples then centrifuged and serum should be separated from clot and transferred to a clean tube. ‫ يجب تبريد الدم وطرده ف أسرع وقت ممكن وفصله فورًا بعد‬,‫ بالنسبة لعينات البالزما‬:‫بالنسبة للبالزما‬.‫الطرد املركزي ثم نقل البالزما إلى أنبوب نظيف‬ Page 7 of 13.‫ ثم يتم طرد عينات الدم وفصل املصل عن اجللطة ونقلها إلى أنبوب نظيف‬,‫ دقيقة تقريبًا‬30 ‫ درجة مئوية ملدة‬37 ‫ يُسمح لعينات الدم بالتجلط عند‬:‫بالنسبة للمصل‬ Note Centrifuging for 5 minutes at about 1000 g is adequate to obtain serum or plasma.‫ جرام تقريبًا كافٍ للحصول على مصل أو بالزما‬1000 ‫ دقائق بسرعة‬5 ‫ الطرد املركزي ملدة‬:‫مالحظة‬ Various reasons for specimen rejection include: :‫تشمل األسباب اخملتلفة لرفض العينة ما يلي‬ 1. Hemolysis / lipemia ‫ شحميات الدم‬/ ‫ انحالل الدم‬.1 2. Clots present in an anticoagulated specimen ‫ وجود جلطات ف عينة مضادة للتخثر‬.2‫أ‬ 3. Non fasting specimen when test requires fasting ‫ عينة غير صائمة عندما يتطلب االختبار الصيام‬.3 4. Improper blood collection tube ‫ أنبوب جمع الدم غير املناسب‬.4 ‫ حجم العينة غير مناسب‬.5 5. wrong sample volume (‫ ظروف النقل غير املناسبة )كما ف غازات الدم‬.6 6. Improper transport conditions (as in blood gases) ‫ عينة غير مصنفة أو مصنفة بشكل خاطئ‬.7 7. Unlabelled or mislabelled specimen 8. A specimen is unsuitable for testing because it has been stored incorrectly, or is too long in transit before it reaches the laboratory. 9. Blood sample is taken from an arm in which an intravenous (IV) infusion is running..‫ أو أنها استغرقت وقتًا طويالً ف النقل قبل أن تصل إلى اخملتبر‬,‫ العينة غير مناسبة لالختبار ألنها ت تخزينها بشكل غير صحيح‬.8.‫ يتم أخذ عينة الدم من ذراع يتم فيه ضخ الدم عن طريق الوريد‬.9 Techniques and Instruments Spectrophotometry: It is defined as the use of the visible and UV portions of light spectrum for measurement of concentration. The light that can be visualized by the human eye represents a narrow wavelength band (380–700 nm) between ultraviolet (UV) and infrared (IR) radiation The visible spectrum can further be subdivided according to color, red, orange, yellow, green, blue and violet. Red light is at the longer wavelength end (lower energy) and violet light at the shorter wavelength end (higher energy). :‫القياس الطيفي‬.‫يتم تعريفه على أنه استخدام أجزاء الطيف املرئي واألشعة فوق البنفسجية من طيف الضوء لقياس التركيز‬ ‫ نانومتر( بي األشعة فوق البنفسجية‬700-380) ‫ميثل الضوء الذي ميكن للعي البشرية رؤيته نطاقًا ضيقًا من الطول املوجي‬ ‫ األحمر والبرتقالي واألصفر واألخضر‬,‫ ميكن تقسيم الطيف املرئي أيضًا وفقًا للون‬.(IR) ‫( واألشعة حتت احلمراء‬UV) ‫ يقع الضوء األحمر عند الطرف األطول من الطول املوجي )طاقة أقل( والضوء البنفسجي عند الطرف‬.‫واألزرق والبنفسجي‬.(‫األقصر من الطول املوجي )طاقة أعلى‬ Page 8 of 13 Photometric measurement it means the use of light for measurement of the concentration of a substance in solution ‫القياس الضوئي يعني استخدام الضوء لقياس تركيز مادة ف احمللول‬ Photometry also known as colorimetric; it is defined as the use of only the visible portion of light spectrum for measurement of concentration ‫القياس الضوئي املعروف أيضًا باسم القياس اللوني; يتم تعريفه على أنه استخدام اجلزء املرئي فقط من طيف الضوء لقياس التركيز‬ Absorbance and Transmittance Absorbance is the measure of the quantity of light that a sample absorb (neither transmits nor reflects) and is proportional to the concentration of a substance in a solution..‫االمتصاص هو مقياس كمية الضوء التي متتصها العينة )ال تنقلها وال تعكسها( وتتناسب مع تركيز املادة ف احمللول‬ The absorbance of a solution depends on: :‫تعتمد امتصاصية احمللول على‬ 1. Nature of substance 2. Concentration of substance ‫ طبيعة املادة‬.1 3. Wavelength of light ‫ تركيز املادة‬.2 4. Path of light ‫ طول موجة الضوء‬.3 ‫ مسار الضوء‬.4 Optical density (OD) The O.D. is used the same as absorbance and directly proportional to the concentration of the coloured compound. As Concentration (C) increases, light Absorption (A) increases, linearly ‫ مع‬.‫ بنفس طريقة االمتصاص ويتناسب بشكل مباشر مع تركيز املركب امللون‬OD ‫يتم استخدام‬ ‫ خطيًا‬,(A) ‫ يزداد امتصاص الضوء‬,(C) ‫زيادة التركيز‬ Transmittance The transmittance of a sample is the ratio of the intensity of the light that has passed through the sample to the intensity of the light when it entered the sample and displayed as a percentage (%T) (T%) ‫نفاذية العينة هي نسبة شدة الضوء الذي مر عبر العينة إلى شدة الضوء عند دخوله العينة ويتم عرضها كنسبة مئوية‬ Page 9 of 13 Relationship between absorbance and Transmittance A = -log T = - log (I1 / Io) So, if all the light passes through a solution without any absorption, then absorbance is zero, and percent transmittance is 100%. If all the light is absorbed, then percent transmittance is zero, and absorption is infinite ‫ إذا‬.%100 ‫ ونسبة النفاذية تساوي‬,‫ فإن االمتصاص يساوي صفرًا‬,‫ إذا مر كل الضوء عبر احمللول دون أي امتصاص‬,‫لذا‬.‫ واالمتصاص ال نهائي‬,‫ فإن نسبة النفاذية تساوي صفرًا‬,‫ت امتصاص كل الضوء‬ Page 10 of 13 Low of absorbance The Beer Law It states that the intensity of light transmitted by a colored solution decrease as the concentration increase. The absorbance of a solute is directly proportional to the concentration of a solution ‫ امتصاص‬.‫تنص على أن شدة الضوء املنبعث من احمللول امللون تقل مع زيادة التركيز‬ ‫املذاب يتناسب طرديًا مع تركيز احمللول‬ The Lambert law It states that the intensity of light transmitted by a colored solution decrease as the path of light increase. The absorbance of a solute is directly proportional to the path of light ‫ امتصاص املذاب يتناسب طرديًا مع‬.‫تنص على أن شدة الضوء املنقول بواسطة محلول ملون تقل مع زيادة مسار الضوء‬ ‫مسار الضوء‬ The Beer Lambert Law Also known as Beer's law where the two laws are usually combined together and used in all absorption analysis ‫يُعرف أيضًا باسم قانون بير حيث يتم عادةً دمج القانوني معًا واستخدامهما ف جميع حتليالت االمتصاص‬ A: is the absorbance C: is the concentration of the compound in solution, expressed in mol L -1 b: the path length of the cuvette in which the sample is contained expressed in cm ‫ طول مسار‬:‫ ب‬1 - ‫لتر‬/‫ معبرًا عنه باملول‬,‫ هو تركيز املركب ف احمللول‬:‫ هو االمتصاص ج‬:‫أ‬ Page 11 of 13 ‫الكوفيت الذي حتتوي عليه العينة معبرًا عنه بالسنتيمتر‬ ϵ: is the molar absorptivity with units of L mol-1 cm-1 ϵ: ‫ هي االمتصاصية املولية بوحدات‬L 1-‫ سم‬1-‫مول‬ What we mean by the molar absorptivity? ?‫ماذا نعني باالمتصاصية املولية‬ The molar absorptivity, is a measurement of how strongly a chemical species absorbs light at a given wavelength..‫االمتصاصية املولية هي مقياس ملدى قوة امتصاص نوع كيميائي للضوء عند طول موجي معي‬ Colorimetric method Colorimetric analysis is a method to analyze a color. In this case a specific reagent is used to react with a specific component in the serum and a colored complex is formed which is directly proportional to the concentration of the compound in the serum. ‫ ف هذه احلالة يتم استخدام كاشف محدد للتفاعل مع مكون محدد ف‬.‫التحليل اللوني هو طريقة لتحليل اللون‬.‫املصل ويتكون مركب ملون يتناسب بشكل مباشر مع تركيز املركب ف املصل‬ Requirements of colorimetric Analysis In colorimetric assays three tubes should be prepared as follow: Reagent blank: which contain the reagents only (without any test or standard substance) and used to set instrument at zero absorbance (Any color given by the reagents used in the analysis can be detected and eliminated) Standard solution: it is a substance identical to the test solution with a known concentration (it is different from an assay to another according to the measured parameter) Test solution: This contains the unknown concentration of the substance together with the reagents used in the test. :‫ف االختبارات اللونية يجب حتضير ثالثة أنابيب على النحو التالي‬ ‫ حتتوي على الكواشف فقط )بدون أي اختبار أو مادة قياسية( وتستخدم لضبط اجلهاز على امتصاص صفري )ميكن‬:‫عينة فارغة من الكاشف‬ ‫ هو مادة مطابقة حمللول االختبار بتركيز معروف‬:‫اكتشاف أي لون يتم إعطاؤه بواسطة الكواشف املستخدمة ف التحليل وإزالته( احمللول القياسي‬ Calculations.‫ يحتوي على التركيز غير املعروف للمادة مع الكواشف املستخدمة ف االختبار‬:‫)يختلف من اختبار إلى آخر وفقًا للمعلمة املقاسة( محلول االختبار‬ Calculation of sample concentration can be done by two methods: Using standard concentration: :‫ استخدام التركيز القياسي‬:‫ميكن إجراء حساب تركيز العينة بطريقتي‬ Using calibration curve Slandered calibration curve are obtained by measuring the absorbance of a series of standard solutions. After a series of standard solutions are analyzed a graph of absorbance versus concentration is drawn and it will be a linear relationship..‫باستخدام منحنى املعايرة يتم احلصول على منحنى املعايرة املشوه عن طريق قياس امتصاص سلسلة من احملاليل القياسية‬.‫بعد حتليل سلسلة من احملاليل القياسية يتم رسم رسم بياني لالمتصاص مقابل التركيز وستكون العالقة خطية‬ Page 12 of 13  Solutions of unknown concentration are tested for absorbance; these absorbance results are read from the curve to determine concentration..‫يتم اختبار محاليل ذات تركيز غير معروف من حيث االمتصاص; ويتم قراءة نتائج االمتصاص هذه من املنحنى لتحديد التركيز‬ Note: each slandered solution should be prepared in the same way as solution being measured..‫ يجب حتضير كل محلول مخلوط بنفس الطريقة التي يتم بها حتضير احمللول الذي يتم قياسه‬:‫ملحوظة‬ Why colorimetric method is not suitable for enzyme assays? As the reaction proceeds with time more amount of the product is formed and since the end product inhibit the enzyme so its activity decrease and no linear curve is obtained. What we mean by the detection limit? It is the lowest concentration or quantity of an analyte that is detected within reasonable certainty for a given analytical procedure What we mean by the result interference? This term describes the unwanted effect of a compound other than the analyte in question on the accuracy of measurement of the analylte for example blood hemolysis may interfere. *** Good Luck *** ?‫ملاذا ال تصلح الطريقة اللونية لتحليالت اإلنزي‬.‫مع تقدم التفاعل مع الوقت تتكون كمية أكبر من املنتج ومبا أن املنتج النهائي يثبط اإلنزي فإن نشاطه يقل وال يتم احلصول على منحنى خطي‬ ?‫ماذا نعني بحد الكشف‬ ?‫هو أقل تركيز أو كمية من احمللل يتم اكتشافها ضمن درجة يقي معقولة إلجراء حتليلي معي ماذا نعني بتداخل النتيجة‬.‫يصف هذا املصطلح التأثير غير املرغوب فيه ملركب غير احمللل املعني على دقة قياس احمللل على سبيل املثال قد يتداخل انحالل الدم‬ Page 13 of 13