Streptococcus Microbiology Notes (PDF)

‫به نام خدا‬ ‫‪Yasuj University of‬‬ ‫‪Medical Science‬‬ ‫‪STREPTOCOCCUS‬‬ ‫دکتر راضیه دهبانی پور‬ ‫گروه میکروب شناسی دانشکده پزشکی‬ ‫دانشگاه علوم پزشکی یاسوج‬ ‫‪STREPTOCOCCUS‬‬ ‫ کوکسی گرم مثبت ( دوتایی یا چندتایی زنجیره ای)...

‫به نام خدا‬ ‫‪Yasuj University of‬‬ ‫‪Medical Science‬‬ ‫‪STREPTOCOCCUS‬‬ ‫دکتر راضیه دهبانی پور‬ ‫گروه میکروب شناسی دانشکده پزشکی‬ ‫دانشگاه علوم پزشکی یاسوج‬ ‫‪STREPTOCOCCUS‬‬ ‫ کوکسی گرم مثبت ( دوتایی یا چندتایی زنجیره ای)‬ ‫ کاتاالز منفی (عامل تمایز از استافیلوکوکوس ها)‬ ‫ کلنی های کوچک‪ ،‬شفاف تا کمی مات و کروی‬ ‫ بیهوازی اختیاری (برخی سویه ها به ‪ CO2‬نیاز دارند)‬  ‫طبقه بندی استرپتوکوکوس ها‬ ‫‪ ‬طبقه بندی النسفیلد‪ :‬رده بندی استرپتوکک ها بر اساس نوع پلی‬ ‫ساکارید موجود در دیواره سلولی‬ ‫‪ ‬گروه ‪ : A‬استرپتوکوکوس پیوژن‬ ‫‪ ‬گروه ‪ : B‬استرپتوکوکوس آگاالکتیه‬ ‫‪ ‬گروه ‪ : C‬استرپتوکوکوس دیس آگاالکتیه‬ ‫‪ ‬گروه ‪ : D‬انتروکوک ها (انتروکوکوس فکالیس‪ ،‬انتروکوکوس‬ ‫فسیوم) و غیر انتروکوک ها (استرپتوکوکوس بویس)‬ ‫‪ ‬غیر قابل تیپ بندی‪ :‬گروه ویریدانس و استرپتوکوکوس پنومونیه‬  ‫شناسایی استرپتوکک ها‬ ‫‪ -1‬روش میکروسکوپی‪:‬‬ ‫استرپتوکک ها در رنگ آمیزی گرم به صورت کوکسی های‬ ‫گرم مثبت دو تایی یا زنجیره های کوتاه و بلند دیده می شوند‬ ‫استرپتوکوکوس‬ ‫پنومونیه‬ ‫‪.‬‬ ‫استرپتوکوکوس‬ ‫پیوژن‬  ‫‪ -2‬تست کاتاالز (تست کلیدی برای افتراق از استافیلوکک ها)‬ ‫ کاتاالز قادر است در سلول باکتری با شکستن پروکسید هیدروژن که یک‬ ‫ترکیب سمی تولید شده توسط آنزیم سوپراکسید دسیموتاز است‪ ،‬ترکیبات‬ ‫مفیدی مثل ‪ O2‬و ‪ H2O‬را تولید کند‪.‬‬ ‫‪H2O2 Catalase‬‬ ‫ ‪2H2O + O2‬‬ ‫‪ ‬روش کار‪:‬‬ ‫ از محیط کشت فاقد خون و جوان (‪ 18 – 24‬ساعت) توسط لوپ (ترجیحا‬ ‫میله چوبی) چند کلونی برداشته و روی الم قرار می دهیم‪.‬‬ ‫ چند قطره (‪ )3 - 5‬از محلول ‪ H2O2 3%‬روی کلونی ها می ریزیم‪.‬‬  ‫ جواب تست مثبت‪ :‬باکتری با شکستن ‪ H2O2‬تولید آب و گاز‬ ‫‪O2‬‬ ‫می کند که تولید گاز اکسیژن به صورت ایجاد حباب هایی بر‬ ‫روی‬ ‫الم کامال مشخص است‪.‬‬ ‫ جواب تست منفی‪ :‬باکتری توانایی شکستن ‪ H2O2‬و درنتیجه‬ ‫تولید آب و حباب های ناشی از گاز ‪ O2‬را ندارد‪.‬‬ ‫ نکته‪ :‬خون دارای کاتاالز است و میتواند باعث جواب مثبت کاذب‬ ‫شود‪.‬‬ ‫شناسایی استرپتوکک ها‬ ‫‪ -3‬کشت‪:‬‬ ‫‪ ‬بالد آگار و شکالت آگار‬  ‫تست های افتراقی استرپتوکوکوس ها‬ ‫بررسی‬ ‫همولیز‬ ‫ﺣﺴﺎﺳﻴﺖ ﺑﻪ‬ ‫تست حساسیت به‬ ‫ﺑﺎﺳﻴﺘﺮﺍﺳﻴﻦ ﻭ ‪SXT‬‬ ‫اپتوچین‬ ‫تست‬ ‫بایل‬ ‫اسکولین‬ ‫‪CAMP‬‬  ‫ استرپتوکوک های گروه ‪ : A‬استرپتوکوک پایوژنز (بتا همولیتیک‪ ،‬تست‬ ‫‪ PYR‬مثبت‪ ،‬حساس به باسیتراسین‪ ،‬مقاوم به ‪)SXT‬‬ ‫ استرپتوکوک های گروه ‪ : B‬استرپتوکوک آگاالکتیه (بتا همولیتیک‪ ،‬تست‬ ‫هیدرولیز هیپورات مثبت‪ ،‬تست ‪ CAMP‬مثبت‪ ،‬مقاوم به باسیتراسین‪،‬‬ ‫مقاوم به ‪)SXT‬‬ ‫ استرپتوکوک های گروه ‪ : D‬انتروکوک فکالیس (فاقد همولیز یا همولیز‬ ‫آلفا‪ ،‬هیدرولیز اسکولین‪ ،‬رشد در حضور ‪ 6/5%‬نمک‪ ،‬تست ‪ PYR‬مثبت)‬ ‫استرپتوکوک بوویس (فاقد همولیز‪ ،‬عدم توانایی رشد در حضور ‪،NaCl‬‬ ‫تجزیه نشاسته)‬ ‫ استرپتوکوک ویریدانس‪ :‬همولیز آلفا‪ ،‬فاقد همولیز‪ ،‬مقاوم به اپتوچین‪،‬‬ ‫حالل در صفرا‪ ،‬تخمیر کربوهیدرات ها‬ ‫ استرپتوکوک پنومونیه‪ :‬همولیز آلفا‪ ،‬حساس به اپتوچین‪ ،‬حالل در‬ ‫صفرا‪ ،‬واکنش کواالنگ مثبت‬  ‫تست بررسی همولیز ‪4-‬‬ ‫ ‪ – β‬همولیتی`ک ‪ :‬تخ`ریب کام`ل اریتروس`یت ه`ا (گلبوله`ای قرم`ز) و پاکس`ازی‬ ‫(̀اگز̀وتوکس`ین‬ ‫`‬ ‫ف مح`ل`̀رش`د`ب`̀اکتری` ت̀وس`ط آن`ز̀یم`اس`ت̀رپتو̀لی̀زین‬ ‫خ`̀ون`̀اط`ر̀ا `‬ ‫ی و د̀رن̀تیج`ه ایج`اد`ی`ک ̀هال`ه ش`فاف`د̀ر‬ ‫ه̀مول`یزین`اس`ترپ̀ت̀وکوکوس)`ب`اکتر `‬ ‫اطراف کلونی ها در محیط بالد آگار‬ ‫ ‪ – α‬همولیتی`ک ‪ :‬تخ`ریب ناکام`ل اریتروس`یت ه`ا و احی`ای هموگل`وبین توس`ط‬ ‫آب`̀اکس`یژنه ` `( ‪̀ )`H2O2‬و تب`دیل`̀ه̀موگل`وب̀ین`ب`ه`مت`ه̀م̀وگل`وبین`̀و د̀ر̀نتیج`ه‬ ‫ل ̀به س`ب̀ز د̀ر اط`راف ک̀لونی ̀ها‬ ‫تول̀ید`رنگدا̀نه ̀های س`̀بز ̀و ای̀جاد ̀یک ه̀ا̀له ̀متما̀ی `‬ ‫در محیط بالد آگار‬ ‫ ‪ – γ‬همولیتی`ک (غیرهمولیتی`ک) ‪ :‬ع`دم تخ`ریب اریتروس`یت ه`ا و درنتیج`ه ع`دم‬ ‫ایجاد هاله در اطراف کلونی ها در محیط بالد آگار‬  ‫تست های افتراقی‬ ‫آلفا همولیتیک‬ ‫بتا همولیتیک‬ ‫ تست حساسیت به اپتوچین‬ ‫ حساسیت به باسیتراسین‬ ‫ تست بایل اسکولین‬ ‫ تست کمپ‬ ‫ تست تحمل نمک‬ ‫آلفا همولیتیک‬ ‫غیر همولیتیک‬ ‫ تست بایل اسکولین‬ ‫ تست تحمل نمک‬  ‫‪ -6‬تست ﺣﺴﺎﺳﻴﺖ ﺑﻪ ﺑﺎﺳﻴﺘﺮﺍﺳﻴﻦ ﻭ ‪SXT‬‬ ‫ برای افتراق استرپ بتاهمولیتیک گروه ‪ A‬از استرپ بتا‬ ‫همولیتیک گروه ‪B‬‬ ‫ گروه ‪ A‬به باسیتراسین حساس است و به ‪ SXT‬مقاوم‬ ‫است‬ ‫ گروه ‪ B‬به هر دو مقاوم است‬ ‫‪ ‬روش کار‪:‬‬ ‫ ﮐﻠﻨﯽ اﯾﺰوﻟﻪ اﺳﺘﺮ ﭘﺘﻮﮐﻮك ﺑﺘﺎﻫﻤﻮﻟﯿﺘﯿﮏ را در وﺳﻂ ﯾﮏ ﭘﻠﯿﺖ‬ ‫ﺑﻼدآﮔﺎر ﻗﺮار داده و ﺳﭙﺲ ﺑﺎ ﯾﮏ ﺳﻮاب ﯾﺎ ﻟﻮپ اﺳﺘﺮﯾﻞ آن را‬ ‫ﺑﻄﻮر ﯾﮑﻨﻮاﺧﺖ روي ﭘﻠﯿﺖ ﮐﺸﺖ ﻣﯽ دﻫﯿﻢ ‪.‬‬  ‫تست ﺣﺴﺎﺳﻴﺖ ﺑﻪ ﺑﺎﺳﻴﺘﺮﺍﺳﻴﻦ ﻭ ‪SXT‬‬ ‫را ‪ ،‬روي‬ ‫ ﯾﮏ دﯾﺴﮏ ﺑﺎﺳﯿﺘﺮاﺳﯿﻦ و ﯾﮏ دﯾﺴﮏ ‪SXT‬‬ ‫ﻧﺎﺣﯿﻪ ﮐﺸﺖ داده ﺷﺪه ﻗﺮار ﻣﯽ دﻫﯿم‬ ‫ ﺑﺎﯾﺪ ﺗﻮﺟﻪ ﻧﻤﻮد ﮐﻪ دﯾﺴﮏ ﻫﺎ از یکدﯾﮕﺮ ﻓﺎﺻﻠﻪ داﺷﺘﻪ‬ ‫ﺑﺎﺷند‬ ‫ پلیت را دردمای ‪ 37‬قرار داده‬ ‫‪ :‬هاله ﻋﺪم رﺷﺪ در اﻃﺮاف دﯾﺴﮏ ﻫﺎ‬ ‫ ﺣﺴﺎس‬ ‫ مقاوم‪ :‬رشد تا لبه دیسک ها‬  ‫‪ -8‬تست ‪CAMP‬‬ ‫ برا ﻲ ﺷﻨﺎﺳﺎیی و افتراق ﺍﺳﺘﺮﭘﺘﻮﻛﻮﻙ ﮔﺮﻭﻩ‪B‬‬ ‫(آﮔﺎﻻﻛﺘیه) ﺍﺯ ﺳﺎﻳﺮ استرپتوکوک ها‬ ‫ ﺍﺳﺘﺮﭘﺘﻮﻛﻮﻙ های گروه‪ B‬ﭘﺮﻭﺗئین ﺧﺎﺭﺝ ﺳﻠﻮلی ﺑﻪ‬ ‫ﺗﺮﺷﺢ ﻣﻲ ﻧﻤﺎﻳند ﻛﻪ ﺑﺎ ﺑﺘﺎ‬ ‫ﻧﺎﻡ ‪CAMP factor‬‬ ‫ﻟﻴﺰﻳﻦ ﺍﺳﺘﺎﻓﻴلوکوکوس اورئوس بصورت‬ ‫ﺳﻴﻨﺮﮊیک ﻋمل ﻧﻤﻮﺩه ﻭ ﺳﺒﺐ ﺍﻓﺰﺍﻳﺶ ﻟﻴﺰ ﮔﻠﺒﻮﻝ‬ ‫ﻫﺎﻱ ﻗﺮﻣﺰ ﺧﻮﻥ ﻣﻲ ﺷﻮد‬  ‫‪CAMP‬‬ ‫ﻣﺴﺘﻘﻴﻢ ﺍﺯ ﺍﺳﺘﺎ‬ ‫تست‬ ‫ﻳﻚ ﺧﻂ‬ ‫روش کار‬ ‫ﺑﻼﺩﺁﮔﺎﺭ‬ ‫‪‬ﺍﺑﺘﺪﺍ ﺩﺭ ﻭﺳﻂ ﭘﻠﻴﺖ‬ ‫فیلوﻛﻮ کوس ﺍﻭ ﺭﺋﻮﺱ ﻣﻮﻟﺪ ﺑﺘﺎ ﻟﻴﺰﻳﻦ ﺭﺍ ﻛﺸﺖ ﻣﻲ‬ ‫ﺩﻫﻴﻢ‪.‬‬ ‫‪ ‬ﺳﭙﺲ ﺍﺳﺘﺮﭘﺘﻮﻛﻮﻙ ﻣﻮﺭﺩ ﻧﻈﺮ ﺭﺍ ﻋﻤﻮﺩ ﺑﺮ ﺧﻂ‬ ‫ﻛﺸﺖ ﺍﺳﺘﺎ ﻓ ﻴﻠﻮﻛﻮﻙ ﺍﻭ ﺭﺋﻮﺱ به فاصله ‪٤- ٣‬‬ ‫ﻣﻴلیمتری ﻛﺸﺖ داده (ﺑﻄﻮﺭﻳﻜﻪ ﺍﻳﻦ ﺩﻭ ﺑﺎ ﻫﻢ ﺑﺮﺧﻮﺭﺩ‬ ‫ﻭ ﺗﺪﺍﺧﻞ ﻧﻜﻨﻨﺪ)‬ ‫‪ ‬پس از ‪ 24‬ساعت انکوباسیون در دمای ‪ 37‬درجه‬ ‫سانتی گراد در تقاطع کلنی ها همولیز به طور‬ ‫مشخص تشدید می شود(ناحیه پیکانی شکل از‬ ‫روش کار تست ‪CAMP‬‬  ‫اپتوچین تداخل در فعالیت‬ ‫بیوتیکبهاست که با‬ ‫حساسیت‬ ‫تست‬ ‫یک آنتی‬ ‫ ‪-9‬‬ ‫اپتوچین‬ ‫‪ ATPase‬موجب مهار تولید ‪ ATP‬در باکتری های حساس می‬ ‫شود‪.‬‬ ‫ استرپتوکوکوس پنومونیه تنها استرپتوکوکوسی است که‬ ‫نسبت به غلظت کم اپتوچین حساس است درنتیجه می‬ ‫توان از تست حساسیت به اوپتوچین با غلظت کم بعنوان‬ ‫یک تست کلیدی برای شناسایی این باکتری استفاده کرد‪.‬‬  ‫روش کار تست حساسیت به اپتوچین‬ ‫ ابتدا چند کلونی از باکتری را بر روی محیط بالد‬ ‫آگار بصورت چمنی یا بصورت ‪ Streak‬کشت می‬ ‫دهیم‪.‬‬ ‫ سپس دیسک ‪ 5‬میکروگرمی اوپتوچین را روی کشت‬ ‫قرار داده و در دمای ‪ 35‬درجه سانتیگراد و شرایط‬ ‫‪ % Co2 7- 5‬به مدت ‪ 24‬ساعت انکوبه می کنیم‪.‬‬  ‫روش کار تست حساسیت به اپتوچین‬ ‫ در صورتیکه اندازه دیسک ‪ 6‬میلیمتر باشد هاله عدم رشد با‬ ‫قطر ‪ 14‬میلیمتر و بیشتر بعنوان حساس درنظر گرفته می‬ ‫شود‬ ‫ در صورتیکه اندازه دیسک ‪ 10‬میلیمتر باشد هاله عدم رشد‬ ‫با قطر ‪ 16‬میلیمتر و بیشتر بعنوان حساس درنظر گرفته‬ ‫می شود‪.‬‬  ‫‪ -11‬تست هیدرولیز اسکولین صفراوی (بایل‬ ‫اسکولین)‬ ‫ تست هیدرولیز بایل اسکولین جهت تمایز استرپتوکوک های گروه ‪ D‬و انتروکوک‬ ‫ها از دیگر کوکسی های گرم مثبت کاربرد دارد‪.‬‬ ‫ استرپتوکوک های گروه ‪ D‬و انتروکوک ها توانایی رشد در حضور ‪ %40‬صفرا‬ ‫(سدیم د اکسی کوالت) و هیدرولیز اسکولین به اسکولیتین را دارند‪.‬‬ ‫ اسکولیتین تولیدی توسط این باکتری ها در محیط کشت پخش شده و پس از‬ ‫ترکیب با فریک سیترات (اندیکاتور)‪ ،‬موجب ایجاد یک کمپلکس سیاه رنگ می‬ ‫شود‪.‬‬ ‫ محیط کشت مورد استفاده برای انجام این تست‪ ،‬محیط بایل اسکولین آگار‬ ‫است‪.‬‬  ‫روش کار تست هیدرولیز اسکولین صفراوی‬ ‫اب̀تدا از ک̀لونی ه`ای رش`د ̀کرده ̀بر روی بالد آ̀گار ̀یک ̀یا چ̀ند ک̀لونی را برداش`ته و در مح̀یط‬ ‫ ‬ ‫کشت` ̀با̀یل اس̀کولین` آگ̀ار (̀د̀ر پل̀یت یا بص̀ورت ش`یبدا̀ر در`لول̀ه) ت̀لقیح می کنیم‪.‬‬ ‫انکوباسیون به مدت ‪ 18 – 24‬ساعت در دمای ‪ 35‬درجه سانتیگراد‬ ‫ ‬ ‫‪ ‬پاس`خ مثبت تس`ت در ̀مدت ‪ 4‬س`اعت انکو̀به ̀گذاری حاص`ل می ش`ود ا̀ما ̀برای بررس`ی پاس`خ‬ ‫̀منفی بای̀د پس ̀از ‪ 24‬ساعت`انکوباسیون ̀نتیجه بررسی`گردد‪.‬‬ ‫جواب تس`ت مثبت‪ :‬ای̀جاد ر̀نگ س`یاه در بیش از نیمی از بخش ش`یبدار مح̀یط و ̀یا ای̀جاد ̀یک‬ ‫ ‬ ‫ف کل`ونی` ب`̀اکت̀ری ̀د̀ر `محی`ط `پ̀لیت `نش`انده̀نده ̀هی`درول̀یز ب̀ای`ل‬ ‫گ `̀در `اط`̀ر̀ا `‬ ‫̀هال`ه س`̀ی̀اه رن` `‬ ‫اسکولین و پاسخ مثبت است‪.‬‬ ‫̀جواب تس`ت منفی‪̀ :‬عدم رش`د ̀باکتری ̀یا رش`د ̀بدون ای̀جاد ر̀نگ س`یاه در محیط‪.‬‬ ‫ ‬ ‫تست هیدرولیز اسکولین صفراوی (بایل‬ ‫اسکولین)‬  ‫‪ -12‬تست تحمل نمک‬ ‫‪‬تست کلیدی برای جداسازی انتروکوک ها از گروه ‪ D‬غیر‬ ‫انتروکوکی‬ ‫‪‬روش کار‪:‬‬ ‫‪ ‬تلقیح باکتری در لوله آبگوشت ‪Brain Heart Infusion‬‬ ‫حاوی ‪ %6.5‬کلرید سدیم‬ ‫‪ ‬انکوباسیون شبانه در ‪ 37‬درجه سانتیگراد‬ ‫‪ ‬نتیجه مثبت‪ :‬رشد یا وجود کدورت (انتروکوکو گروه ‪)D‬‬ ‫‪ ‬نتیجه منفی‪ :‬عدم رشد=آبگوشت شفاف (غیر انتروکوک)‬ ‫تست تحمل نمک‬