Diagnostika houbových infekcí PDF

Diagnostika houbových infekcí Kvasinkovité houby – nejdůležitější zástupci Rod Candida imperfektní  není známa teleomorfa (= pohlavní stadium) patří sem naprostá většina kvasinek zachycovaných z klinického materiálu nejčastější druhy  C. albicans  C. tropica...

Diagnostika houbových infekcí Kvasinkovité houby – nejdůležitější zástupci Rod Candida imperfektní  není známa teleomorfa (= pohlavní stadium) patří sem naprostá většina kvasinek zachycovaných z klinického materiálu nejčastější druhy  C. albicans  C. tropicalis  C. parapsilosis  C. glabrata  C. krusei  Diagnostika houbových infekcí Kvasinkové záněty dutiny ústní akutní pseudomembranózní (soor)  bílé splývající povlaky (pseudomembrány) na sliznicích  výskyt v časném dětském věku, stáří, v souvislosti s maligními procesy (tumory, AIDS) atrofická  zánětlivě změněná atrofická sliznice (jazyk), bolestivost  výskyt v souvislosti s léčbou širokospektrými ATB chronická hyperplastická (kandidová leukoplakie)  tuhá bílá ložiska zejména na jazyku a bukální sliznici, nebolestivá riziko malignity  výskyt hlavně u mužů středního věku atrofická  nejčastější forma orální kandidózy  častý výskyt u lidí se zubní protézou a ortodontickými přístroji  sytě červená ložiska na patře a dásních, angulární cheilitida  Diagnostika houbových infekcí Kvasinkové záněty dutiny ústní soor akutní pseudomembranózní chronická atrofická kandidóza kandidóza  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Morfologie Popis kultur  Sabouraudův agar (48 h): kolonie nejčastěji 2–5 mm velké, okrouhlé, polokulovité, hladké, lesklé, smetanově bílé, s rovným nebo vláknitým okrajem, mazlavé konzistence, kvasnicového zápachu ( rod Cryptococcus hlenovité)  chromogenní agar (48 h): různě barevné kolonie, převážně okrouhlé, hladké, lesklé ( C. krusei matné, nepravidelné)  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Morfologie Mikroskopie  barvení podle Grama  grampozitivní kulovité až oválné pučící buňky  pseudomycelární vlákna  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Morfologie Mikroskopie  barvení askospór (podle Wirtze a Conklina)  jen u druhů se známým pohlavním stadiem  po kultivaci na speciálních půdách (agar podle Gorodkové…)  diferenciace podle počtu spór v ascích a jejich vzhledu  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Morfologie Mikroskopie  znázornění pouzder (podle Burriho…)  diferenciace rodu Cryptococcus  Diagnostika houbových infekcí Identifikace Candida albicans Mikroskopie  tvorba klíčních hyf (germ tubes)  inokulace kultury do krevního séra  inkubace 2–3 h / 37 °C  nativní preparát krátká vlákna vyrůstající z buněk  Diagnostika houbových infekcí Identifikace Candida albicans Mikroskopie  tvorba chlamydospór  inokulace jehlou na povrch rýžového agaru + překrytí krycím sklem  inkubace 1–3 dny / 22–27 °C  hodnocení inokula hyfy s terminálně a laterálně uloženými kulovitými chlamydosporami  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Biochemie  asimilace sacharidů (auxanogramy)  agarová půda se suspenzí kmene v YNB  na povrch disky napuštěné sacharidy  inkubace 1 – 3 dny / 30 °C  asimilace  kruhová zakalená zóna kolem disku  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Biochemie  asimilace sacharidů (auxanogramy)  komerční soupravy  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Biochemie  fermentace sacharidů (zymogramy)  zkumavka s plynovkou  roztok peptonová voda sacharid indikátor pH (jen pro kontrolu sterility skladovaného roztoku)  inkubace 2 dny – 3 týdny / 30 °C  fermentace  bublina v plynovce fermentace asimilace negativní reakce  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Testy / Druhy Auxanogram Zymogram kvasinek GLU SAC LAK MAL GAL GLU SAC LAK MAL GAL C. albicans + + ‐ + + + ‐ ‐ + + C. tropicalis + + ‐ + + + + ‐ + + C. parapsilosis + + ‐ + + + ‐ ‐ ‐ ‐ C. kefyr + + + ‐ + + + + ‐ + C. krusei + ‐ ‐ ‐ ‐ + ‐ ‐ ‐ ‐  Diagnostika houbových infekcí Identifikace kvasinek Molekulární genetika  sekvenování  počet a délka chromosomů  počet a délka fragmentů po restrikci endonukleasami  amplifikační techniky (RAPD)  hybridizace se specifickými sondami…