Efectividad de Preservativos Antimicrobianos PDF

e «—— e 0 l s M exicanos 13 Unido Farmacopea de los Estad os 350...

e «—— e 0 l s M exicanos 13 Unido Farmacopea de los Estad os 350 Tabla 0305. /. Categorías de productos. os ———————— LJ 18:03 Produt ——— CE e N T | Inyectables. | Soluciones de irrigación, diálisis y otro tipo de | | l /. parenterales ticos nasales estériles | | | | Oftálmicos con bases o óvehículos acuosos —_ || | - | || ED || | TE — e Tópicos con base o vehículo acuoso " E... | MN 26 o) Nasales no estériles 1 Doll en ! Emulsiones, incluyendo las que se aplican | | MUSEE | Na A membranas Orales no antiácidos con base o vehículo u a r des us E m o (db a + | ! | E mo A | — 4 Amiácidos con base £9 =— , A 1 1.20 DE PRUEBA 5 MICROORGANISMOS lx PARA EQUILIBRAR PRESIÓN albicans ATCC No 10231 vana Candida VNENSIONES EN MILÍMETROS ATCC No 16404 Aspergillus niger Figura 0303.71. Aparato para la determinación de la amperatura de ebullición. Escherichia coli ATCC No 8739 um rr ATCC No 9027 Pseudomonas aeruginosa ATCC No 6538 Staphylococcus aureus NCYC No 381 y Zygosaccharomyces rouxii* MGA 0305. EFECTIYN IDAD DE tración de azúcar. * Para preparaciones orales con alta concen PRESERY ATIY NOS ANTIMICROBIA A esta lista pueden agregarse contaminan tes comunes del producto o del ambiente de fabricación. , Los preservativos son sustancias que se adicionan Los cultivos originales ATCC o de ora colección deben principalmente a preparados farmacéuticos no estériles reconstiturrse de acuerdo a las indicaciones del inserto. multidosis, para inhibir el crecimiento de los microorganismos y um no deben tener mas E o Los iu que pueden introducirse durante el proceso de fabricación pases contados a partir del cultivo ATCC original. Definiendo uso del preparado. La adición de preservativos a preparados farmacéuticos debe como pase a la transferencia del organismo de un cultivo a un medio de cultivo fresco. Cada transferencia debe contarse. considerar lo siguiente: + No deben usarse como sustitutos de las buenas Cuando los microorganismos se mantienen por la técnica de ón, mantenimiento y de reducir la lote semilla véase Apéndice VI. Conservaci prácticas de fabricación o con la intención ma lote no estéril manejo de cultivos microbianos de referencia, siste carga microbiana de un preparadoE y , semilla cada ciclo de con 1Ó ngelación y 1Ó * La concentración del preservativo debe estar por abajo reactivación -enup-medi y. se descoconsidera como una A edio fresco del nivel tóxico para el humano. a L. Para el almacenami : ento de cultivos por periodos prolongados con ntración del preservativo debe ser menor "sísí los * La a conce es recomendable usar la técnica d. v osP 5 ingredientes activos de la formulación tienen actividad de tote semilla.ei 5. 1ca : s antimicrobiana intrínseca Si los microorgan ; an en medio2 líquid i mos se cultiv ganis o las célula ms Los perrea * Los " - os adicionados deben declararse en el se separan por centrifugación. Resuspender el — celular en volumenes (1/20) de caldo de mantenimiento y añadir un Considerando lo anterior la determinación de efectividad de las Menea igual de 20 % (v/v en agua-glicerol estéril). Cuando - E 3 1 99 UN medio sólido recuperar el crecimiento preservativos antimicrobianos debe realizarse durante el NA o hem. de glicerol al 10 %. Distribuir pequeñas desarrollo de la preparación farmacéutica, para demostrar la vial mi la suspensión en viales estériles. Almacenar los efectividad antimicrobiana de la preparación como tal o, si es a Epa od líquido o en un congelador a no menos de necesaria la adición de un conservante adecuado que proporcione una protección adecuada contra los efectos inóculo, pio de Pula 1 E eya. CUlsivo, para a EsepaBf : nueva serie pi ¡. un vial y a partir de este inocular una , vel: adversos y que 2 puedapn surgir : 1 de la contaminac H ión 4 micro. biana o la proliferación durante el almacenamiento y uso de la Serie Ce cultivos de trabajo. preparación. s de cultiv Medio des acar que 1 la prueba de efectiivi Cabebe dest vidad de preservativos Agar s _—_] antimicrobianos no está destinada a utilizarse con fines de A. Coya tripticaseína " O soya o, tripticaseína control de rutina. J Los productos son categorizados para su evaluación de. a Bo osa Sabouraud Cextro Aga r O soya-t sa Sabou raud ho acuerdo a su forma farmacéutica en la tabla 0305.17. riptic aseí Plica seína leciti na polisorbato Scanned with Scanned with ACE Scanner ACE Scanner (Consultar la fórmula y preparación de estos medios de N cultivo en el MGA 0571). Disolver los ingredientes en el agua purificada, filtrar si es necesario. Esterilizar en autoclave utilizando ciclos de Los medios de cultivo deben cumplir con la prueba de esterilización validados. promoción de crecimiento. Preparación del inóculo. Para preparar el inóculo usar Diluyente. Solución salina peptonada. cultivos frescos de los microorganismos de prueba. Los medios de cultivo, condiciones de incubación y Peptona de aim onie Cane 10 microorganismo de prueba se indican en la tabla 305.2. dame e. sodio 8.98 Criterios de efectividad antimicrobiana. Los requisitos de Agua purificada 1000 mL efectividad antimicrobiana son satisfactorios si los criterios pH final 730.1 especificados en la tabla 0305.3 se cumplen. Tabla 0305.2. Condiciones de incubación de la preparación del inóculo. TE NED ENEE AAA AD 0 TICO? ETE 2 E 27 E RIE TEN MES LENIN ENTE ME NENE Microorganismo Medios de cultivo Condiciones de Tiempo de incubación incubación para la recuperación de Temp. Tiempo los microorganismos Escherichia coli Caldo soya tripticaseína 325+2.5 18a24h 3a5 (ATCC 8739) Agar soya tripticaseína Pseudomonas aeruginosa Caldo soya tripticaseína 325+2.5 18a24h 3as (ATCC 9027) Agar soya tripticaseina Staphylococcus aureus Caldo soya tripticaseína 32.5+2.5 18a24h 3as (ATCC 6538) Agar soya tripticaseína Candida albicans Agar dextrosa Sabouraud 22.5+2.5 44a52h 3a5 (ATCC 10231) Caldo dextrosa Sabouraud Aspergillus niger Agar dextrosa Sabouraud 22.5+2.5 6al0 días 3a7 (ATCC 16404) Caldo dextrosa Sabouraud Agar dextrosa Sabouraud 22.5+2.5 6a l0 días 3a7 Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381) Caldo dextrosa Sabouraud ATCC American Type Culture Collection NCYC Narional Collection of Yeast Cultures Tabla 0305.3 criterios de efectividad antimicrobiana de preservativos TTTUTEEE eZ IA EEZrm — Categoría de Microorganismo Criterio de efectividad antimicrobiana aa da a E —— produtos Bacterias No menor que 1.0 reducción log de la cuenta inicial calculada a los 7 1 días, no menor que 3.0 reducciones log de la cuenta inicial a los 14 días y no aumento de la cuenta de los 14 días a los 28 días. Levaduras y mohos No aumento de la cuenta inicial calculada a los 7, 14 y 28 días. 2 Bacterias No menor que 2.0 reducciones log de la cuenta inicial a los 14 días y no aumento de los 14 días a los 28 días. Levaduras y mohos No aumento de la cuenta inicial calculada a los 14 y 28 días. 3 Bacterias No menor que 1.0 reducción log de la cuenta inicial a los 14 días y no aumento de los 14 días a los 28 días. Levaduras y mohos No aumento de la cuenta inicial calculada a los 14 y a los 28 días. 4 Levaduras No aumento de la cuenta inicial calculada a los 14 y 28 días. Mohos en relación a la cuenta inicial. “No aumento” se define como no más que 0.5 log10 salina peptonada Para cosechar los cultivos bacterianos y la levadura usar como diluyente solución salina peptonada, para hongos filamentosos usar solución adicionada de polisorbato 80 al 0.05 % (m/v). Lavar el crecimiento y colectar en envases apropiados, adicionar a cada cosecha suficiente diluyente de tal forma que 105 UFC/mL. cada suspensión contenga aproximadamente 1 MGA 0305. EFECTIVIDAD DE PRESERVATIVOS ANTIMICROBIANOS Scanned with Scanned with ACE ACE Scanner  recuperación de los microorganismos indicados En la ¿abla De manera alterna los microorganismos pueden. a 0305.2 usando la concentración O a unidades formadoras de colonias por mil 1tro E UFCML) presentes ar medio líquido, cosechar las células por centrifugación. de inicio de la prueba. Calcular los cam ios en valore $ loglO resuspender con solución salina estéril de tal Ce e por - la concentración de unidades forma oras de colonias suspensión contenga aproximadamente 1 x 10 UFC/m a los colonias L mililitro (UFC/mL) para ca da microorganismo Determinar el número de unidades formadoras de mililitro (UFC/mL) en cada suspensión por el Método de intervalos (tiempos) especificados en la tabla 0305.3 y por cuenta en placa. MGA 0571. vtilizando los medios de. expresar los cambios en términos de reducciones log. tiempos delasrecuperación los confirmar ypara indicados en la tabla e : unidades formadoras de colonias pol " Aptitud del método de conteo en presencia de producto mililitro (UFC/mL) estimadas: este valor sirve para ajustar € La prueba de aptitud solamente se lleva a cabo: antes de tamaño del inóculo usado en la prueba. realizar por primera vez la prueba de Eficacia de Las suspensiones de bacterias y levaduras se usan demenes Preservativos Antimicrobianos en un producto (o durante el las 24 h de ser preparadas y la suspensión del hongo desarrollo del producto) y en caso de modificar las filamentoso puede almacenarse en refrigeración hasta 7 días. condiciones experimentales de la prueba o la composición PROCEDIMIENTO. La prueba se efectúa con cinco e Par una dilución 10-' agregando 1 ml de producto (por envases originales o más (de acuerdo al número de cepas), si volumen) a 9 ml de solución salina u otro diluyente PT e volumen apropiado de producto neutralizante. Continuar este esquema de diluciones a niveles (por lo menos 10 mL). o bien en cinco o más envases estériles lución 10 v 10. Agregar un número apropiado de del tamaño apropiado a los cuáles se transfieren 10 mL del de dilución y - ABTES p P 6 uN organismos de reto a cada tubo ded producto diluido, mezclar cada dilució preparado farmacéutico. Inocular cada envase conteniendo el do de producto con el volumen necesario de la suspensión ajustada, y colocar == placa un volumen adecuado de cada di Me mezclar. El volumen del inóculo no debe exceder al 1 % del para producir menos de 250 UFC / placa para bacterias y volumen del producto. levaduras (entre 25 y 250 UFC) o menos de 80 UFC / placa La concentración del microorganismo de prueba que se para 4. br asil tens is (entre 8 y 80 UFC). Esta prueba debe adiciona a los productos categorías 1, 2 y 3 debe ser tal que la realizarse TD duplicado (aunque UN DAOr ETE concentración final del microorganismo en la preparación de de repeticiones puede ser útil para minimizar la variabilidad prueba después de la inoculación esté entre 1x 105 y en la estimación del recuento de placas). De debe realizar un 110% UFC/mL de producto. Para productos categoría 4, control positivo para este procedimiento, introducir el mismo antiácidos, la concentración final del microorganismo de inóculo en solución salina y transferir volúmenes similares prueba en la preparación de prueba después de la inoculación. solución salina a placas de agar. Un esquema de debe ser entre 1x10* y 1x105 UFC/mL de producto. recuperación adecuado es el que proporciona al menos el La concentración inicial de microorganismos viables en cada 20% de E recuento de control de solución salina preparación de prueba se estima tomando como base la (Promedio). concentración de microorganismo en cada uno de los inóculos Si el producto diluido exhibe propiedades antimicrobianas, ajustados como lo determina el Método de cuenta en placa, puede Ser necesario incorporar neutralizadores específicos en MGA 0571. Límites microbianos. los diluyentes o en los medios de recuperación. Incubar los envases inoculados a 22.5 + 2.5 “C. Tomar la S apacidad del procedimiento para medir la eficacia del muestra de cada envase a los intervalos (tiempos) indicados anmicrobiano puede verse comprometida si la aptitud del en la tabla 0305.3. Registrar cualquier cambio de apariencia método requiere una dilución significativa (102 0 103) ya del producto durante el tiempo que dura la prueba. que =-—- afectará la recuperación medida (por ejemplo, puede Determinar el número de unidades formadoras de colonias Moe onedir mel reducción de 3 unidades log para un por mililitro (UFC/mL ) presentes en cada preparación de delo N ). Si no se encuentra un agente o método prueba por el Método de cuenta en placa, MGA 0571. Límites dilución si 5 ecuado y la aptitud del método requiere una microbianos. Antes de efectuar los recuentos incorporar al inóculo or "cativa, se puede usar un mayor nivel de medio de cultivo un inactivador (neutralizante) específico de reducción de EN 107-108) para que se puedas Mediruna la actividad antimicrobiana del sistema preservativo (véase Stade ser E unidades log. La recuperación informada no tabla 0571.2, en MGA 0571. Límites microbianos), o preparar 100 UFC / Es. al UFC/ placa en promedio (o la dilución apropiada para la prueba, estas condiciones se 107. La filtra i ml se deposita por duplicado en la dilución determinan en los estudios de validación usando los medios grandes mia por membrana se puede usar para filtrar de cultivo, temperaturas y tiempos de incubación para la O para ayudar a. N € diluciones para Superar esta dificultad * neutralizar las propiedades antimicrobianas. with ACE Scanned with Scanned Scanner ACE Scanner calentamiento de las soluciones en el capilar y por lo tant E. N. falta de reproducibilidad en los tiempos de miran anto, Does o Pi (cinético y de punto final), basado en el pertinente bajar la concentración del sistema amortiguador, es su st - llo de turbiedad después de la ruptura de un factible disminuir el voltaje aplicado para disminuir la "E TO EnCogeno. corriente generada. Cromogénico (cinético y de punto final), basado en el desarrollo de color después de la ruptura del complejo 8) Durante la separación la corriente generada debe de sintético péptido-cromógeno. r ermanecer constante con ! una variación entre 3 yy 1 10 HA En caso de duda o controversia, la decisión final se toma | Pp , durante toda la corrida. Si se emplea el mismo capilar y basándose en el Método A. Formación de un gel, a menos que electrolito soporte esta corriente será reproducible en cada hos indique algo diferente en la monografía del producto en análisis. Si la corriente cac a un valor cercano de cero, es análisis. necesario detener la corrida porque es indicio de algún problema como pudiera ser: MATERIAL Y EQUIPO Que algún vial tenga la tapa mojada o alguna solución presente Ne estable al calor. Debe estar libre de endotoxinas y burbujas, que el capilar está tapado o roto, que la posición de Cee con la prueba. Utilizar ciclos de los viales con electrolito soporte para la corrida no esté bien despir ogenización con calor seco a 250 *C por lo menos programado en el método, etc. e min o las condiciones establecidas durante la validación el proceso. 9) El lavado entre corridas es muy importante porque debe de Material ee Cuando se utilicen microplacas, puntas asegurar que la pared interna del capilar quede limpia y lista re. P mi ticas, jeringas, etc., demostrar que están para el siguiente análisis. Si las muestras son simples, un Pres Ce EnUataxinas: lavado con el mismo electrolito soporte es suficiente pero si REACTIVOS son complejas como extractos vegetales, fluidos biológicos, Nota: todas las soluciones utilizadas en la prueba deben estar será necesario lavar con agua, NaOH 0.1 M, agua y electrolito libres de endotoxina bacteriana. soporte. Este lavado es parte del desarrollo del método a fin de Control estándar de endotoxina (CEE). Preparación de garantizar la reproducibilidad del mismo. endotoxina de Escherichia coli caracterizada y estandarizada * La longitud del capilar al detector es menor a la longitud total cuando eontranna endotoxina de referencia que ha sido calibrada con se emplean detectores espectrofotométricos, tal y como se observa en» Tespecto al estándar internacional de endotoxina de la la figura 0312.5. Organización Mundial de Salud. Una Unidad Internacional (UT) + Comercialmente ya existen capilares adecuados de acuerdo al de endotoxina es equivalente " El Unidad de Edoremina (UE) tamaño molecular de los analitos que se desean separar. Tisado de amebocitos (LAL). a $ Este medio de separación es más fácil de preparar, ya que con Limulus es un extracto acuoso de células sanguíneas presión se llena la capilar neutro con la po. ón " (amebocitos) del cangrejo herradura (Limulus polyphemus), ,. N.. preparado y caracterizado reactivo. También para usarse como Ést | **Si es necesario, usar aditivos como glicerol, surfactantes, urea o de ob Tachvol. de ident. ti soluciones zwitteriónicas. Sin embargo, dependiendo de la € o mo. Jl mu. ESTA E he de Teac E se concentración empleada, la urea causa desnaturalización de retiere so amente al pro ucto manutacturado de acuerdo con proteínas. las regulaciones de la autoridad competente. (Nota: el reactivo de amebocitos de Limulus también reacciona con algunos B-glucanos. Hay disponibles Lisados de , amebocitos que no reaccionan con glucanos: Se prepara | MGA 0316. DETERMINACIÓN DE removiendo del Lisado el factor G que reacciona con los ENDOTOXIN ASB ACTERI AN AS glucanos o inhibiéndolo, de esta forma puede ser utilizado | para la prueba de endotoxina en presencia de glucanos). , ; Agua - libre de endotoxinas , (ALE). Es el ,diluyente de i i vas, son la causa mas Mod ei de imc e Po.a la contami , inación de elección y no debe reaccionar con el reactivo de LAL. común de reacciones tóxicas asociadas productos farmacéuticos y artículos médicos. Las endotoxinas PREPARACIÓN DE REACTIVOS ee apolisacaridos cuya actividad es mayor que la de otras Estándar de endotoxina. Para reconstituir y almacenar el E la N Eu diferente. : ¡liza el estándar, seguir las instrucciones del fabricante. La prueba para determinar o cuantificar ndo " A partir de esta solución concentrada preparar las diluciones i i ¡ eu.. e e. —— de amebocitos de Limulus polyphemus 0 1 act de prueba, para evitar pérdida de actividad por adsorción _—- usarlas en el menor tiempo posible a menos que las condiciones | ridentatus. y periodos de almacenamiento se validen. Existen dos métodos para esta determinación: Método A: Formación de un gel. Lisado de a Reconetitur el reacio con = y" de endotoxina (ALE) o solución amortiguadora, siguiendo las A Método B:. Fotométrico, Po, i que dependiendo de la fo rma de. instrucciones del fabricante. , Mezclar suavemente, evitando la cuantificación puede ser: Scanned ACE Scanner with ACE Scanned with  TODO MÉTODOS GENERALES S GENERALES DE ANÁLISIS DE —395 ANÁLISIS —395 Fuente neutralizar el ácido libre. Agregar 25 mL de SV de hidróxido de Detector de potasio 0.5 N en alcohol (60 %), ensamblar al matraz un uN condensador de aire frío de 75 cm de longitud por 6 mm de o ][——[—;—;——TT—— E: diámetro interno, calentar en BV, mantener a reflujo durante 5 o o [8 (s) 2 30 min, agitar por rotación frecuentemente el contenido Le) ——TT— del | L L: matraz, agregar 1.0 mL de SI de fenolftaleína y titular el : Exceso de hidróxido de potasio con SV de ácido o Gas inerte clorhídrico 0.5 N. Efectuar una determinación en Expo Sis blanco, con las mismas cantidades y condiciones usadas en la prueba. Figura 0365.10. Dispositivo de movilidad iónica. Cálculos. Calcular el índice de éster por medio de la fórmula siguiente: DEFINICIONES Índice de éster = (B — V) 28.05 / m Masa nominal. Es la suma de la masa entera de los isótopos más abundantes de un compuesto. Donde: Masa exacta. La suma de las masas reales de los isótopos más 5 = Volumen en VEN. E. de SV de ácido clorhídrico abundantes de un compuesto. gastados en la determinación de la prueba en blanco. 0.5 N Exactitud de masa. Capacidad de un MS para asignar el valor 7 Volumen en he a. de dde acido más cercano a la masa exacta de un compuesto. gastados en la determinación de la muestra. lomidrico O5N Intervalo de masa. Los valores más bajos y altos un MS está calibrado. en los que 5 e. Pd pc e pies de la id , SV de hidróxido de potasio, 0.5 N en... : e.. 0). cue po Mein poo para distinguir a dos ¡ones Nota: también se puede obtener del índice de Ester mediante Poder de resolución. Capacidad instrumental para distinguir L Ep entre el indice de saponificación y el índice de dos iones que difieren una fracción de masa ( Am) - R=M/ Am Donde:Masa M= nominal donde se encuentra el máximo. MGA 0381. ESTERILIDAD uo. Diferencia de masas MD dos máximos resuelto. Esta prueba aplica a todos los productos biológicos, Interferencia == Capacidad de alguna AD de medicamentos, dispositivos médicos y productos que se modificar el grado de ionización (supresión o incremento) del denominan como estériles, y tiene como finalidad investigar la analito principal por coeluir con este último. presencia de microorganismos contaminantes. La prueba debe realizarse en la misma clasificación de área 7 en que fue fabricado el producto. Esta prueba, por sí misma MGA 0371. DETERMINACIÓN no DEL m— que un lote de iaa sea me esto sólo se logra INDICE DE ESTER con la validación de los procesos de esterilización y de llenado aséptico. El indice o valor de ést a cantidad en miligramos de hidróxido de potasio de de : ara a nina los ésteres de P » Ter CONDICIONES PARA REALIZAR La PRUEBA 1: 1.0 g de muestra. Os para sap La prueba debe llevarse a cabo bajo las siguientes condiciones: Preparación de la muestra. Para los casos en que el producto * Condiciones asépticas y equipos calificados (campanas sea un aceite turbio debido a la separación de estearina, 0 cabinas de seguridad biológica o módulos de flujo calentar el recipiente que contiene la muestra en baño de agua laminar o aisladores). 2 50 *C hasta que el aceite sea claro. Si esto no se logra, filtrar * Personal calificado. e En caliente a través de papel filtro seco en un embudo * Incluir control microbiológico (ambiental) de las áreas manteniendo la temperatura. Mezclar perfectamente y pesar la de trabajo y del personal durante el periodo de análisis. Muestra para la determinación usando de preferencia, un * Incluir controles negativos de los medios, diluyentes y ENvase provisto de gotero. Los productos que solidifican a soluciones de enjuague empleados. temperatura ambiente, mantener fundidos durante esta e Sanitizar los envases de las muestras, soluciones y Operación, medios de cultivo previo al análisis. Procedimiento. En un matraz de 250 mL con tapón * El material que este en contacto con la muestra debe esmerilado, previamente pesado, colocar de 1.5 a 2.0 g de la ser estéril. Emplear procesos de esterilización Muestra. Agregar de 20 a 30 mL de alcohol neutralizado y validados. agitar. Adicionar 1.0 mL de SI de fenolftaleína y valorar con * Los medios de cultivo deben cumplir con la prueba de SV de hidróxido de potasio 0.5 N en alcohol (60 %) hasta esterilidad y promoción de crecimiento. Scanned with Scanned with ACE ACE Scanner  ¡c idos Mexica anos 13.0 6 Fame ea de los Esta dos Unido. n = xcepto qu no contiene ag (icA olato, € e El pH desp ar ni e o rurina terilizacideón ¡o. toclave. ués de Es ATURAS D sodio. Es Es te ri liz MEDIOS s DE CU OYT EMPE R E nt ba ño de a DE N LTIV : debe ser 7.1 + 0.U2.. Cale A ar en agua ar de usar e an te s sarido de 35 di ciones anae Óbicas. 1 NCUBA:- CIO y medio io de digerd inccubar a 30 - *C bajo con ró ue seo u in El medio líquido de tiogli colatodi de cu d os de | ltivo q im soy a 4 o a a ecasboo 14 los a esD terilida e La so n :1 pri ero la aldo soya tripticaseína a llevar p r os a vo o de BA+1 C anacrobtriasas. n d. “erils s, si Calo re aseiña par: ] cultiv. ancres ático de ca as ntalme ara e nte pa de cultivivoo | pueden ece rtori cr a Dige , rie do a 173.0088 eumbuargo en este medi a e] cultivivo de hor 1gOS e Digerido10 dep ipaínico de apa soy O aerobias. El segundo oes adecuado Clor sod pa r ! s _—— bacteriaspaae rar »bias. uro at o dibásic o de potatasio ibásic y en el labo torio :dratada:/a. 2.:5 ; OS. » n pr ep ar rt Jo 0 se nhidra filam ento de cu. de arse el.mpre y cu Fo Glsí ucaosasa mn onohidra /23 2.5/2, g ltivo come onte. and ronda ta.-. pu105 rcialmente sie Agua purif de " 1.000 mL, usar me preparados ne. de la esterilizar demues tre qu cumple €e los d. e Prueb n 7“3+02 e de cr >cim. e jos:, an ara ar YODIOS pELOETEr é | agua. Filt sión ient aerobios, ' rar si es N - Jevaduorc| 1as. Disolver lo s ingredientes , ne de promo « ec i o —_ Im DA clav hon 1%0s filwe entosos , u Ae los ios de cuulltti¡vo vo utilizar e sterilizar en su imediae.to Almacenar en tre y Envasar re ajjuussttaarr el P E r y. Durante ru eb SiN se sorelu q ción de ido de sodi io 1. o de ácido nenos de que s e use de in la p a incubar d hi o la esterili e an una so - dróx liza za ción ut a22.5+2. Cc. que después se oc 5 cloren hidr " E LON. pa ra de s de o. Este rilizar en a lave gaicsel valor - n ca da caso. últi, vo pa icilinas o Url obte TUdi:in cado € Medios ra Pp eni Tiinnas. Para de c o procce sos v eriodos m c o n t e n ga usando p es cu ivo por ayoreress a los q ue. farmac éu ticos que n p enicilinas p reparacos de los me fos.de cultiv, o. rados Nolo usarusar los me edios de ltivo p ada un ceño 1nas, adicac ion. r ac: iciona dios o | ado su uso. A se ha valid. determina -l ac t a m asa p ara 1nac tivar e la ca ntida de B da icolato la mues tra. ¡q Medio líquuido de tioglico antiib ió bió ti co en debeadici onasea in ida tamasa q ue E E erminaar la cai ntidad de B-lac de; L-Cistina De t edios de á r e a te indepen ; ente a la di ár to - 258 Me en un ea to talmen : Cloruro de sodio 55/508 los m ebas de este indidiccado en a lo in rili ón dePlroceder de a ndo do cuer hidratada/an hidra d ep , hidr do de h 0.758 de adecuaci m étodo, usa no más Glucosa " Agar granurar con umeda d - la prueba ón hylococcusde —- o % conteni un 1 v o lumen ap iado, de Stap aureus vo no mavo r del 15 100 UF Ce38ne rop levadura ble en cto de solu agua 5.08 ivación del. Extracto na 1 508,ATCC65 ET anti ibióti-co se observa Digerido ancreáti p co sodio* Poe n co A nfirm ntode la d TiTiog 0.5 g del microo oo an isto oglicolato de io 1:1 000 e por el recimie: c ste. lir coden laprsuesi entes Solución de ina a de sodi recién 1.0 mL S cultiv o de ben cump gui o 1: Los medi se prepna ra da resazurin pruebas. o > - da 000 mL Agua puri ca 4. ' 1502 H ] de spuuéfs de esterilizar desp a: esterilidad pr :d o ti * Puede sust mirse por 0.3 mL de ácáciido tiogoglilicólico. úmero ntativo Incuba r era tura indicada, La nú4 mer represe idades) a la temp de Mezclar :. agua y ca lentar hasta qu se : de unidad el lote (se reco mienietnda e % de las uni do de la prue ba dientes e o. los ingre en N. r en ecalinta. s d ul : ías. dan me nte. Si es nece rio, fi ente los me de c tivo p or 14 días El re sultac vés de papei ltra: disuelv: dios Itro. rnAña dir sa ieA nt. la so esazurina er Ausenci ia de creciim mie o. TEVE o. l fi. lución de debe Ss de envasar y ¡lizar en auut oc»lave. El mo! s sodio, mi n t medio de , jento de mi icroorgan is cu - ltivo pued e presen tar una Z superficial de se rosa Prueba de ción del cre cimien evad ur as. - iddaación, la parte Proermob o ios, hongos fila entosos y |. E.ios, ana de ba ie pon 2 su ox bi do ci cual no be re sar la ter viables a S icroorg mismos de refe¿nre ia. ón, en toi ta l. Si i másmás de la te ra parte del medioio presenta del volu d rceen p Man a semillanismo dinc ce VI YI m: al un colora4 ro10sa, antes 5 de su uso, Cc tar una a, A Apén. ¿c ca sola los Z = en baño mediante la técnni ic: del lo c a l v sa, € El co lt ivo | o s de des de agua hast lor desapare ca.Si : edio de Conse, rvacjaió.ín, manten imiento y manejejo de ue a ; a i zca. deel mentr cu : sistema no más se almaacena ef cena e o a un a temperatur e 2 y 25 "Cen ferenc lote sem illa). de man era q , ” a “Ce Tepases ia. Ss epa orig:oin inal ENMÉLIco. se efectúhe ir de la a. , comerci alm ente Nu cu— line o e n a partedi c enla bara Probar cada io de cult ivo 30 a 35 In ar cm:ede líqu el lote de m iv pris epmos qu ado indican uaanndo se prue id o de tiogli : e se diInente oene | laboratorio10 con los microorgans excepto ¿b. las to ucco an prod cu to qu ape pr vos deríiv ados del mercurioio c a in de dioremct o o, pe p por el método n' dicadas , preserv ativos derivv: tabla 0381 a pr ba de fo rm a 1 stos incu cuba ue ¿c 1 En Estos cacasosos in bar el mediolo de cult o ivo 25 C cada micr..1.rgEf oo anec. ar istu mo. At dic iones in te medio pu e usarse en Ju el medio , a de20 aigerido > jos en des m. en o y tempiperatur "as la de cultiv o ed e us ar ga r de l medio diger de Medios inc: bación. oya-tr u to suspen siones a, soye-l iptic eína siempre y cuando se valide susu as USO cOMO se cular e | medioio lílígquido de ti og icola con FC en el v lu. io gl J biosy omla Prueba de promoc ió" n de creeccimientuso o deco a nos 1 de 10 QU aeroe contuelngan da una de um ro bio s, no m ás de Jostri diu , anae bios, hongos - filamentos le ca el lado, de lo iguientelass mi no organism ismos: ¿ C l o s os y levava, duras, apropiad o, s sigu cro y M MylOCO com, St a. io líquido de ioglic tioglic olato altern *auPOroganes,'S, Plasr eudomo nas acrruusginosa, Jiapcolato con T o mi Ne. o. Cuando reus, Inocular el medio del artículo, o sejustifique se señale en alternattivodo,de deUB stridi ym ngal e y men apr opiiado a cultivo, que tiene la usar dio de la de 100 UFC CIO" one ición que eselte med tie misma compos i en el Me d , edio lílqu vase s q ido sporogenes. ocular in i v i dualmente en íq In | | Scanned with Scanned w ith AACE Scanne r CE Scanner  A MÉTODOS Sa NOE GENERALES DE ANÁLISIS A — 397 medio digerido de soya-npucaseina, eonno - de Si después de la incubación, el crecimiento que presentan 100 UFC/mL en el volumen apropiado de los siguientes los Envases conteniendo la muestra es similar al del control microorganismos: his subiilis, y Aspergillus brasiliensis (Aspergillus niger), Candida albieans: Es N. positivo, ividad se considera que la muestra no posee activi - Mneubar cada uno de los medios inoculados no más de tres días so en el caso de bacterias y no más de cinco días en el caso de bajo a aomiicianes de prueba, n ae e de c et E Por consiguiente, a e. es hongos filamentosos y levaduras a las temperaturas indicadas esterilidad del producto debe realizarse bajo estas condiciones. en Medios de cultivo y temperaturas de incubación, Si por el contrario, no se obtiene crecimiento en presencia Los medios de cultivo son adecuados sí sc presenta crecimiento de la muestra, se considera que el producto posee actividad claramente visible de los microorganismos. antimicrobiana o que no se ha eliminado bajo las condiciones de prueba, por lo tanto es necesario modificar las condiciones, SOLUCIONES DILUYENTES Y DE ENJUAGUE PARA por ejemplo: aumentando el volumen del medio de cultivo, el EL METODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA número de enjuagues o usando agentes neutralizantes, etc. Solución de peptona al 0.1 %. Disolver 1.0 g de peptona de caseina o de came en 1 000 mL de agua purificada, en caso PRUEBA DE ESTERILIDAD DEL PRODUCTO DE necesario, filtrar, ajustar el pH a 7.1 + 02, distribuir en envases y PRUEBA esterilizar en autoclave. Para productos que contengan penicilinas o cefalosporinas, agregar en condiciones asépticas la cantidad Á menos que se especifique lo contrario en este capítulo o necesaria de B- lactamasa para inactivar al antibiótico. en la monografía individual, probar el número de artículos Solución de peptona al 0.1 % con polisorbato 80. Preparar especificados en la tabla 0381.3. Si el contenido de cada como se indica en la solución de peptona al 0.1 % sólo que, artículo es suficiente (tabla 0381.72), pueden dividirse de agregar 1.0 mL de polisorbato 80 por cada litro de solución. manera que porciones iguales se agreguen a cada uno de los Esta solución se utiliza para artículos que contienen lecitina o medios de cultivo especificado. aceite o para dispositivos etiquetados como “vía estéril”. Nota: realizar la prueba de esterilidad empleando dos o más Solución de peptona y extracto de carne con polisorbato 80. - as E a Epeoiicadas. , : Disolver 5.0 g de peptona de caseína o carne, 3.0 g de extracto de came y 10 g de polisorbato 80 en 1000 mL de agua purificada. : el erticulomares suiciónte pera ea medio de cultivo, utilizar el doble de artículos que se señalan en la tabla 0381.3. Ajustar el pH a 6.9 + 0.2, distribuir en envases y esterilizar. La prueba puede llevarse a cabo utilizando la técnica de filtración por membranas o por el método directo, sin Prueba de adecuación del método embargo, independientemente del método utilizado se deben Para cada preparado farmacéutico los volúmenes de medio de incluir controles negativos. cultivo, diluyente y concentración del agente inactivante deben deserminarse mediante esta prueba. La prueba de adecuación del MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA método se efectúa: 2) Antes de realizar por primera vez la prueba de esterilidad a El método de filtración por membrana se utiliza siempre que un producto. la naturaleza del producto lo permita, se aplica para productos b) En caso de modificar las condiciones experimentales de la acuosos, con base alcohólica, oleosos, y solubles o miscibles prueba. en solventes que previamente se demuestre que no poseen Efectuar la prueba como se indica para cada tipo de producto, actividad antimicrobiana bajo las condiciones de prueba. Con las siguientes modificaciones: Utilizar filtros de membrana con un tamaño de poro nominal no mayor a 0.45 pm, en los que la eficacia para retener Método directo. Transferir a cada medio de cultivo la a los microorganismos ha sido establecida. Cantidad de muestra indicada en las tablas 0381.2 y 0381.3, Seleccionar el tipo de membrana de acuerdo a la naturaleza Inocular individualmente los medios, con una suspensión que de la muestra, por ejemplo, las membranas de nitrato de celulosa Contenga no más de 100 UFC en el volumen apropiado, de se usan para soluciones acuosas, oleosas y con bajo contenido cada uno de los microorganismos especificados en la de alcohol; las membranas de acetato de celulosa se usan "abla 0381.17. (controles positivos). para soluciones con alto contenido de alcohol. Para determinados productos, como los antibióticos, puede ser necesario usar Método de filtración por membrana. Transferir la cantidad membranas especiales. de Muestra indicada en las tablas 0381.2 y 0381.3, inocular La técnica descrita supone el uso de membranas de 50 mm individualmente el último enjuague con una suspensión que de diámetro. Si se utilizan de un diámetro diferente, el volumen contenga no más de 100 UFC en el volumen apropiado, de de dilución y los lavados deben ajustarse. cada uno de Jos microorganismos indicados en la ¿abla 0381.1. Esterilizar las membranas y equipo de filtración Para ambos métodos realizar la Prueba de promoción utilizando Crecimiento de aerobios, anaerobios, hongos filamentosos procesos de esterilización validados. Los equipos de filtración y están diseñados para que la muestra de análisis levaduras como control positivo, Incubar todos se introduzca, los envases filtre, extraiga la membrana en condiciones asépticas durante no más de cinco días a las temperaturas indicadas en