Réalisation d'une congélation PDF

Réalisation d'une congélation La congélation d'une biopsie cutanée doit se faire immédiatement après le prélèvement. Classiquement, le prélèvement est déposé sur une compresse imbibée de sérum physiologique glissée dans un petit tube, puis amené au laboratoire en urgence où il sera immédiatement co...

Réalisation d'une congélation La congélation d'une biopsie cutanée doit se faire immédiatement après le prélèvement. Classiquement, le prélèvement est déposé sur une compresse imbibée de sérum physiologique glissée dans un petit tube, puis amené au laboratoire en urgence où il sera immédiatement congelé puis techniqué. L'intérêt de la congélation est triple : réalisation d'études en immunofluorescence directe ; réalisation de techniques de biologie moléculaire (pathologie tumorale) ; stockage (tumorothèque). Si l'on ne dispose pas d'azote liquide (prélèvement en ville ou aux horaires de fermeture du laboratoire), on peut immerger la biopsie dans le liquide de Michel. Ce milieu doit être conservé à +4 °C et permet un acheminement au laboratoire à température ambiante sous quelques jours. IV. Inclusion, coupe et colorations Inclusion en paraffine et coupe Après fixation, le prélèvement est déshydraté puis inclus en paraffine dans un moule en plastique (cassette). Cette cassette est ensuite fixée dans un microtome et des coupes de 3–4 μm d'épaisseur sont réalisées. Le ruban de paraffine ainsi réalisé est déposé sur une lame. Colorations La coloration la plus communément réalisée est l'HE (hématéine-éosine) ou l'HES (hématéine-éosine-safran). Les noyaux sont colorés en bleu-violet, les cytoplasmes en rose, le tissu conjonctif en rouge rosé (HE) ou jaune orangé (HES). Des colorations spéciales peuvent être réalisées : recherche de germes : Ziehl (BAAR), PAS et Grocott (champignons), Gram (germes) ; visualisation de structures ou de cellules : orcéine (fibres élastiques), Giemsa et bleu de toluidine (mastocytes) ; mise en évidence de dépôts : Fontana (mélanine), bleu alcian (mucine), rouge Congo (substance amyloïde), von Kossa (calcium), Perls (hémosidérine). V. Immunofluorescence et immunohistochimie Étude en immunofluorescence Les indications classiques sont le diagnostic des dermatoses bulleuses et, à un moindre degré, du lupus érythémateux et de certaines vascularites. À partir des prélèvements congelés, des coupes de 4-5 μm sont réalisées au cryostat. Des anticorps polyclonaux anti-Ig humaines (IgG, IgA, IgM, C3) sont déposés afin de détecter les anticorps présents dans la biopsie cutanée. La lame est examinée au microscope à fluorescence.