Biotechnicien partie 1.docx

Principe des 3R =============== Remplacement : Peut-on remplacer une expérimentation animale par une autre méthodologie ? Devoir moral et légal de ne pas utiliser d'animaux si alternative, résultats déjà obtenus Par exemple la culture in vitro, in silico Réduction : Peut-on réduire le nombre d'a...

Principe des 3R =============== Remplacement : Peut-on remplacer une expérimentation animale par une autre méthodologie ? Devoir moral et légal de ne pas utiliser d'animaux si alternative, résultats déjà obtenus Par exemple la culture in vitro, in silico Réduction : Peut-on réduire le nombre d'animaux intervenant dans le protocole expérimental ? Raffinement : Prend-on bien en compte le bien-être animal tout on long de son cycle de vie ? **Avant** la procédure expérimentale = hébergement ; enrichissement choisir le modèle animal utilisé en fonction du protocole / pertinence **Pendant** la procédure expérimentale = Techniques d'analgésies et d'anesthésie utiliser au maximum des procédures non invasives (imagerie, in vivo, télémétrie), donner les soins pré-, per- et postopératoires adéquats, Après la procédure expérimentale = Techniques de raffinement permettant à l'animal de récupérer ou mettre fin à ses souffrances Balance coût/bénéfice ===================== a\) La pesée des bénéfices et des contraintes La pesée des intérêts permet de déterminer si une expérience sur des animaux peut être autorisée et pratiquée. Les nouvelles connaissances qui doivent être retirées sont mises en balance avec la contrainte pour les animaux. Conformément à l'ordonnance sur l'expérimentation animale (art. 24), les contraintes causées par des interventions ou des mesures effectuées dans le cadre d'une expérience sur des animaux sont classées en 4 catégories. Il s'agit finalement d'évaluer si le bénéfice obtenu justifie la contrainte pour les animaux. Le bénéfice attendu d'expériences sur les animaux doit être plus important pour la société que la souffrance et l'atteinte à la dignité des animaux. Le degré de gravité en guise d'étalon de la contrainte. b\) La dignité de l'animal : introductions pour effectuer la pesée 1\) Formuler l'objectif de l'intervention prévue 2\) Présentation des faits 3\) Question concernant l'opportunité de l'intervention L'objectif visé peut-il être atteint avec l'intervention prévue ? \- Oui -\> effectuer la pesée des intérêts \- Non -\> renoncer à l'intervention, la pesée des intérêts est inutile 4\) Question concernant la nécessité de l'intervention L'intervention prévue est-elle nécessaire pour atteindre l'objectif visé ou est-il possible d'atteindre cet objectif par une mesure qui soumet l'animal à une contrainte moindre ou même à aucune contrainte ? \- Pas d'alternative -\> effectuer la pesée des intérêts \- Il existe une alternative sans contrainte pour l'animal -\> choisir l'alternative, la pesée des intérêts est inutile \- Il existe une alternative avec une contrainte moindre pour l'animal -\> effectuer en parallèle la pesée des intérêts pour l'alternative et pour l'intervention prévue (au cas où la dignité est respectée en réalisant l'alternative, il faut la réaliser, pour autant que sa réalisation soit acceptable). 5\) Constat et pondération des contraintes Les points limites ================== Points limites = moment où l'on va arrêter, diminuer ou minimisée l'expérience car la douleur pour l'animal est trop forte soit par un traitement visant à le soulager, en arrêtant la procédure qui le fait souffrir ou en euthanasiant l'animal de façon humanitaire. Choisir les points limites Ces indicateurs vont être choisi avant de mettre en place l'expérience. Les indicateurs doivent être objectifs, facilement détectable, rapidement observable et facilement compatible avec l'expérimentation. Pour choisir les points limites, on peut faire un essai pilote avant la mise en place de l'expérience. On peut bien entendu raffiner en cours de chemin, c-à-d arrêter l'expérience plus tôt. Exemples La présence d\'un ou de plusieurs de ces critères justifie l\'euthanasie de l\'animal : - Incapacité irréversible ou prolongée à s\'alimenter ou à s\'abreuver (ex: immobilité prolongée, obstruction de la cavité orale) ; - Souffrance ou une douleur sévère et ne pouvant être soulagée par l\'emploi d\'agents analgésiques ou autres traitements (ex: fracture, auto-traumatisme, posture ou mouvements anormaux, plaie ouverte, ulcère cornéen, vocalisation anormale); - Perte de poids rapide ou chronique supérieure à 20% (chez les animaux en croissance, leur poids doit être comparé au groupe contrôle); - Tumeur excédant 10% du poids corporel de l\'animal ou mesurant plus de 2 cm3 chez la souris et 10 cm3 chez le rat ou masse ulcérée, infectée ou nécrotique; - Perte de poids ininterrompue pendant plus de 5 jours et signes évidents d\'atrophie musculaire ou d\'émaciation; - Diminution générale du toilettage et/ou apparence terne du pelage ne pouvant être associées au vieillissement de l\'animal; - Difficultés respiratoires sévères ou prolongées (particulièrement si accompagnées de cyanose); - Hypothermie ou hyperthermie sévère ou prolongée; - Prolapsus progressant vers une nécrose ou un dommage tissulaire; - Diminution marquée de l\'activité ou décubitus latéral; - Léthargie, inconscience, état de choc; - Dystocie sans possibilité de césarienne; - Hémorragie sévère incontrôlée; - Infection microbienne ou autre maladie interférant avec les objectifs généraux de l\'étude ou causant des signes cliniques sévères ne pouvant être traités selon le jugement du vétérinaire et ne faisant pas partie du protocole; - Déshydratation sévère ou prolongée non traitable; - Distension abdominale significative non reliée au protocole; - Signes neurologiques sévères (ex: tête penchée, tremblements, spasticité, convulsions, paralysie, incoordination motrice, tournis); - Dermatite ou lésions cutanées infectées, impliquant plus de 20% de la surface corporelle; - Hydrocéphalie - Facilement observable et détectable - Reproductibilité - Ne demande pas trop de travail supplémentaire - Prédictif - Fiable et robuste - Significatif et permet une réduction de la souffrance - Compatible avec l'expérience Il faut déterminer les points limites précoces et définir des indicateurs prédictifs significatifs. Ainsi que réaliser des observations de plus en plus fréquentes. La précocité des points limites est très importante, il ne faut pas laisser l'animal atteindre le moribond (= état cliniquement irréversible conduisant inévitablement à la mort) car il ne répondra plus aux stimuli, et va tomber dans le coma. 2.2.1. Exemple Test de provocation du vaccin de la rage chez les souris (efficacité d'un lot de vaccins) - Niveau 1 : Fourrure ébouriffée, dos voûté; - Niveau 2 : Lenteur des mouvements déplacements en cercles, perte de poids de plus de 15 %; - Niveau 3 : Tremblements, secousses, convulsions; - Niveau 4 : Boiterie, paralysie, décubitus permanent. - Niveau 5 : mort Avant, on allait jusqu'au stade 5 (= la mort) mais on savait que lorsque l'animal arrivait au stade 2, on était sûr que l'animal avait la rage. Donc le nouveau point limite est le niveau 2. Degrés de gravité ================= Pour dire que c'est une expérience, le niveau de douleur de l'animal doit être semblable à une piqure. La réponse de l'animal à la douleur va varier en fonction de son espèce, de sa lignée, de sa personnalité (tolérance individuelle), de son état de bien-être au départ (si l'animal est malade à la base, il aura plus mal), de ses souvenirs, sa connaissance, de sa physiologique,... 1. Gravité légère La douleur est courte et mineur (courte et de faible intensité) et lorsque l'on fait une procédure ou si on ne sait pas si cela va avoir un effet sur l'animal exemple : prise de sang non répété, isolement moins de 24h, mise à mort avec traitement au préalable (mise à mort douce), prise de sang non répétée, étude pharmacocinétique si administration d'une dose unique d'une substance sans effet négatif et quelques prélèvements de sang (au total \< 10 % volume sanguin), procédures superficielles : biopsies de l\'oreille et de la queue, implant souscutané non chirurgical, télémétrie, administration d\'une substance avec peu d'effet négatif en SC, IM, IP, IV ou par gavage et volumes adaptés à l'animal, induction de tumeurs, ou tumeurs spontanées sans effet clinique négatif, élevage d\'animaux génétiquement modifiés avec phénotype léger - régime alimentaire modifié qui entraîne une anomalie clinique légère, confinement de courte durée (\< 24 h) en cage métabolique, isolement en cage individuelle pour les rats ou les souris adultes, exposition à des stimuli désagréables associés à une douleur, une souffrance ou une angoisse légère et auxquels l\'animal est en mesure d\'échapper, jeûne forcé pendant moins de 24 h chez le rat adulte, palpation rectale, prise d'échantillon de mucus vaginal, imagerie non invasive (IRM) avec ou sans sédation ou anesthésie, mise à mort avec traitement au préalable, fixation (immobilisation) en box avec possibilité de se coucher et de se tenir debout, immunisation sans adjuvants 2. Gravité modérée La douleur est importante mais courte ou légère mais longue exemple : application fréquente de substances avec effets cliniques modérés et prélèvements sanguins (\> 10 % du volume sanguin) chez un animal conscient pendant quelques jours, sans reconstitution du volume sanguin, études de toxicité aiguë ou toxicité chronique ou cancérogénicité, dont le point limite n\'est pas la mort, chirurgie sous anesthésie et analgésie appropriée, avec une douleur postop, induction de tumeurs, ou tumeurs spontanées, avec douleur ou impact modéré, irradiation ou chimiothérapie avec une dose sublétal ou une dose normalement létale mais avec reconstitution du système immunitaire et effets négatifs légers ou modérés et de courte durée (\< 5 jours), immunisation avec du Freund-adjuvant incomplet (pas dans les coussinets plantaires), élevage d\'animaux génétiquement modifiés avec phénotype modérés, création d\'animaux génétiquement modifiés par des procédures chirurgicales, utilisation de cages métaboliques jusqu\'à 5 jours, régime alimentaire modifié qui entraîne une anomalie clinique modérée, jeûne forcé pendant 48 h chez le rat adulte, déclenchement de réactions de fuite ou d\'évitement alors que l\'animal n\'est pas en mesure de s\'échapper 3. Gravité sévère La douleur est intense mais courte ou modéré mais prolongé. Il est interdit que la douleur soit intense et long. Exemple : essais de toxicité susceptibles d\'entraîner la mort et de causer des états pathologiques graves. (toxicité aiguë au moyen d\'une dose unique), essais de dispositifs dont la défaillance peut causer une douleur intense chez l\'animal (dispositifs d\'assistance cardiaque), essai d\'activité d\'un vaccin avec trouble persistant de l\'état général, une maladie progressive mortelle, associés à une douleur modérée de longue durée, irradiation ou chimiothérapie avec une dose létale sans reconstitution du système immunitaire, induction de tumeurs, ou avec tumeurs spontanées, susceptibles de provoquer une maladie progressive mortelle associée à une douleur modérée de longue durée (tumeurs entraînant une cachexie, tumeurs osseuses invasives, tumeurs avec métastases et tumeurs avec ulcération), interventions chirurgicales ou autres sous anesthésie générale, susceptibles de causer une douleur postop intense ou modérée et persistante, transplantation d\'organe avec rejet susceptible de causer une angoisse intense ou un trouble grave de l\'état général de l\'animal (xénotransplantation), élevage d\'animaux atteints de troubles génétiques avec trouble grave et persistant de l\'état général (maladie de Huntington, dystrophie musculaire, névrite chronique récurrente), utilisation de cages métaboliques pendant une période \> 5 jours, chocs électriques auxquels l\'animal ne peut échapper, isolement complet d\'espèces sociables (chiens et primates) longtemps, stress d\'immobilisation pour provoquer des ulcères gastriques ou une défaillance cardiaque chez le rat, test de la nage forcée ou de l\'exercice forcé dont le point limite est l\'épuisement, certains tests d'infectiosité 4. Sans réanimation = non recovery L'animal ne doit pas avoir été manipuler avant (expérience, etc.), la procédure intégrale se fait sous anesthésie générale et l'animal ne reprendra pas conscience au terme de cette manipulation. Il sera sacrifié. C'est différent d'un animal qu'on euthanasie et qu'on prélève des organes après (ce n'est pas une expérience) Exemple : enlever un rein, voir si l'autre rein fonctionne Législation en matière de bien-être animal ========================================== Science : cherche à quantifier les effets que les humains ont sur les animaux, du point de vue des animaux (physiologie, comportement, santé, etc. Ethique : questionnement sur les actions des humains envers les animaux en termes de morale (comment les animaux sont-ils traités, comment devraient-ils l'être ?) -- Ce n'est pas de la Science. Législation : résulte de la Science et de l'Ethique, est le reflet des règles de la société en matière d'utilisation et de traitement des animaux (pour contrôler les comportements cruels ou irresponsables) Le bien-être d'un animal est l'état mental et physique positif lié à la satisfaction de ses besoins physiologiques et comportementaux, ainsi que de ses attentes. Cet état varie en fonction de la perception de la situation par l'animal. Les mesures effectuées sur l'animal sont au centre des approches scientifiques et pratiques pour évaluer le bien-être. Le concept de bien-être s'applique à la dimension mentale du ressenti de l'animal dans son environnement. Il se place avant tout aux niveaux individuel (par opposition au groupe) et contextuel (chaque environnement impacte différemment l'individu). On détermine alors un niveau de bien-être pour un individu particulier dans un environnement donné. Ce positionnement ne vise pas à minimiser l'importance du groupe ; celui-ci fait partie de l'environnement de l'individu, au niveau duquel s'évalue le bien-être. Un besoin est une exigence de survie et de qualité de vie liée au maintien de l'homéostasie et aux motivations comportementales. On peut citer par exemple la soif, le couchage, l'exploration de l'environnement, les interactions avec les congénères. La non-satisfaction d'un besoin entraine un état de mal-être et/ou de frustration pouvant induire des perturbations comportementales et/ou physiologiques (état de stress chronique par exemple) ainsi qu'un accroissement du risque de maladie. Hiérarchie des besoins Certains besoins seraient plus importants que d'autres, pour certains : - Enlever la nourriture ou l'eau = problèmes physiologiques à court terme - Accès à de la nourriture et à de l'eau = besoins fondamentaux - Vivre dans un environnement peu confortable = problèmes à long terme (boiteries vaches laitières). - Accès au confort = besoin moins fondamental Les besoins dans la législation Loi 10.08.86, Art. 4: Art.4 (= Art. D. 8 du Code Wallon du BEA) : la détention d'un animal par quiconque et pour quelque raison que ce soit, implique qu'on lui fournisse une alimentation, des soins, et un logement (ou un abri) convenant à sa nature, à ses besoins physiologiques et éthologiques, à son état de santé et à son degré de développement, d'adaptation ou de domestication. Les 5 libertés de l'animal La qualité de vie de l'animal est la mesure de ces 5 libertés/absences : - Absence de faim et de soif - Absence de douleur, de blessure et de maladie - Absence d\'inconfort - Absence de peur et de détresse - Absence de comportement normal express (il peut avoir son comportement naturel sans restriction) Législation en matière d'expérimentation animale ================================================ Autorités compétentes 1- Cadre fédéral belge C'est le Ministre de la Santé Publique qui est l'autorité compétente. - En 1986, la Loi fédérale (arrêté royal) relative à la protection et au bien-être animal (BEA) -- - En Europe, la directive 2010/63 relative à la protection des animaux d'expérience - La SPF Santé Publique DG4 avec le CITES/BEA et un service de contrôle. - En 1986, la Loi fédérale (arrêté royal) 2019 code BEA relative à la protection et au bien-être animal - En Europe, la directive 2010/63 relative à la protection des animaux d'expérience - La SPF DGARNE (Agric. Ress. Naturelles Env.) DQBEA -- UBEA Champs d'application Domaines/actes non considérés comme expériences : - Actes sur animaux dans les exploitations agricoles à des fins non expérimentales - Actes pratiqués à des fins d'élevage reconnues - Actes visant à l'identification d'un animal - Pratique vétérinaire - Observation d'animaux placés dans des conditions n'entraînant aucune douleur, souffrance, angoisse ou dommage durable Animaux d'expérience - Vertébrés vivants + céphalopodes - Formes larvaires autonomes (alimentation) - Formes fœtales mammifères (ssi dernier 1/3 de gestation\*) - Formes fœtales d'oiseaux (ssi éclosion\*) - Animaux élevés dans un but premier de prélèvements d'organes et tissus \* Et s'il présente souffrance, inconfort, ou angoisses durables avec intervention durant les 2 premiers tiers de gestation +-----------------------------------+-----------------------------------+ | 2 Groupes | | +===================================+===================================+ | Espèces élevées et sélectionnées | Espèces « domestiques » | | par des professionnels de | | | l'élevage, dans le but d'être | | | soumis à expérimentation | | +-----------------------------------+-----------------------------------+ | - Chiens et chats | \- Ruminants | | | | | - Cobayes | \- Porcs | | | | | - Lapins | \- Poissons | | | | | - Souris et rats | | | | | | - Hamsters (dorés et chinois) | | | | | | - Primates | | | | | | - Grenouilles | | | | | | - Poisson zèbre | | +-----------------------------------+-----------------------------------+ Expérience - Toujours dans un projet - Utilisation invasive à objet expérimental ou scientifique ou éducatif - Douleur, souffrance, inconfort, dommage durable - Seuil minimal convenu = piqûre par une aiguille - Inclus les animaux génétiquement modifiés Les contentions =============== Rat : - Contention en C : croiser les pattes avants - Matériel d'enrichissement - Contention plus stricte : prendre au moins la moitié de la peau du dos + soutenir arrière-train - Contention mécanique - Tubes de contention Souris - L'attraper AVEC la queue : à la BASE de la queue. JAMAIS chez le rat - Technique de la cup - La maintenant avec les doigts au niveau de la peau du cou - Matériel d'enrichissement - Contention mécanique - Tubes à contention Cobaye - Contention en C - Contention pour acte : Une main au thorax et une sous le bassin. On étire légèrement l'animal Hamster - Technique de la cup - Contention fine : prendre la peau tout le long de la ligne du dos Lapin - Contention en C - Sur l'avant-bras - Contre soi (contention plus fine) - Technique de l'essuie - Contention mécanique - Boite de contention - Sac de contention