Aula 6 - ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO PDF

MICROBIOLOGIA CLÍNICA ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO Prof. Tereza Raquel Sebata  ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESS...

MICROBIOLOGIA CLÍNICA ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO Prof. Tereza Raquel Sebata  ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS GRAM-POSITIVAS DE INTERESSE MÉDICO O objetivo do laboratório de microbiologia não é apenas apontar o responsável por um determinado estado infeccioso, mas sim, indicar, através do monitoramento de populações microbianas, qual o perfil dos microrganismos que estão interagindo com o homem. Com essas informações, a equipe de saúde é capaz de definir quais microrganismos podem ser responsáveis pelo quadro clínico do paciente e assim, propor um tratamento mais  ESTAFILOCOCOS ESTREPTOCOCOS ENTEROCOCOS OUTROS COCOS GRAM POSITIVOS  ESTAFILOCOCOS Os ESTAFILOCOCOS são as bactérias NÃO ESPORULADAS que mais resistem no meio ambiente. Mesmo com a gama de antimicrobianos existentes, da melhora das condições sanitárias, etc. este microrganismo continua a ser um dos mais importantes patógenos para o homem.  ESTAFILOCOCOS O Indivíduos sadios são colonizados intermitentemente por Staphylococcus aureus desde a amamentação, e podem albergar o microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente na pele e raramente na vagina.  ESTAFILOCOCOS O Staphylococcus aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do paciente, objetos ou outros pacientes por contato direto ou por aerossol, ocasionando infecções letais por conta dos fatores de virulência ou através de resistência aos antimicrobianos atualmente utilizados.  ESTREPTOCOCOS  Os ESTREPTOCOCOS foram os maiores causadores de infecção hospitalar na era pré-antibiótica, causando surtos de infecção e morte de puérperas. Apesar de não serem atualmente os mais importante causadores de infecções hospitalares, provocam, no entanto, doenças muito graves e muitas vezes letais, sendo importante o rápido diagnóstico deste agente.  ENTEROCOCOS  Os ENTEROCOCOS apresentam importância crescente como causadores de INFECÇÃO HOSPITALAR, pelo aparecimento de resistência quase total aos antibióticos tradicionais.  ENTEROCOCOS  Os ENTEROCOCOS mais comumente isolados são: Enterococcus faecalis (90% dos casos) e Enterococcus faecium, com grande capacidade de colonização de pacientes e de contaminarem superfícies ou equipamentos utilizados em hospitais. Possuem sensibilidade ou resistência variável aos antibióticos.  ENTEROCOCOS  Os ENTEROCOCOS mais comumente isolados são: Enterococcus faecalis (90% dos casos) e Enterococcus faecium, com grande capacidade de colonização de pacientes e de contaminarem superfícies ou equipamentos utilizados em hospitais. Possuem sensibilidade ou resistência variável aos antibióticos. IDENTIFICAÇÃO PRELIMINAR ▪ A identificação dos ESTREPTOCOCOS e ESTAFILOCOCOS é baseada na morfologia que apresentam. Sendo: ▪ ESTREPTOCOCO: cadeia normalmente alongada de cocos unidos. ▪ ESTAFILOCOCOS: forma de cocos aos pares, em cachos de uva.  IDENTIFICAÇÃO PRELIMINAR  A identificação presuntiva começa com a inoculação primária na placa de ágar sangue de carneiro que deve ser incubada. As colônias de ESTAFILOCOCOS são geralmente MAIORES, variando do branco a amarelo podendo apresentar hemólise ou não.  IDENTIFICAÇÃO PRELIMINAR  As colônias de ESTREPTOCOCOS tendem a serem MENORES (puntiformes), e com halos de hemólise total ou parcial (beta e alfa hemólise).  A diferenciação entre os estreptococos e os estafilococos se dá, seguramente, pela prova da catalase.  IDENTIFICAÇÃO PRELIMINAR  A diferenciação entre os ESTREPTOCOCOS e os ESTAFILOCOCOS se dá, seguramente, pela PROVA DA CATALASE.  PROVA DA CATALASE  Para a família Microccocacea - ESTAFILOCOCOS a prova é geralmente positiva, enquanto que para a família Streptococcacea - ESTREPTOCOCOS a prova é negativa. PROVA DA CATALASE  CARACTERIZAÇÃO DOS ESTAFILOCOCOS  Pelo teste catalase identifica-se na verdade a família Micrococcaceae, esta família possui 4 gêneros: Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e Staphylococcus. Sendo o mais importante os ESTAFILOCOCOS PROVAS DIFERENCIAIS DOS GÊNEROS CATALASE + MOTILIDADE POSITIVO = gênero Planococcus. PROVAS DIFERENCIAIS DOS GÊNEROS CATALASE + OXIDASE POSITIVO = gênero Micrococcus. PROVAS DIFERENCIAIS DOS GÊNEROS CATALASE + NÃO CRESCIMENTO em NaCl 5% = gênero Stomatococcus. PROVAS DIFERENCIAIS DOS GÊNEROS CATALASE + MOTILIDADE NEGATIVO, OXIDASE NEGATIVO e CRESCIMENTO POSITIVO em NaCl 5%. gênero Staphylococcus Esse gênero possui 32 espécies. Mas para efeitos de provas, quatros espécies são as mais cobradas.  PROVA DE COAGULASE NA LÂMINA 1. Colocar 2 gotas de salina em uma lâmina; 2. Emulsionar uma colônia isolada a ser testada; 3. Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de plástico ou madeira; 4. Observar se há aglutinação em 10 segundos; PROVA DE COAGULASE NO TUBO DE ENSAIO 1. Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por uma noite, com colônia suspeita a um tubo de ensaio com 0,5 ml de plasma; 2. Incubar por 4 horas à 35°C em estufa ou banho maria; 3. A formação do coágulo é observada pela inclinação suave do tubo de ensaio a 90 graus da vertical.  CATALASE CATALASE POSITIVA POSITIVA Staphylococcus epidermidis COAGULASE Staphylococc COAGULASE Staphylococcus POSITIVA us aureus NEGATIVA saprophyticus Staphylococcus haemolyticus  CARACTERIZAÇÃO DOS ESTREPTOCOCOS  Os ESTREPTOCOCOS podem ser diferenciados de acordo com sua aparência na placa de ágar sangue após incubação a 35°C em presença de 5% de CO2, podendo apresentar: HEMÓLISE TOTAL – BETA , PARCIAL - ALFA ou NENHUMA - GAMA. IDENTIFICAÇÃO DOS ESTREPTOCOCOS ALFA HEMOLÍTICOS IDENTIFICAÇÃO DOS ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLÍTICOS IDENTIFICAÇÃO DOS ESTREPTOCOCOS NÃO BETA HEMOLÍTICOS IDENTIFICAÇÃO DOS ENTEROCOCOS QUESTÕES  (IADES – MÉDICO – ESPECIALIDADE: PATOLOGIA CLÍNICA – 2014). ▪ Considere que um paciente adulto do sexo masculino, com queixa de dor na garganta, foi encaminhado ao laboratório para coleta de secreção de orofaringe. Colhido o material, a avaliação microscópica e bioquímica da cultura apresentou cocos gram-positivos, aeróbicos, catalase-negativo, com β- hemólise em ágar-sangue e positivo para o teste com bacitracina. Nesse caso hipotético, o micro-organismo presente nessa amostra  (IADES – MÉDICO – ESPECIALIDADE: PATOLOGIA CLÍNICA – 2014). a) Staphylococcus epdermidis. b) Staphylococcus aureus. c) Streptococcus pneumoniae. d) Streptococcus pyogenes. e) Staphylococcus saprophyticus.  (AOCP – Médico – Especialidade: Patologia Clínica – 2013). ▪ A PROVA DA COAGULASE, BASEADA NA CAPACIDADE DE MICRORGANISMOS ? REAGIREM COM PLASMA E FORMAREM UM COÁGULO, ENCONTRA UTILIDADE NA: a) Identificação de bacilos Gram negativos não fermentativos. b) Separação de espécies de Staphylococcus de importância clínica, S. Aureus coagulase positiva, das demais espécies coagulase negativa. c) Identificação de espécie de Staphylococcus, pois enquanto o S.saccharolyticus é coagulase positivo, o S. Aureus é coagulase negativo. d) Diferenciação da Pseudomonas aeruginosa (positiva) da Escherichia coli (negativa). e) Separação de Enterococcus que são negativos dos Streptococcus que são positivos.  (AOCP – Médico – Especialidade: Patologia Clínica – 2013). ▪ Quando se pretende diferenciar colônias de estreptococos e estafilococos, coleta-se, com a alça bacteriológica o centro de uma colônia suspeita e esfrega-se em uma lâmina de vidro. Adiciona-se uma gota de água oxigenada a 3% ao esfregaço e observa-se a formação de bolhas. Esse teste é conhecido por ? a) Teste da gelatinase. b) Teste de camp. c) Prova da catalase. d) Prova da hexoquinase. e) Teste da acetiloxigenase.  AERONÁUTICA – 2014 Quais as características fenotípicas que podem ser atribuídas à maioria das bactérias do gênero Enterococos? ? a) Gram-positivo e catalase positivo. b) Gram-positivo e catalase negativo. c) Gram-negativo e catalase positivo. PROVA DA CATALASE  Nossas vidas começam a terminar no dia em que permanecemos em silêncio sobre as coisas que importam. Martin Luther King  REFERÊNCIAS AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Detecção e Identificação de Bactérias de Importância Médica.Brasil. LIMA, A. O. et al. Métodos de laboratório aplicados à clínica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001. OPLUSTIL, C. P. et al. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica. 3. ed. Ver. E ampl. São Paulo: Sarvier, 2010.