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Antibiotika Klassische Definition … sind niedrigmolekulare Sekundärmetabolite von Mikroorganismen, die in geringen Konzentrationen das Wachstum anderer Mikroorganismen hemmen oder diese abtöten. Erweiterte Begriffsbestimmung - Antiinfektiva … schließen chemisch oder biosynthetisch hergestellte...

Antibiotika Klassische Definition … sind niedrigmolekulare Sekundärmetabolite von Mikroorganismen, die in geringen Konzentrationen das Wachstum anderer Mikroorganismen hemmen oder diese abtöten. Erweiterte Begriffsbestimmung - Antiinfektiva … schließen chemisch oder biosynthetisch hergestellte Derivate sowie antibiotische wirksame Substanzen aus Pflanzen und Tiere mit ein. Einteilung erfolgt nach: Wirkungsspektrum Wirkungsmechanismus Produzentenstamm Biosynthetische Ableitung Gewinnung: biologisch, synthetisch oder semisynthetisch, gentechn Chemische Struktur Schematischer Aufbau der prokaryotischen Zelle Speichergranula (Polybetahydroxyfettsäuren, Polyphosphat, Schwefel o. a.) Zellkernäquivalent Oder Nucleoid 70 S Ribosomen Plasmid Pilus Flagellen oder Plasmamembran Geißel Zellwand Kapsel MAKROLIDE (ERYTHROMYCIN), TETRAZYKLINE (CHLORAMPHENICOL) AMINOGLYCOSIDE, CHINOLONE, BACITRACIN, POLYMYXINE ß-LAKTAME cycline-regulated gene expression. In the tet-off system, imeric tetracycline transactivator protein (tTA) consists of the TetR domain that nizes tetO fused to the VP16 transactivating domain of herpes simplex virus. tTA to seven tetO domains (tetO7) connected to a minimally active CMV promoter (C ng in gene activation. Doxycycline binds tTA and prevents gene activation. In the m, TetR is mutated to rTetR, which must have doxycycline present in order to bind and activate gene expression.  Blau-Weiss-Selektion α-Komplementation β-Galaktosidase LacZ-Gen α-FragmentΩ-Fragment LacZ‘ LacZ‘‘ aktive β-Galaktosidase im im inaktiv inaktiv Plasmid Wirtsbakterium LacZ‘ MCS LacZ‘ LacZ‘ MCS Insert MCS LacZ‘ Rekombinante DNA - Kloniere 44 n  Blau-Weiss-Selektion LacZ‘ MCS LacZ‘ LacZ‘MCS Insert MCSLacZ‘ aktive Galaktosidase keine aktive Galaktosidase X-Gal → blau X-Gal kann nicht umgesetzt werden blaue Kolonien tragen kein Insert weisse Kolonien tragen ein Insert Klonierung gescheitert Klonierung erfolgreich Rekombinante DNA - Kloniere 45 n „Prokaryotische“ Plasmide – pBluescript multiple cloning site Lacz Gen für Blau-Weiss Selektion Ampicillinresistenzgen für die Selektion in E.coli den Origin für Replikation in E.Coli Rekombinante DNA - Kloniere 47 n  „Eukaryotische“ Plasmide pCMV Promotor für die Expression des Fusionsproteins T7 Promotor am einen Enden der multiple cloning site für in vitro Transkription und als Sequenzierungsansatzpunkt multiple cloning site C-terminales myc-HIS Epitop BGH Polyadenylierungssignal SV40 Promotor und Origin für die Expression des Neomycinresistenzgens Neomycinresistenzgen für die Selektion in eukaryotischen Zellen SV40 Polyadenylierungssignal für effiziente Transkriptionstermination und Polyadenylierung von mRNA pUC Origin für high copy Replikation in E.Coli Ampicillinresistenzgen für die Selektion in E.coli Rekombinante DNA - Kloniere 48 n Geneticin (G-418) antibiotisch wirksames Aminoglycosid Wirksam gegen Pilze und Zellen höherer Eukaryoten über Hemmung der Proteinbiosynthese Verwendung als Selektionsmarker eukaryotischer Zellen (Inaktivierung durch Phosphorylierung der Hydroxylgruppen mittels Phosphotransferase)Neo-Resistenz-Gen Hygromycin B antibiotisch wirksames Aminoglycosid aus Streptomyces hygroscopicus Wirksam gegen Pilze und Zellen höherer Eukaryoten über Hemmung der Protein Verwendung als Selektionsmarker eukaryotischer Zellen (Inaktivierung durch Ph Phosphotransferase)hph-Gen aus E. coli