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08/09/2024 IMUNOLOGIA LABORATORIAL Profa. Dra. Thaisy Pacheco Técnicas de Imunopre...

08/09/2024 IMUNOLOGIA LABORATORIAL Profa. Dra. Thaisy Pacheco Técnicas de Imunoprecipitação [email protected] 1 2 1 2 Imunoprecipitação Imunoprecipitação  Antígeno e anticorpos, ambos solúveis, que se ligam e formam  A quantidade de precipitado formado depende de: um precipitado.  Fatores físico-químico (pH, temperatura);  Imunológicos (tipo de Ag e Ac);  Principalmente – Concentrações relativas do antígeno e de  Precipitado é uma substância formada por uma reação anticorpo equivalentes (zona de equivalência) química, e que é insolúvel, ou seja, é um sólido que se forma e que se deposita no meio de uma solução líquida. 3 4  08/09/2024 Zona de equivalência: A precipitação é máxima Zona de equivalência: A precipitação é máxima Precipitação baixa Precipitação baixa Antigen added Antigen added 5 6 Imunoprecipitação Imunoprecipitação Simples Método de Oudin - 1946 Após a gelificação, adiciona-se  Imunodifusão Simples a amostra (Ag) e aguarda uma Gel de Agarose com Anticorpo semana a formação da linha de Amostras com Antígeno precipitação.  Imunodifusão Radial Dupla Antígeno  Imunodifusão Radial Simples Quando os imunoprecipitados são formados no gel, o tamanho Imunoprecipitado dos agregados fica maior do que Anticorpo em gel o diâmetro dos poros e evita-se a de Agarose difisão dos complexos Ag-Ac. Formando o imunoprecipitado 7 8  08/09/2024 Imunoprecipitação Simples Imunoprecipitação Radial Dupla Método de Oudin - 1946 Método de Ouchterlony - 1947 Gel sem anticorpo Ágar ou Agarose sobre uma lâmina ou placa de Petri Anticorpo: Orifício Central Antígeno: Orifício Periférico Faz-se pequenos orifícios no gel e adiciona Antígeno e Anticorpo Ambos se deslocam – Radial Dupla 24 a 48 h para difusão Imunoprecipitado 9 10 Imunoprecipitação Radial Dupla Imunoprecipitação Radial Dupla Método de Ouchterlony - 1947 Método de Ouchterlony - 1947 Diagnóstico de:  Candidíase  Paracoccidioidomicose  Cisticercose 11 12  08/09/2024 Imunoprecipitação Radial Simples Imunoprecipitação Radial Simples Método de Mancini e Fahey, 1965 Método de Mancini e Fahey, 1965 O anticorpo é uniformemente distribuído no gel e o antígeno (amostra teste) é aplicado em um orifício. A amostra teste difunde radialmente no gel, formando um halo de precipitação circular e torno do orifício da amostra. Zona de Equivalência 13 14 Imunoprecipitação Radial Simples Imunoprecipitação Radial Simples Método de Mancini e Fahey, 1965 Método de Mancini e Fahey, 1965 – A técnica pode ser utilizada principalmente na quantificação de proteínas como imunoglobulinas, fatores do complemento, proteínas de fase aguda, cadeias leves e proteínas de transporte. Ex Diagnóstico: Infecciosas: Hanseníase, Histoplasmose. Autoimunes: Artrite, Vasculite, Nefrite, Lúpus Eritematoso Sistêmico. 15 16  08/09/2024 Imunoprecipitação Radial Simples Relembrando Método de Mancini e Fahey, 1965 Precipitação, ocorre quando anticorpos solúveis no soro reagem com antígenos solúveis para formar complexos antígeno-anticorpo que são insolúveis em solução aquosa. Estes complexos formam precipitados que podem ser medidos ou analisados por diversos métodos. 18 17 18 Relembrando Resumindo As técnicas de precipitação são úteis para a quantificação e a identificação de a aglutinação refere-se à agregação de antígenos e anticorpos em amostras, sendo aplicadas em análises mais detalhadas como imunoprecipitação e imunoeletroforese. partículas maiores mediada por anticorpos, enquanto a precipitação se refere à formação de complexos insolúveis entre antígenos e anticorpos solúveis. 19 19 20  08/09/2024 Bibliografia da aula 21 22 23