Técnicas De Siembra Y Aislamiento De Bacterias Y Levaduras PDF

SESIÓN 3 Ciclo de Aprendizaje TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y LEVADURAS Guía de Práctica - GP CURSO: MICROBIOLOGIA DE LOS AL...

SESIÓN 3 Ciclo de Aprendizaje TÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS Y LEVADURAS Guía de Práctica - GP CURSO: MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS Docente: Mtra. Suarez Arribasplata Flor Material del curso Ciclo de Aprendizaje Restaurador: Explica y Explora “Esto es lo que el amor de Dios significa: que observemos sus mandamientos; y, sin embargo, sus mandamientos no son [una carga].”) 1 Juan 5:3 2 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador 1. Aplicar diferentes técnicas de siembra y aislamiento de cultivos de bacterias y levaduras en medios sólidos. 2. Comprobar la utilidad que tienen los medios de cultivos de uso general, diferenciales y selectivos. 3 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador  En la naturaleza, la mayoría de los microorganismos no se encuentran aislados, sino integrados en poblaciones mixtas. Para llevar a cabo el estudio de estos microorganismos y de sus propiedades, es necesario separar unos de otros y trabajar con especies aisladas, obteniendo cultivos axénicos o puros. Un cultivo axénico o puro es aquel que contiene un sólo tipo de microorganismo y que procede generalmente de una sola célula; el crecimiento de ésta origina, en medio sólido, una masa de células fácilmente visible que recibe el nombre de colonia. 4 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador El cultivo de microorganismos es una actividad que requiere del conocimiento de técnicas de siembra o inoculación y de aislamiento para transferirlos de un medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad. Es indispensable para realizar diversos estudios morfológicos, de identificación, bioquímicos, de patogenicidad y ecológicos, entre otros. Existen diferentes técnicas de siembra: por suspensión de la muestra en medios líquidos; extensión de diluciones de un cultivo en superficie de medios en caja de Petri; por estría en caja de Petri y tubos con medios solidificados en forma inclinada; por piquete o picadura en tubos con medios sólidos o semisólidos. Con la aplicación de cada técnica se obtiene información de importancia para el estudio básico o aplicado de los microorganismos de interés 5 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador  Al depositar una célula bacteriana o una levadura en un punto del medio de cultivo, ésta quedará inmovilizada en ese punto y en él se reproducirá por absorción de los nutrientes del medio. Las nuevas células generadas permanecerán igualmente inmóviles y tras sucesivas generaciones conformarán lo que denominamos una «colonia» que no es más que un montón de células derivadas de una sola célula madre inicial, es decir, un clon de la bacteria o levadura depositada al sembrar. Esta colonia es visible al ojo humano y presenta diferentes características según el microorganismo que la genera. Esto nos permite distinguir las diferentes poblaciones microbianas que se encuentran en la muestra sembrada y separarlas transfiriendo una colonia de cada tipo a un nuevo medio de cultivo estéril, a estos cultivos los consideraremos «puros» por poseer un sólo tipo de microorganismo. (El fundamento es válido teniendo en cuenta sólo microorganismos cultivables). 6 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador  Sembrar o inocular es introducir artificialme nte una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. Sé Íntegro, Sé Misionero, 7 Sé Innovador  Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento del o los microorganismos de interés. La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando punta, ansa, espátula de Drigalsky, hisopo o pipeta estéril. Cultivo en medio líquido: Habitualmente se realiza en tubos o erlenmeyers. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento. Cultivo en medio sólido: Puede ser en tubos o placas. Cultivo en medio semisólido: en tubos. 8 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador  9 Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé Innovador Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé10Innovador IMPORTANTE: Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente. En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar. En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo tanto, no sirven como técnica de aislamiento. Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé11Innovador Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé12Innovador  Métodos para la toma de muestra METODO DE MUESTREO SUPERFICIES A MUESTREAR Se utiliza para superficies inertes regulares e irregulares, tales como tabla de picar, bandejas, mesas de trabajo, utensilios, cuchillas de Método del hisopo equipos, cortadora de embutidos, cortadora de pan de molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras, pisos, paredes y otros. El método de la esponja se utiliza preferentemente para muestrear Método de la esponja superficies de mayor área. Se utiliza para superficies vivas (manos) y para objetos pequeños o para Método del enjuague el muestreo de superficies interiores de envases, botellas, bolsas de plástico, etc. Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé13Innovador Método del Hisopo Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé14Innovador Método de la esponja Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé15Innovador Método del Enjuague Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé16Innovador Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé17Innovador Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé18Innovador Técnica de estría cruzada Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé19Innovador Las cajas con la base hacia arriba se incuban a 37°C durante 24-48 horas Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé20Innovador Siembra en tubos Siembra por inoculación o agitación Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé21Innovador Siembra por estría ( en tubos de agar inclinado): Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé22Innovador  Siembra por picadura Incubar los tubos a 37°C durante 24-48 hrs. Observar la aparición de colonias y reportar la forma de crecimiento de los microorganismos Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé23Innovador Sé Íntegro, Sé Misionero, Sé24Innovador