Histología: Introducción al Estudio (PDF)

Introducción al estudio de la histología Dr. Prof. Adjunto Felipe Venegas (MV, MSc) [email protected] Histología: Estudia las características estructurales de los tejidos y su relación con la función que desempeñan Embriología: Estudia el desarrollo del individuo, desde la concepción ha...

Introducción al estudio de la histología Dr. Prof. Adjunto Felipe Venegas (MV, MSc) [email protected] Histología: Estudia las características estructurales de los tejidos y su relación con la función que desempeñan Embriología: Estudia el desarrollo del individuo, desde la concepción hasta el nacimiento Organología: Estudia los órganos del individuo, su estructura, sus funciones y su importancia en el ser vivo Células Tejidos Órganos Sistemas Relación con otras ciencias biológicas: Biología del desarrollo Anatomía Fisiología Histopatología Histología Medicina Embriología Biología celular Genética Bioquímica Resolución del ojo humano: 150 micrómetros (𝜇m) Cigoto (día 1 de desarrollo) Recién nacido (día 266 de desarrollo) Mide 150 µm Mide 50 cm. Aprox. Pesa 3 millonésimas de gr Pesa 3 Kilos Bacteria: 2-3 µm Eritrocitos: 7,5-8,5 µm Células óseas:12-25 µm Neuronas: 100-200 µm Fibras musculares estriadas: 5 cm Microscopio Electrónico: MET: electrones que se proyectan sobre una pantalla fluorescente. Tetróxido de Osmio MEB: electrones barren la superficie (electrones no atraviesan el objeto). Oro-paladio Histology Of The Jaw Deformation In Salmon Of Southern Chile (Salmo salar) Venegas, F; 2003  Microscopio Óptico Poder de resolución: es la distancia mínima entre 2 puntos en que se puede ver nítido  100X OCULAR OBJETIVO AUMENTO AMPLIFICACIÓN 10 x 4x 40 veces Aumento menor (lupa) 10 x 10 x 100 veces Aumento mediano 10 x 40 x 400 veces Aumento mayor 10 x 100 x 1000 veces Aumento máximo (aceite de inmersión) 4X 10X 40X Microscopio de contraste de fase: posibilita la observación de muestras sin colorear, por lo que resulta útil para estudiar especímenes vivos Colágeno I Colágeno III Microscopio de luz polarizada: es una modificación del microscopio de campo claro. Debido al fenómeno de birrefringencia se pueden observar sustancias cristalinas y moléculas fibrosas Histology of the Jaw Deformation in Salmon of Southern Chile (Salmo salar) Venegas, F; 2003 Microscopio de fluorescencia: permite la Microscopio de barrido Confocal: se usa para observación de estructuras fluorescentes, estudiar la estructura de sustancias biológicas. ya sea naturales o artificiales Combina partes de un microscopio de campo claro con equipo fluorescente y un sistema de barrido que emplea un rayo láser. A través de una computadora se reconstruye la imagen tomada por planos a una imagen tridimensional Caracterización, Aislamiento y Cultivo de Fibroblastos de la Oreja del Bovino para Clonación y Producción de Quimeras; Venegas, F; 2004 1.-Extracción del tejido 3.-Fijación 5.-Aclaramiento 6.-Preparación del bloque 2.-Reducción 4.-Deshidratación 7.-corte con Técnica Histológica: microtomo 10.-Extracción de la parafina 11.-Hidratación 12.-Tinción 13.-Deshidratación 8.-Montaje 9.-Desecado 14.-Montaje permanente Pasos de la técnica histológica: 1. Toma de la muestra: mediante biopsia o necropsia se obtiene tejido, muestra que debe ser rotulada mediante un protocolo que logre indicar los datos necesarios para su identificación. El objetivo es obtener una muestra representativa del tejido en estudio, manteniendo lo más intacta las características celulares que la constituyen. 2. Fijación: Proceso por el cual se preservan las estructuras y componentes celulares, lo más cercano posible al estado vivo. La mayor parte de los fijadores actúan como oxidantes, favoreciendo así la coloración posterior de los tejidos. Fijadores de uso más corriente: Formol al 10 %, Alcohol absoluto o Acetona. Cantidad de Fijador: Debe ser entre 10 a 20 veces el volumen de la muestra. Impedir la autolisis (Autodigestión) Hacer el material resistente a la acción de hongos y bacterias Impedir cambios de forma y tamaño Aumentar la afinidad por los colorantes Obtención de preparaciones permanentes 3. Deshidratar los tejidos: estos contienen grandes cantidades de agua, que debe ser eliminada y reemplazada por parafina. El mejor agente deshidratante es el alcohol etílico. Para evitar alteraciones provocadas por una deshidratación brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando alcohol etílico de graduación creciente. 4. Aclaramiento: El xilol y benzol, tienen la propiedad de transparentar los tejidos. Son los mejores aclarantes, porque se mezclan con el alcohol y la parafina. 5. Inclusión en parafina: Este proceso comprende la impregnación de los tejidos con un medio que llene todos los espacios tisulares. La parafina a 60º C es el medio de inclusión más usado. 6.-Preparación del bloque: formar moldes para dar rigidez a las muestras incluidas, y permitir su manejo. 7. Corte: el taco de parafina, se colocar en un instrumento llamado micrótomo que corta el tejido en finas laminas de 5 micrones (μm), ideal para la observación. 8. Adhesión: colocar los cortes sobre un porta objeto. 9.-Desecado: refuerza adhesión y ayuda al estiramiento de la muestra. 10. Extracción de la parafina: con Xilol. 11. Hidratación: permite tinción. 12. Tinción: Esta permite reconocer, diferenciar y estudiar las características morfológicas de los diferentes tejidos. Previamente hay que: a) Desparafinar el tejido (xilol) b) Rehidratar el tejido (alcoholes descendentes) Se pueden utilizar diferentes tinciones (colorantes), según lo que se desee resaltar. Existe la tinción corriente, llamada Hematoxilina- eosina, utilizada en forma rutinaria para teñir la gran mayoría de las muestras. 13. Deshidratación 14. Montaje: Después las muestras, son cubiertas con un cubre- objeto para poder preservarla de una forma adecuada. Posteriormente se almacenan en cajas con los rotulados correspondientes. Tinciones: Hematoxilina-Eosina Hematoxilina colorante básico que tiñe los componentes ácidos como: núcleo (DNA y RNA); regiones ácidas del citoplasma; y matriz cartilaginosa; de color azul (Basófilo) Eosina colorante ácido que tiñe los componentes básicos como: regiones básicas del citoplasma; y fibras de colágeno; de color rosado (Acidófilo) Cromófobo que no se tiñe Glándula Unicelular Constituidas por una sola célula secretora Ej. Célula Caliciforme Mucus es el producto de secreción de muchas células mucosas. Esta secreción mucosa está constituida por moléculas formadas principalmente por carbohidratos, no se tiñe con la técnica corriente (H.E.), pero se tiñe con técnicas especiales (PAS, Azul de Alcián) Células caliciformes teñidas con: H-E PAS Azul de Alcián Técnica histoquímica: Los tejidos se tratan con algunos reactivos con los cuales se permite marcación la presencia de moléculas específicas Como resultado de esta reacción química, se forma un nuevo producto que si se tiñe Inmunofluorescencia Inmunoperoxidasa Inmunohistoquímica Inmunohistoquímica v/s Inmunofluorescencia Puntos de vista… Profundidad del Corte Colorante precipitado Pliegue Ruptura de tejidos Artefactos Tejido: conjunto de células agrupadas según sus características morfológicas y la función que desempeñan Tejidos Básicos o Fundamentales: Origen Embrionario: I. Tejidos epiteliales Ectodermo y endodermo II. Tejidos conjuntivos Mesodermo III.Tejido muscular Mesodermo IV.Tejido nervioso Neuroectodermo Célula muscular Tejido conectivo Epitelio estriada esquelética neurona neuroglia Epitelio y tejido conectivo Tejido muscular y Tejido nervioso Definiciones: 1.Mucosa: Es una estructura que reviste los órganos huecos o tubulares del organismo. Está constituida por dos zonas: un epitelio de revestimiento y una lámina propia o corion de tejido conectivo. Entre ambos está la lámina basal 2.Endotelio: Está constituido por un epitelio plano, simple que reviste internamente los vasos sanguíneos, linfaticos y las cavidades del corazón Órganos tubulares, presentan capas: Interna: mucosa , submucosa. Órganos macizos, normalmente presentan una Media: tejido conectivo, muscular. cápsula, corteza y médula; como además de: Externa: adventicia o serosa (tejido conectivo o mesotelio) Estroma: tejido que da soporte, relleno y lleva la Mucosa nutrición a través de vasos sanguíneos, generalmente constituido por tejido Submucosa conectivo Muscular Parénquima: tejido que desarrolla las funciones específicas del órgano, Serosa constituido por uno o varios tipos celulares apéndice cecal ej.: hígado, glándulas, gónadas ej.: aparato digestivo, aparato respiratorio, aparato urinario Citoesqueleto: Grupos de filamentos proteicos, forman redes tridimensionales (forma a la célula y son la base de sus movimientos) 1. Los microfilamentos, son delgados filamentos de actina de 7 nm de espesor/ Participan principalmente en regular la morfología y la migración celular 2. Los filamentos intermedios, de 8 a 12 nm de espesor: Queratina, Vimentina/ Confieren estabilidad de los componentes citoplasmáticos, a las membranas plasmáticas y a la estructura del núcleo 3. Los microtúbulos, estructuras cilíndricas, huecas de 25 nm de grosor/ Participan en el movimiento de las vesículas, organelos y de los cromosomas durante la división celular Actina Queratina Especializaciones epiteliales: Especializaciones de la superficie apical: Microvellosidades Cilios Estereocilios Especializaciones de la superficie lateral: Unión ocluyente, unión estrecha o zónula occludens Unión adherente o zónula adherens Desmosoma o mácula adherens Uniones Comunicantes: Nexus (gap junction) o unión de abertura Especializaciones de la superficie basal: Hemidesmosomas Microvellosidades: Evaginaciones de la membrana celular en el dominio apical de las células. Son fijas y están relacionadas con funciones de absorción y de transporte Se encuentran en células del: Epitelio del intestino (chapa estriada) Epitelio del túbulo renal (borde en cepillo) Cilios: Prolongaciones celulares móviles, que realizan movimientos rápidos en un eje Función: desplazar, lentamente, una capa de mucus o bien líquidos y partículas en la superficie de un epitelio Se encuentran en epitelio de: Tráquea, Bronquios, Tubas Uterinas Estereocilios Microvellosidades largas e inmóviles, que se encuentran en Epidídimo, conducto deferente y el caracol (oído interno). Función: Absorción y aumento de superficie Epitelio de Revestimiento con Estereocilios (Epidídimo) Epitelio de Revestimiento con Microvellosidades (duodeno) Epitelio de Revestimiento con Cilios (Tráquea) Epitelio de Revestimiento con Estereocilios (Epidídimo) Especializaciones de la superficie lateral: 1.Unión ocluyente, unión estrecha o zónula occludens Complejo de unión epitelial: 2.Unión adherente o zónula adherens 3.Desmosoma o mácula adherens 5.Hemidesmosoma 4.Uniones Comunicantes: Nexus (gap junction) o unión de abertura Especialización de superficie ventral Especializaciones de la superficie basal: Membrana basal Estructura acelular ubicada entre el epitelio y el tejido conectivo Formada por: 1.Hemidesmosomas 2.Lámina lúcida (laminina) Funciones de la 3.Lámina densa (colágenoIV) lámina basal: 4.Fibrillas de anclaje (colágenoVII) Une el epitelio con el tejido conectivo subyacente Es un filtro selectivo que regula el paso de moléculas Permite la migración celular Es importante en la regeneración de los tejidos Favorece las interacciones celulares Estudien o...