14 Questions
¿Cuál es la función de un promotor fuerte en la expresión génica?
Incrementar la expresión génica
¿Cuál es el problema principal con los promotores constitutivos?
Gastan mucha energía
¿Qué es un gen reportero?
Un gen que se utiliza para evaluar la actividad de un promotor
¿Cuál es la ventaja de utilizar promotores regulables?
Permiten decidir el momento de expresión génica
¿Cuál es el resultado de la sobreexpresión de un gen?
Un elevado costo energético
¿Cuál es la función de la secuencia consenso en un promotor?
Regular la unión de la RNA polimerasa
¿Cuál es la diferencia entre un promotor constitutivo y uno regulable?
La forma en que se regula la expresión génica
¿Cuál es el efecto de la sobreexpresión de un gen en la célula?
Un freno en el crecimiento de la célula
¿Cuál es el propósito de irradiar las células de E. coli con luz UV en la traducción in vitro?
Degradar el DNAg para que algunas copias del plásmido sobrevivan y expresen los genes clonados
¿Qué es necesario para la expresión in vivo de secuencias clonadas?
Un promotora, un terminadora, un RBS, un codón de inicio y un codón de termino
¿Qué es un promotora en la expresión in vivo de secuencias clonadas?
La región de DNA que interactúa con el aparato transcripcional para iniciar la transcripción
¿Qué tipo de células se utilizan para la traducción in vitro de secuencias clonadas?
Células de E. coli mutantes y transformadas
¿Qué es un minicélula en la traducción in vitro?
Una célula que se divide de forma descontrolada y genera minicélulas sin DNA
¿Qué es necesario para la expresión completa de un gen clonado?
La transcripción y la traducción de DNA con o sin intrones
Study Notes
Sistemas Celulares de Traducción In Vitro
- Maxicélulas: células de E. coli mutantes y transformadas que se irradian con luz UV para degradar su DNA, permitiendo expresar genes clonados.
- Minicélulas: divisiones alteradas que forman septos de forma descontrolada y generan minicélulas sin DNA, capaces de expresar genes en un medio con un precursor radiactivo.
Ovocitos de Xenopus leavis
- Se microinyectan con mRNAs eucariotas que se traducen en el citoplasma.
- Existen expresiones completas que incluyen transcripción y traducción de DNA con o sin intrones, clonada o no.
Expresión In Vivo de Secuencias Clonadas
- Requiere que la secuencia codificante sea provista de señales para su expresión:
- Promotor
- Terminadora
- RBS (Región de Binding Secuencial)
- Codón de inicio
- Codón de término
Promotor
- Es la región de DNA que interacciona con el aparato transcripcional (RNA pol y factores auxiliares) para iniciar la transcripción de la secuencia contigua.
- Secuencia -35 y -10 (Caja Pribnow) son importantes para la interacción con el aparato transcripcional.
- Elementos promotores se encuentran en la región upstream (rio arriba) y downstream (rio abajo).
Secuencias Consenso
- Plac
- Ptrp
- PlacI
- PtRNATyr
- ApI
- Pt7
- PlagV5
- Ptac
- Ptrc
- Cada consenso tiene una secuencia específica para la interacción con el aparato transcripcional.
Tipos de Promotores
- Promotor constitutivo: de expresión continua, puede deteriorar a la célula por un gasto alto de energía continuo.
- Promotor regulable: es inducible solo bajo condiciones específicas en ciertas etapas del crecimiento de la célula.
- Promotor fuerte: tiene gran afinidad por la RNA polimerasa y por lo tanto la secuencia ubicada rio abajo será transcrita con alta frecuencia.
Identificar un Promotor
- Utilizar un gen reportero para identificar la actividad del promotor.
- Clonar la secuencia promotora para estudiar su función.
Mecanismo de Regulación
- La sobreexpresión de un gen puede generar un elevado costo energético y frenar el crecimiento de la célula.
- La toxicidad del producto génico puede ser evitada con el uso de promotores bien regulados.
- Un promotor fuerte puede generar entre 20 y 40% de la proteína total de la célula.
Aprende sobre la traducción in vitro, incluyendo maxicélulas y minicélulas, y su relación con la expresión génica. Entrena tus conocimientos sobre los sistemas celulares y su función en la biotecnología.
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