Théorie Cellulaire et Histochimie

Théorie Cellulaire

• Robert Hooke a introduit la notion de cellule en 1665 à partir de l'observation d'une tranche fine de liège au microscope.
• Schleiden et Schwann ont proposé en 1830 les deux premiers principes de la théorie cellulaire:
  • Tous les organismes sont constitués d'une ou plusieurs cellules.
  • La cellule est l'unité structurale et fonctionnelle des plantes et des animaux.
• Rudolf Virchow a proposé en 1855 le troisième principe de la théorie cellulaire:
  • Une cellule ne peut provenir que de la division d'une cellule déjà existante.
• Les avancées technologiques du XIXème siècle ont permis de développer la microscopie optique et d'étudier la structure des cellules.
• Les instruments et techniques de préparation, de coloration et de mise en évidence des structures cellulaires se sont améliorés entre 1850 et 1900.

Histochimie et Histoenzymologie

• L'histochimie permet de localiser et de détecter des constituants cellulaires ou tissulaires spécifiques (lipides, protéines, acides nucléiques) grâce à des réactions chimiques qui colorent les molécules.
• La réaction de Schiff (PAS) permet de mettre en évidence les résidus glucidiques.
• La méthode de Feulgen-Rossenbeck permet de mettre en évidence l'ADN.
• L'histoenzymologie localise les enzymes à travers une réaction enzymatique qui produit une coloration.
• L'histoenzymologie permet de mettre en évidence l'activité de la peroxydase dans le foie, la tyrosinase dans les mélanocytes, l'ATPase dans les cellules musculaires et la phosphatase acide dans les lysosomes.

Cytométrie en Flux

• La cytométrie en flux est une technique qui permet de dénombrer et de trier les cellules en analysant leur fluorescence.
• La cytométrie en flux est utilisée pour le typage des leucémies, la numération des populations lymphocytaires du sang, le suivi du cycle cellulaire et la mesure de la quantité d'ADN.

Fragmentation Subcellulaire par Centrifugation Différentielle

• La fragmentation subcellulaire est réalisée par une série de centrifugations successives qui séparent les différents constituants cellulaires.
• Cette technique permet d'isoler différents composants cellulaires, tels que les noyaux, les mitochondries, le réticulum endoplasmique et les ribosomes.

Electrophorèse sur Gel

• L'électrophorèse sur gel permet de séparer les protéines en fonction de leur taille et de leur charge.
• Les protéines sont d'abord dénaturées en présence de SDS, un détergent qui leur confère une charge négative.
• Les protéines migrent ensuite vers le pôle positif sous l'influence d'un champ électrique.

Western Blot

• Le Western Blot est une technique qui permet d'identifier une protéine spécifique à l'aide d'un anticorps marqué.
• Les protéines sont d'abord séparées par électrophorèse sur gel puis transférées sur une membrane de nitrocellulose.
• La membrane est ensuite incubée avec un anticorps spécifique de la protéine recherchée.

Techniques non Morphologiques

• D'autres techniques non morphologiques sont utilisées pour étudier les cellules:
  • La radioactivité: permet de suivre le devenir de molécules d'ADN ou de protéines
  • La culture cellulaire: primaire ou secondaire
  • Le fractionnement subcellulaire
  • La biologie moléculaire: techniques d'extraction, de purification et de détermination des séquences d'ADN, d'ARN et de protéines.
  • Les outils informatiques: recherche dans les bases de données de séquences de protéines ou d'acides nucléiques.

Points Clés à Retenir

• Les principes des différentes techniques décrites.
• Les applications de ces différentes techniques.